低苯丙氨酸紫苏肽制备工艺研究

为丰富低苯丙氨酸特殊医学用途配方食品,本研究以紫苏籽粕(脱脂)为原料,通过单因素及响应面分析法优化双酶水解工艺,同时探究活性炭吸附游离苯丙氨酸的条件。结果表明,双酶法水解紫苏蛋白以制备低苯丙氨酸紫苏肽的最佳工艺为:选择中性复合蛋白酶(pH 7.0)和氨基肽酶(pH 8.0),分别在55℃条件下依次水解紫苏籽粕5.0、5.5 h。采用200目活性炭吸附水解后游离的苯丙氨酸,经高效液相色谱检测,紫苏蛋白中苯丙氨酸释放率为96.54%,苯丙氨酸去除率为97.64%,产物中苯丙氨酸质量分数为1.10 mg/g,满足《食品安全国家标准特殊医学用途配方食品通则》(GB 29922—2013)中对苯丙氨酸含量的要求。本研究为低苯丙氨酸特殊医学用途配方食品的制备提供了一种有效的方法,对于推广这类食品有重要的现实意义。

紫苏肽制备工艺研究

以脱脂紫苏粕为原料,在预先采用酸性乙醇-水溶剂法脱除植酸、单宁等物质后,采用Alca-lase碱性蛋白酶进行酶解,制备紫苏肽。以水解度为指标,分别探讨水解时间、水解温度、pH、底物质量浓度、酶用量等因素对水解反应的影响。通过正交实验,确定最佳水解工艺条件为:底物质量浓度30 g/L,pH 9.5,水解温度60℃,酶用量7%,水解时间4.0 h。该条件下,水解度可达38.75%,氮回收率为87.62%。对粗产品进行脱色,确定较佳脱色工艺条件为:活性炭用量5%,pH 3,脱色温度60℃,脱色时间40 min。脱色液经冷冻干燥后得产品,其蛋白质含量为67.1%,相对分子质量小于1 000的组分占总量的85.3%。

利用大孔吸附树脂对紫苏肽脱盐的研究

利用DA201-C大孔吸附树脂对紫苏肽进行脱盐处理,优化其脱盐工艺条件。结果表明,DA201-C大孔吸附树脂对紫苏肽溶液脱盐较佳工艺条件为:上样质量浓度20 mg/mL,上样流速1.0 BV/h,2.0 BV/h的流速水洗脱盐,解吸剂为70%乙醇,流速为1.5 BV/h。在此条件下,经过大孔吸附树脂脱盐处理后紫苏肽的灰分由20.6%降到0.93%,蛋白质含量由67.1%(N×6.25,干基)提高到86.0%(N×6.25,干基)。

基于体外实验和网络药理学探讨紫苏粕多肽抗氧化应激的作用机制

利用体外实验和网络药理学的方法对紫苏粕多肽抗氧化应激的物质基础和作用机制进行研究。首先对紫苏粕碱性蛋白酶酶解液进行超滤分级,以得率和抗氧化活性为指标,筛选出级分UF-4(<1 kDa),考察其对H_(2)O_(2)诱导的4T1细胞氧化应激模型的保护作用,发现UF-4可剂量性显著降低胞外乳酸脱氢酶活性和胞内丙二醛含量,显著提高胞内谷胱甘肽的含量及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性,说明UF-4具有一定的抗氧化作用。在此基础上,运用网络药理学的方法,从UF-4中筛选出潜在活性物质18种,其对应靶点中与抗氧化作用相关的有176个,通过蛋白互作分析得到6个核心靶点,GO和KEGG富集分析表明UF-4通过多靶点、多途径的方式发挥抗氧化应激作用,主要涉及细胞凋亡、脂质与动脉粥样硬化、钙调节、炎症等生物学过程。分子对接进一步验证了18种潜在活性成分与核心靶点间存在较强的相互作用。总之,该研究初步表明UF-4抗氧化应激过程中多组分、多靶点、多通路的作用特点,为后期紫苏粕多肽抗氧化作用的研究与应用提供理论依据及参考。

混菌发酵紫苏粕小肽提取工艺优化及体外抗氧化活性研究

以混菌发酵的紫苏粕为原料,通过控制提取的料水比、温度、时间、pH,以小肽的得率为指标,优化提取工艺,并考察了发酵前后小肽的DPPH自由基清除能力、羟自由基(·OH)清除能力和还原力的变化。试验结果表明,当碱性蛋白酶添加量为5%(质量分数)时的最佳提取工艺条件为:pH 8.5,酶解温度45℃,酶解时间210 min,底物质量分数5%,此条件下小肽得率(32.56±1.25)%;此时发酵紫苏粕小肽的DPPH自由基清除率、·OH清除率和还原力最高分别为(90.00±4.58)%、(100.00±0)%和2.49±0.09,未发酵紫苏粕小肽的DPPH自由基清除率、·OH清除率和还原力最高分别为(84.00±2.65)%、(96.00±2.00)%和1.87±0.10。发酵后紫苏粕中小肽比未发酵紫苏粕小肽DPPH自由基清除率、·OH清除率和还原力分别提高了6%、4%、33%。

紫苏籽肽对环磷酰胺致性功能损伤大鼠的改善作用

目的:研究紫苏籽肽对环磷酰胺造模大鼠性功能损伤的改善作用。方法:80只SPF级6周龄雄性SD大鼠随机分为8组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠通过注射20 mg/(kg mb·d)环磷酰胺造模,随后各干预组大鼠经不同剂量的紫苏籽肽和紫苏籽蛋白灌胃处理。用酶联免疫吸附测定、实时荧光定量聚合酶链式反应、苏木精-伊红染色分别检测大鼠血清中相关细胞因子、蛋白和激素水平,睾丸中相关基因表达量以及睾丸和肾脏组织的病理形态变化,同时检测睾丸和肾脏中超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量,测定睾丸和肾脏以及免疫器官的脏器指数。结果:模型组与空白组相比,大鼠血清睾酮、游离睾酮、促黄体生成素、卵泡刺激素、白细胞介素2、干扰素γ、免疫球蛋白G水平均显著下降,相关基因表达量显著降低,超氧化物歧化酶活力显著降低,丙二醛含量显著升高,脏器指数显著下降(P<0.05);不同剂量紫苏籽肽和蛋白处理组大鼠的上述指标均有不同程度改善,其中紫苏籽肽对于睾丸和肾脏氧化应激状态以及血清激素水平的影响显著(P<0.05)。结论:紫苏籽肽可以有效改善环磷酰胺造成的大鼠生殖损伤状况从而达到改善性功能的作用,并提高大鼠血清白细胞介素2、干扰素γ、免疫球蛋白G水平和免疫器官脏器指数。

牡蛎肽和紫苏籽肽及其复配物对环磷酰胺致雄性大鼠性功能损伤的改善作用

目的:通过血清激素水平、肾脏和睾丸脏器指数、肾脏和睾丸氧化应激状态以及组织结构变化评价牡蛎肽和紫苏籽肽以及二者复配对大鼠性功能损伤的改善作用。方法:制备牡蛎肽和紫苏籽肽,检测二者的氨基酸组成及相对分子质量;大鼠腹腔注射环磷酰胺建立性功能损伤模型,通过灌胃不同剂量的肽及复配组评价大鼠肾脏和睾丸指数,检测大鼠血清相关指标,肾脏和睾丸氧化应激状态和组织结构变化,分析肽对模型大鼠上述指标的影响。结果:牡蛎肽和紫苏籽肽及复配组都可不同程度地提高大鼠血清相关指标和脏器指数,改善肾脏和睾丸氧化应激状态,调节病理形态。结论:牡蛎肽和紫苏籽肽以及复配组都对大鼠性功能有一定的改善和调节作用,复配组的综合作用效果优于单一肽干预组。

紫苏籽肽及其协同硒解酒护肝作用研究

目的:建立体外酒精肝细胞模型,评价紫苏籽肽复硒对酒精肝细胞模型的保护能力,揭示紫苏籽肽复硒解酒护肝的潜在作用。方法:采用油酸和乙醇联合诱导JHH7肝癌细胞建立酒精肝细胞模型,在建立的模型中分别添加紫苏籽肽单独作用组及紫苏籽肽复硒组,采用MTT比色法检测细胞存活率、赖氏法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力、GPO-PAP法检测甘油三酯(TG)含量、GOD-PAP法检测总胆固醇(TC)含量、辅酶I法检测乙醇脱氢酶(ADH)活力、硝基苯腙法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力、WST-8法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平。结果:紫苏籽肽单独作用组及紫苏籽肽复硒组均能降低ALT、AST、TC、TG、LDH、MDA水平,提高SOD、ADH水平,且紫苏籽肽复硒组要优于紫苏籽肽单独作用组。结论:紫苏籽肽复硒具有较好的解酒护肝作用,为开发相关保健食品奠定了基础。