紫花前胡素通过激活PPAR信号通路抑制髓核细胞凋亡

目的:探讨紫花前胡素(DE)抑制髓核细胞凋亡的作用及其机制。方法:体外培养大鼠原代髓核细胞,使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)构建椎间盘退变(IDD)模型。采用CCK-8法检测不同浓度DE对IDD模型髓核细胞活力的影响,并确定DE的最佳实验浓度进行后续实验。采用TUNEL染色、流式细胞术和免疫印迹法检测DE对髓核细胞凋亡的影响。采用转录组测序技术(RNA-seq)检测并使用Limma包分析模型组与DE处理组基因表达差异,通过GSEA分析信号通路的变化并进行验证。结果:DE可提高IDD模型髓核细胞的活力,抑制髓核细胞凋亡(均P<0.05)。RNA-seq结果提示DE可激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路,进一步研究证实DE通过上调PPARα表达而增加髓核细胞活力、减少髓核细胞凋亡(均P<0.05)。结论:DE通过激活PPAR信号通路抑制IDD模型髓核细胞凋亡。

8种当归属植物中紫花前胡素含量的HPLC法测定

目的建立测定紫花前胡素含量的高效液相色谱方法,检测8种当归属植物中紫花前胡素的含量并比较其差异。方法采用HPLC法,使用AT.LICHROM ODS-C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),以pH 5.0的磷酸-磷酸二氢钠缓冲液(稀释10倍)∶乙腈(1∶1)为流动相,柱温30℃,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm。结果紫花前胡素在0.322～165μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9),加样回收率98.6%,RSD为1.3%。8种当归属植物均含有紫花前胡素,其中吉林产韩国当归含量最高(32.9 mg/g),鸭巴前胡次之(0.992 mg/g),再次为紫花前胡(0.527 mg/g);韩国当归和紫花前胡的花亦富含紫花前胡素。结论 8种当归属植物中紫花前胡素的含量存在差异,且同种植物不同部位也存在差异。该方法简便快捷,准确,适用于当归属及其亲缘属植物中紫花前胡素的定量分析。

朝鲜当归源紫花前胡素对LPS损伤THP-1细胞的研究

THP-1细胞在佛波酯(PMA)的作用下,分化为巨噬细胞样细胞后进行脂多糖(LPS)诱生炎性细胞因子,探讨朝鲜当归源紫花前胡素对LPS诱导TPH-1分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调节作用。结果表明,紫花前胡素能够提高LPS所致PMA诱导分化的THP-1的细胞活力的降低,并抑制LPS诱导产生的炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和MCP-1。紫花前胡素对LPS损伤的THP-1细胞具有保护作用,可能是通过抑制LPS刺激细胞所诱生的炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的水平而发挥炎症调节作用实现的。

紫花前胡素经Nox1/Akt信号通路对口腔鳞癌细胞增殖及侵袭的抑制作用

目的探讨紫花前胡素通过Nox1/Akt信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法SCC-25组(A组)及紫花前胡素低、中、高剂量组(B1组、B2组、B3组)均取10 mL SCC-25细胞(密度为5×106/mL),置有10%胎牛血清的DMEM培养基中,分别加入紫花前胡素0,20.0,40.0,80.0μg/mL,置CO2培养箱(37℃、5%CO2、2%O2、93%N2)培养72 h。采用四氮唑盐(MTT)比色法、结晶紫染色、MilliCell室、流式细胞仪、逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法、酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞增殖及凋亡水平、单克隆形成数、穿膜数、Nox1 mRNA及P-Akt mRNA表达水平,以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果B1组、B2组、B3组吸光度(OD)值、存活率水平、克隆形成数、穿膜数、Nox1 mRNA水平、P-Akt mRNA水平、MDA水平明显低于A组(P<0.05),且与剂量呈正相关;B1组、B2组、B3组细胞凋亡率水平、SOD及GSH-Px水平明显高于A组(P<0.05),且与剂量呈正相关。结论紫花前胡素能抑制口腔鳞癌细胞增殖、侵袭,并促进其凋亡,其机制与紫花前胡素抑制Nox1活性降低Akt的磷酸化水平,进而降低其氧化应激水平有关。

不同产地的当归中紫花前胡素HPLC法含量测定

目的:研究HPLC法测定当归中紫花前胡素的方法,明确不同产地当归中紫花前胡素的含量。方法:称取不同产地的当归制备供试品溶液和对照品溶液。设定HPLC法色谱柱为TIANHE C18(250mm×4.6mm,5μm)、流动相为H3PO4-Na H2PO4缓冲液:乙腈(1:1)、流速为1ml/min、检测波长为270nm,然后进行测定方法的精密度考察、稳定性考察、线性相关考察、加样回收率考察及重复性考察等5项考察,然后进行含量测定并获取了不同产地的当归中紫花前胡素含量。结果:HPLC法测定的以上5项考察结果均良好;六种不同产地当归中紫花前胡素含量[/RSD(%)]由低到高依次排序。结论:HPLC法测定不同产地当归中紫花前胡素含量简便、快捷、准确、有效。

HPLC法测定6种当归植物中紫花前胡素的含量

目的建立了6种当归植物中紫花前胡素的含量测定方法。明确当归属6种植物中紫花前胡素含量，并对其进行比较。方法HPLC法，色谱柱：TIANHE C18（250mm×4．6mm．5μm），流动相H3PO4-NaH2P04缓冲液（稀释10倍）：乙腈（1：1），流速：1mL·min^-1．检测波长：270nm。结果紫花前胡-t＇A0．343175μg·mL^-1之间线性关系良好（r=0．9999），平均回收率：99．3％（n=5），RSD：1．5％。结论6种植物中，每种植物的紫花前胡素含量有差异，且同一种植物里部位不同，前胡素含量也不同。建立的HPLC法简便易行，准确效率高。在实验研究中适用于当归类植物的紫花前胡素的定量测定。

紫花前胡素能降低大鼠肾小管上皮细胞活性氧并抑制顺铂诱导的细胞凋亡

目的研究紫花前胡素抑制顺铂诱导的NRK-52E正常大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用机制。方法先采用CCK-8法检测(0、10、20、40、80、100、150、200)μmol/L紫花前胡素、(0、5、10、20、30、40、50)μg/mL顺铂处理24 h对细胞增殖的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20μg/mL顺铂联合(10、50、100)μmol/L紫花前胡素刺激NRK-52E细胞,CCK-8法检测对细胞活力的影响。细胞分为正常对照组、20μg/mL顺铂刺激组、(10、50、100)μmol/L紫花前胡素处理组。倒置相差显微镜观察细胞形态改变,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡水平,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot法检测细胞凋亡标志蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)的蛋白水平。结果与正常对照组相比,顺铂能显著抑制细胞活性,其半数抑制浓度(IC50)约为20μg/mL;与模型组比较,紫花前胡素预处理后,细胞内ROS水平显著降低,c-caspase-3、c-PARP蛋白水平降低,细胞凋亡减少。结论紫花前胡素能降低NRK-52E细胞ROS水平并抑制顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡。

紫花前胡素对百草枯中毒大鼠急性肾损伤的保护作用及肾组织HSF1表达的影响

目的:探讨紫花前胡素对百草枯中毒大鼠急性肾损伤的保护作用及肾组织HSF1表达的影响。方法:Wistar大鼠分成5组:对照组、模型组、地塞米松组(20 mg/kg)、紫花前胡素低剂量组(40 mg/kg)、紫花前胡素高剂量组(80 mg/kg),模型组、地塞米松组、紫花前胡素低、高剂量组建立百草枯中毒大鼠急性肾损伤模型,6 h后地塞米松组、紫花前胡素低剂量组、紫花前胡素高剂量组立即接受相应药物灌胃;对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,试验周期为7 d。试验结束后,测定肾/体比值、24 h尿蛋白、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,观察大鼠肾组织病理学改变,RT-PCR法、Western-blot法、Elisa法测定肾脏中HSF1基因和蛋白水平及IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平升高(P<0.05),HSF1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、紫花前胡素低剂量组、紫花前胡素高剂量组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平降低(P<0.05),HSF1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与地塞米松组比较,紫花前胡素低剂量组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平升高(P<0.05),HSF1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);紫花前胡素高剂量组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、HSF1 mRNA和蛋白、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。对照组肾泡组织结构正常;模型组肾组织出现肾小球破坏,炎性细胞浸润及空泡变性,肾间质明显充血水肿,伴胶原蛋白沉淀;地塞米松组、紫花前胡素高剂量组肾损伤明显减轻,管腔呈现轻度狭窄,炎性细胞浸润明显减少;紫花前胡素低剂量组肾损伤较模型组减轻。结论:紫花前胡素对百草枯中毒大鼠急性肾损伤具有保护作用,可减轻大鼠急性肾损伤炎症反应;其机制与紫花前胡素能促进百草枯中毒大鼠急性肾损伤肾脏HSF1 mRNA和蛋白高表达,进而抑制肾炎症反应有关。

紫花前胡素通过降低OPN表达抑制根尖周炎进程

目的:探讨紫花前胡素对根尖周炎的影响及机制。方法:构建大鼠牙齿根尖周炎用药模型,分为正常对照组、模型观察组和加药处理组,用药处理的大鼠于第1周开始每天腹腔注射紫花前胡素溶液20 mg/kg或等量生理盐水,至第3周末处死。X线及HE染色观察病灶变化;免疫组化检测OPN表达情况。培养并用内毒素及紫花前胡素处理小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,CCK-8法检测细胞增殖水平,ELISA法检测IL-6的表达,Western blot检测OPN的变化。结果:生理盐水处理组的大鼠根尖病灶面积明显大于紫花前胡素处理组,且紫花前胡素组大鼠组织中的OPN的表达降低。经内毒素处理的RAW264.7细胞增殖水平及IL-6和OPN的表达水平升高,而紫花前胡素抑制细胞增殖能力以及IL-6和OPN的表达。结论:紫花前胡素可以抑制OPN的表达,干预根尖周炎的炎症反应。

紫花前胡素对CCl4致小鼠肝损伤的保护作用

目的:观察紫花前胡素(Decursin)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的改善作用并探讨其可能的机制。方法:50只健康雄性ICR小鼠随机分成5组,正常对照组,急性肝损伤模型组,紫花前胡素低、中、高剂量组。隔天灌胃给药,共30天;腹腔注射CCl4玉米油溶液诱导小鼠急性肝损伤,处死取血和肝脏。测定各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,小鼠肝脏组织中CYP2E1的含量,在体外检测紫花前胡素清除超氧阴离子及羟自由基的能力。结果:不同剂量紫花前胡素能够抑制CCl4引起的血清ALT及AST的升高,并且能够减少肝组织匀浆中CYP2E1的产生。此外,紫花前胡素在体外能够清除超氧阴离子及羟自由基。结论:紫花前胡素对CCl4导致的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,推测可能是通过抑制细胞色素酶CYP2E1的产生进而减少三氯甲基等自由基的产生以及自身的抗氧化能力实现预防和改善急性肝损伤。

紫花前胡素通过PI3K/Akt信号通路影响结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移

探讨紫花前胡素通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)通路对结直肠癌HT29、HCT116细胞增殖、凋亡及迁移的影响。分别用紫花前胡素(10、30、60、90μmol·L^(-1))对HT29和HCT116细胞进行干预处理,通过细胞增殖与活性检测-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测紫花前胡素对HT29和HCT116细胞增殖的抑制作用;通过克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;通过Ki67免疫荧光染色检测细胞增殖情况;通过流式细胞术分析细胞凋亡作用;通过划痕实验法检测细胞的划痕愈合面积;通过Transwell迁移法检测细胞的迁移情况;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、肿瘤抑制基因p53、PI3K和Akt蛋白表达的情况。结果表明,与对照组相比,紫花前胡素显著抑制细胞的增殖活力和集落数量,促进细胞凋亡,使Bcl-2蛋白表达明显下调,Bax蛋白表达明显上调。同时,紫花前胡素能抑制细胞划痕愈合及迁移能力,明显下调N-cadherin、Vimentin蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。此外,紫花前胡素能显著下调PI3K、Akt蛋白表达并上调p53蛋白表达。综上,紫花前胡素可能通过介导PI3K/Akt信号通路,调控上皮-间质转化(EMT)过程,从而影响结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移。

紫花前胡素通过JAK2／STAT3抑制EC109细胞的机制

目的探讨Janus激酶2／信号转导子和转录激活子3 （janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3 ,JAK2/STAT3 ）参与紫花前胡素（Deeursin，Dee）抑制食管鳞癌细胞增殖的潜在机制。方法Dec（20、40、80μmmol／L）处理ECl09细胞48h后，MTT法检测细胞活性；TUNEL标染凋亡细胞；荧光法检测线粒体氧化应激水平；免疫印迹法检测JAK2／STAT3通路和凋亡相关蛋白含量。此外，联合应用特异性阻断JAK2／STAT3（AG490）后，从在体和离体水平观察Dec对EC109的抑制能力。结果相对于对照组，不同浓度的Dec显著下调p-JAK2[至（55．89±6．04）％]和p-STAT3[至（45．27±8．65）％]表达，抑制ECl09细胞活性（至0．43±0．078），增加凋亡率[至（35．31±8．41）％]，降低MMP水平[至（37．23±6．89）％]，提高活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS）含量至（231．81±19．63）％，减弱谷胱甘肽（glutathione，GSH）活性至（46．78±6．91）％，（P〈0．05），且呈“剂量依赖性”；但未对正常食管上皮HET-1A细胞活性产生明显影响（P〉0．05）。同时，Dec下调Bcl2，上调Bax，并增加Caspase-3的裂解（P〈0．05）。离体和在体水平联合应用AG490均增强Dec抗EC109细胞的能力（P〈0．05）。结论Dec通过抑制JAK2／STAT3通路，激活线粒体氧化应激介导的凋亡，从而发挥抗食管鳞癌的作用。

UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中紫花前胡素的血药浓度及其药动学研究

目的建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中紫花前胡素的血药浓度,并用于口服和静脉注射后紫花前胡素的药动学特征研究。方法大鼠血浆样本采用乙腈沉淀法去除蛋白。使用地西泮作为内标,UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)为分离柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,分析时间为4.0 min。用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,多反应监测方式进行定量分析,紫花前胡素m/z 329.0→229.0和内标m/z 285.1→193.3。结果紫花前胡素在1~60 ng·mL^-1内线性关系良好,定量限为1 ng·mL^-1。日内、日间精密度RSD均<14%,准确度范围在88.5%~107.5%,回收率>93.3%,基质效应在89.3%~93.5%。结论本方法具备灵敏、快速、选择性好的特点,可应用于紫花前胡素大鼠药动学研究。

紫花前胡化学成分的研究

目的 研究中药紫花前胡 [Peucedanumdecursivum (Miq .)Maxim]根的化学成分。 方法 用硅胶柱色谱和制备型高效液相色谱进行分离纯化 ,用光谱分析和化学方法鉴定其结构。结果 从紫花前胡根中分得 7个线型吡喃香豆素类化合物 ,其结构分别鉴定为 3′(S) hydroxy 4′(R) angeloyloxy 3′,4′ dihydroxanthyletin (1) ;3′(S) acetoxy 4′(R) hydroxy 3′,4′ dihydroxanthyletin (2 ) ;3′(S) acetoxy 4′(R) angeloyloxy 3′ ,4′ dihydroxanthyletin (3) ;Pd C IV (4 ) ;Pd C II (5 ) ;(+ ) 3′S Decursinol(6 ) ;(+ ) trans Decursidinol(7)。结论 化合物 1和 2为新化合物 ,分别命名为紫花前胡素D和紫花前胡素F ;6和

东当归化学成分研究及定量分析

从当归属植物东当归的根的乙醇溶液中分离得到了4个化合物,通过理化特性和波谱分析分别鉴定为双(5-甲酰基糠基)醚(bis(5-formylfurfuryl)ether,1)、5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethyl-2-furaldehyde,2)、豆甾醇(stigmasterol,3)、十七烷酸(heptadecanoic acid4,)。所有化合物均为首次从该植物中分离得到,其中1为首次从该属植物中分离得到。采用高效液相色谱法对东当归所含该属特征活性成分紫花前胡素进行了定量分析。

RP-HPLC同时测定不同产地全当归活性成分含量的应用价值

目的探讨反相高效液相色谱法（RP．HPLC）同时测定不同产地全当归中阿魏酸、紫花前胡素及藁本内酯含量的应用价值。方法采用Agilent Eclipse XDB C18（250．0mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈（A）-0．05％甲酸溶液（B），梯度洗脱（0—10min，10％～15％A；10～55min，15％～85％A；55．1min，10％A；55．1～60min，10％A），柱温25℃，流速1．0ml／min，检测波长320nm。结果阿魏酸、紫花前胡素及藁本内酯在21．24～637．20、0．2528～7．5840、202．40～6072．00ng范围内的线性关系良好。平均回收率分别为99．53％、97．99％、99．65％，RSD均〈3．00％。结论该测定方法准确度、灵敏度高，分离效果理想，可为完善全当归质量标准评价提供依据。