异紫草酸纯化提取工艺及抗氧化活性研究

探究丹参多酚酸中异紫草酸的最佳分离纯化方法及其体外抗氧化活性。通过MCI Gel色谱柱、LH-20凝胶色谱柱、动态轴向加压制备液相联用分离得到高纯度异紫草酸,并与传统硅胶柱层析法分离效果进行对比。通过·OH清除实验、DPPH自由基清除实验和铁氰化钾还原实验测定异紫草酸的体外抗氧化活性。所建立方法分离得到的异紫草酸纯品归一化法百分含量达到98.7%,传统硅胶柱层析法无法分离得到异紫草酸纯品。异紫草酸对·OH和DPPH的半数清除率浓度(IC50)分别为0.277 mg·mL^(-1)、17.43µg·mL^(-1),其抗氧化能力与浓度剂量呈现依赖关系。MCI-Gel/LH-20凝胶/C18键合填料柱层析法可用于高纯度异紫草酸的分离。异紫草酸具有清除自由基及抗氧化活性,可用于治疗心脑血管疾病药物的开发。

紫草酸甲酯抑制海马Nox4介导的铁死亡改善小鼠术后学习记忆障碍

目的探讨紫草酸甲酯(PAME)对小鼠术后学习记忆障碍的影响及机制。方法将C57BL/6J雄性小鼠随机分为Sham组、手术组、手术+PAME组(PAME组)、手术+NADPH氧化酶4(Nox4)腺相关病毒过表达组(Nox4过表达组)、手术+Nox4腺相关病毒空载组(AAV空载组)、手术+PAME+Nox4过表达组(PN组)。手术模型采用剖腹探查术,PAME(20 mg/kg)给药时间为术后连续灌胃7 d,Nox4腺相关病毒在手术前28 d注射到海马脑区。Morris水迷宫实验和条件性恐惧实验检测小鼠学习记忆能力;免疫荧光观察Nox4表达变化;Western blot法检测Nox4、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达;分光光度法检测活性氧(ROS)和铁含量。结果与Sham组相比,手术组、Nox4过表达组、AAV空载组小鼠学习记忆能力下降,Nox4、ACSL4表达升高,GPX4表达降低,ROS、铁含量增加,PAME治疗后小鼠术后学习记忆能力改善,海马神经元Nox4和铁死亡减轻。结论PAME治疗后可提高术后小鼠学习记忆能力,与其抑制海马Nox4介导的铁死亡有关。

紫草酸B的抗HIV-1活性研究

目的:研究紫草酸B(lithospermic acid B,LAB)在体外和细胞培养内的抗HIV-1作用及小鼠口服后的血清在细胞培养内的抗HIV-1活性。方法:在体外无细胞系统内采用放射性核素3H掺入法、荧光方法和酶联免疫吸附法分别测定其对HIV-1逆转录酶、蛋白酶和整合酶的半数抑制浓度(IC50);以传代人T淋巴细胞MT-4细胞感染实验病毒株HIV-1ⅢB测定其对细胞的毒性和对HIV-1P24抗原的抑制作用;给小鼠单剂量灌胃LAB200mg.kg-1后不同时间取血,分离血清,测定其在MT-4细胞培养内对HIV-1ⅢB P24抗原的抑制率。结果:LAB在体外抑制HIV-1整合酶和蛋白酶,其IC50分别为(7.91±1.59)和(34.84±1.11)μmol.L-1,对HIV-1逆转录酶无效。在MT-4细胞培养内对细胞的半数有毒浓度(CC50)为(13.31±3.05)μmol.L-1,对MT-4细胞感染HIV-1ⅢB后的P24抗原表达有抑制作用,IC50为(0.240±0.003)μmol.L-1,选择指数为54;与临床应用的HIV-1逆转率酶抑制剂核苷类齐多夫定(AZT)和非核苷类奈韦拉平(NVP)联合用药,均有协同抗HIV-1的作用,联合指数(CI值)分别为0.09和0.41。小鼠灌胃LAB200mg.kg-1后血清在细胞培养内有抑制HIV-1ⅢB P24抗原的活性。结论:LAB在MT-4细胞培养内抑制HIV-1的P24抗原表达,与临床应用的逆转录酶抑制有协同抗HIV-1的作用,但小鼠口服生物利用度较低。

NMR法同时测定注射用丹参多酚酸中的迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和甘露醇

目的建立核磁共振（NMR）法同时测定注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和甘露醇的含有量。方法采用BRUKER AVANCEⅢ600超导核磁共振波谱仪采集谱图;质子频率为600.23 MHz;3-（三甲基硅烷）丙酸-d4钠盐为内标。结果迷迭香酸在1.685~0.105 mg/m L（r2=0.999 3）、紫草酸在1.235~0.077 mg/m L（r2=0.999 4）、丹酚酸B在16.21~1.013 mg/m L（r2=0.999 7）、甘露醇在12.54~0.784 mg/m L（r2=0.999 5）范围内均呈良好的线性关系,加样回收率分别为104.4%、105.6%、104.1%和102.5%,RSD值分别为1.5%、1.7%、2.3%和2.2%。结论该方法可同时测定注射用丹参多酚酸中的主要化学成分和辅料。

紫草酸镁B抑制缺血/再灌注心肌细胞c-Jun N-末端激酶3 mRNA的表达

目的 探讨c JunN 末端激酶 3(c JunN terminalkinase 3,JNK3)在缺血 /再灌注心肌细胞损伤中的作用 ,及紫草酸镁B对缺血 /再灌注心脏具有保护作用的机制。方法 复制大鼠Langendorff心肌缺血 再灌注损伤模型 ,用原位杂交技术检测心肌细胞JNK3mRNA的表达 ,并观察紫草酸镁B对JNK3表达的影响。结果 图像分析显示 ,心肌缺血 30min 再灌注 30min时 ,JNK3表达明显高于非灌注组和对照组。 0 1,1和 10 μmol·L- 1 紫草酸镁B可以抑制缺血 /再灌注时JNK3mRNA的表达。结论 紫草酸镁B可通过抑制JNK3的表达以降低JNK的功能 ,从而减少心肌细胞凋亡的发生 ,对缺血 /再灌注心脏产生保护作用。

紫草酸对Sepsis大鼠下肢深静脉血栓的影响及作用机制

目的探讨紫草酸对脓毒血症大鼠下肢深静脉的影响及作用机制。方法建立脓毒血症下肢深静脉大鼠模型,随机分为空白对照组、低分子肝素钠组、小剂量紫草酸组、中剂量紫草酸组、大剂量紫草酸组各10只。检测血栓素(TX)B2、6酮前列腺素(6-keto-PG)F1α活性,纤溶酶原激活物(t-PA)、凝血酶原激活物抑制因子(PAI)-1、血浆纤溶酶原(PLG)及抗凝血酶(AT)-Ⅲ活性,TXB2、6-keto-PGF1α蛋白表达。结果中剂量紫草酸组病死率、活动性出血发生率显著低于其他4组(P<0.05)。中剂量紫草酸组TXB2活性、TXB2蛋白表达显著低于其他4组;6-keto-PGF1α、t-PA、PAI-1、PLG、AT-Ⅲ活性、6-keto-PGF1α蛋白表达显著高于其他4组(均P<0.05)。结论紫草酸能降低Sepsis大鼠下肢深静脉血栓活动性出血发生率,通过调控TXB2和6-keto-PGF1α蛋白,提高t-PA、PAI-1、PLG、AT-Ⅲ活性,从而抑制血栓形成。

紫草酸通过其抗氧化作用及激活PI3K/Akt信号通路抑制氧化应激导致的骨髓间充质干细胞的凋亡（英文）

目的尽管骨髓间充质干细胞的应用在骨科领域展现出巨大的潜力,但因移植后面临着严峻的氧化应激的环境,使得其应用受到限制。本实验将研究紫草酸对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞早期凋亡的抗凋亡和抗氧化作用的研究。方法本次研究使用过氧化氢诱导的氧化应激的细胞模型,利用相关试剂盒检测间充质干细胞内活性氧和超氧化物歧化酶水平,蛋白免疫印迹检测胞内p-AKT、Bax、Bcl-2的蛋白表达情况。结果紫草酸能显著抑制过氧化氢诱导的细胞核固缩,降低胞内活性氧的水平和增强超氧化物歧化酶的活性;而且,它抑制过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞凋亡与上调Bcl-2、p-Akt蛋白表达,下调Bax蛋白表达有关,其抑制作用能被PI3K抑制剂LY294002阻断。结论紫草酸能抑制过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞的氧化应激损伤,其抗氧化应激可能与它的抗氧化性及部分调节PI3K/Akt信号通路有关。因此,紫草酸预处理骨髓间充质干细胞将有助于改善干细胞移植治疗骨科疾病过程中的细胞存活的问题。

紫草酸B的药理作用研究进展

目的 提供近年来国内外对紫草酸B的研究进展。方法 根据已有文献 ,对紫草酸B的来源、理化性质及生物活性进行综述。结果与结论 紫草酸B是一种缩酚酸类多羟基化合物 ,具有广泛药理功能 :改善肾功能、防治心血管疾病、抗氧化、抗缺血损伤、保肝、抗纤维化、防治神经毒性、抗凝、抗炎症等多种活性 ,有开发价值。

紫草酸通过抑制凋亡及磷酸化P65改善脂多糖对H9c2细胞的损伤

目的探讨紫草酸对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的H9C2细胞损伤的保护作用。方法本实验分组为5组:对照组、LPS组、LPS加紫草酸组(低、中、高剂量)。LPS浓度为2mg/ml,紫草酸浓度分别为5、10、20μmol/L。药物干预时间为12h。用CCK8检测药物对细胞存活率影响,用TUNEL、RT-PCR及Western blot法检测凋亡蛋白及信号通路蛋白的变化。结果紫草酸对H9C2细胞具有低毒性,它可以降低胞内凋亡的水平,降低炎性反应,且具有浓度依赖性以及时间依赖性。结论紫草酸可以改善LPS诱导H9C2细胞损伤。

UPLC法同时测定冠心丹参胶囊中紫草酸和迷迭香酸的含量

目的：建立同时测定冠心丹参胶囊中紫草酸和迷迭香酸含量的方法。方法：采用超高效液相色谱法。色谱柱为ACQUITY UPLC-BEH C18，流动相为0.1％甲酸-甲醇溶液（梯度洗脱），流速为0.3 ml/min，检测波长为280 nm，柱温为30℃，进样量为5μl。结果：紫草酸和迷迭香酸的检测质量浓度线性范围分别为0.019～0.76、0.005～0.2 mg/ml（r＝0.9999、0.9997）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2％；加样回收率分别为97.34％～101.24％（RSD＝1.57％，n＝6）、98.30％～100.39％（RSD＝0.86％，n＝6）。结论：该方法操作简便、结果准确、重复性好，可用于冠心丹参胶囊中紫草酸和迷迭香酸的含量测定。

丹参多酚酸提取物中异紫草酸的结构确定

目的确定从丹参多酚酸提取物中分离得到的1个紫草酸同分异构体(异紫草酸)的结构。方法利用质谱、核磁共振、化学转化以及ECD等方法确定其化学结构。结果该化合物鉴定为[(2S,3S)-4-(2-羧基乙烯基)-2-(3,4-二羟基苯基)-2,3-2H-7-羟基-3-苯骈呋喃羧酸-3-[(1R)-1-羧基-2-(3,4-二羟基)乙基]酯](异紫草酸)。结论总结了紫草酸同分异构体核磁数据的规律,进一步明确了异紫草酸的平面结构并首次确定了异紫草酸的立体结构。

紫草酸对高糖诱导的内皮细胞炎症和凋亡的作用及机制

目的:探讨紫草酸(LA)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症和凋亡的作用及机制。方法:体外培养HUVECs并将对数生长期细胞随机分为5组,即正常糖浓度组(培养基中葡萄糖浓度为1 mg/mL)、高糖组(培养基中葡萄糖浓度为6 mg/mL)、高糖+LA低剂量组(5μg/mL)、高糖+LA中剂量组(10μg/mL)和高糖+LA高剂量组(20μg/mL)。培养处理24 h时,用活细胞计数(CCK-8法)检测药物对细胞存活率的影响;RT-PCR法检测IL-1β、IL-6和IL-10的转录水平;采用免疫荧光染色检测细胞核因子κB(NF-κB)的磷酸化和核转位水平;采用Western Blot法检测炎症和凋亡因子的蛋白表达;采用Tunel染色检测细胞凋亡水平。结果:高糖组炎症因子IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平、细胞NF-κB的磷酸化和核转位水平及细胞凋亡比例高于正常糖浓度组(P<0.05);而LA处理后能抑制高糖诱导的炎症和凋亡因子表达,同时减轻NF-κB的磷酸化和核转位水平及细胞凋亡(P<0.05);高糖+LA组内3个不同剂量间相比,浓度越高,LA的抗凋亡和抗炎作用更显著(P<0.05)。机制方面,Western Blot显示LA能激活AMPKα/FoxO3信号通路。结论:LA作用于高糖诱导的HUVECs,能通过抑制NF-κB的磷酸化和核转位水平改善细胞炎症,并激活AMPKα/FoxO3信号通路抑制细胞凋亡。

高温高压下丹酚酸B,紫草酸水溶液化学变化的研究

目的:考察中药丹参中主要活性成分丹酚酸B,紫草酸在高温高压处理过程中的化学成分变化,探索其变化机理。方法:采用高温高压(120℃,0.2 MPa)条件对丹参提取物、丹酚酸B及紫草酸进行处理,研究成分的变化情况及稳定性。结果:丹酚酸B与紫草酸经高温高压处理后的主要产物为丹酚酸A;紫草酸是丹酚酸B反应的中间产物,在相同条件下比丹酚酸B更容易转化为丹酚酸A;丹酚酸A在高温高压条件下不稳定,能够继续分解为其他小分子化合物。结论:该实验为丹酚酸A的获取提供了新的制备方法。

HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量

目的:建立用HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B 4个水溶性成分的方法,并对6批丹参多酚酸进行测定。方法:采用Venusil XBP C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.02%磷酸水-0.02%磷酸80%乙腈水梯度洗脱;流速1 mL.min-1;检测波长280 nm;柱温30℃。结果:丹酚酸D线性回归方程为A=13 979C-1 739.2,R2=0.999 6,线性范围2.11～21.10 mg.L-1,平均回收率100.12%(RSD 1.52%),迷迭香酸线性回归方程为A=42 007C-448.58R2=0.999 7,线性范围3.94～39.40 mg.L-1,平均回收率100.60%(RSD 1.83%);紫草酸线性回归方程A=23 061C-6 319.2,R2=0.999 6,线性范围4.14～41.40 mg.L-1,平均回收率102.47%(RSD 1.53%);丹酚酸B线性回归方程A=22 186C-21 435,R2=0.999 8,线性范围为53.90～539.00 mg.L-1,平均回收率104.53%(RSD 2.00%)。结论:方法操作简单,且重复性好,可用于丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量测定。

丹红注射液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B在大鼠血浆中的浓度测定

目的:建立测定大鼠血浆中丹红注射液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B浓度的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm5,μm);流动相为乙腈-0.4%的磷酸水,梯度洗脱;流速为1.0 mL.min-1;检测波长为288 nm。结果:迷迭香酸在4.0～100.0μg.mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9925);回收率在85.0%～101.4%之间,日内、日间RSD<8%;紫草酸在4.0～100.0μg.mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.991 1);回收率在84.4%～93.9%之间,日内、日间RSD<9%;丹酚酸B在2.0～200.0μg.mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.998 6);回收率在80.0%～97.4%之间,日内、日间RSD<5%。结论:本文所建立的方法灵敏度好、准确率高,可用于丹红注射液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的药代动力学研究。

紫草酸在大鼠体内的药动学研究

目的建立紫草酸血药浓度的高效液相色谱测定方法,研究其在大鼠体内药代动学变化规律。方法大鼠静脉注射紫草酸10mg/kg后,于不同时间点采血,用HPLC测定其血药浓度,并用DAZ软件拟合,计算药代动力学各参数。结果紫草酸血药浓度的回归方程的线性关系良好,最低检测浓度为0.2μg/ml。药时曲线符合二室开放模型。结论首次建立了紫草酸血药浓度的HPLC测定方法。方法操作简单、专属性强、灵敏度高。静脉注射紫草酸,其体内过程的药时曲线符合二室开放模型,具有体内分布快、血药浓度下降迅速等特点。

一测多评法测定丹酚酸A原料药中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸C

目的建立一测多评法测定丹酚酸A原料药中特定杂质迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸C。方法采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相0.2%磷酸–乙腈,梯度洗脱,检测波长286 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温25℃,样品室温度4℃,进样量20μL。以丹酚酸A为内标,建立丹酚酸A原料药中特定杂质(紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C)的相对校正因子;分别采用一测多评法和外标法测定丹酚酸A原料药中特定杂质,并比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异性。结果丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、迷迭香酸、紫草酸均在0.2~20μg/mL与峰面积呈良好线性关系。在线性浓度范围内,迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸C与丹酚酸A间的相对校正因子分别为1.52、2.09、2.33、1.06。一测多评法计算值与外标法实测值无显著性差异。结论一测多评法可用于丹酚酸A原料中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸C的测定。

紫草酸对高糖诱导人RVECs凋亡及Notch1、PARP-1表达水平的影响

目的探究不同剂量紫草酸对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(RVECs)凋亡及Notch1、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)表达的影响。方法体外培养人RVECs,将对数生长期细胞分为五组,即正常糖浓度组、高糖组、高糖+紫草酸低剂量组、高糖+紫草酸中剂量组和高糖+紫草酸高剂量组。培养处理12及24 h时,分别观察各组人RVECs细胞凋亡、增殖及细胞周期变化情况,并检测各组人RVECs中Notch1、PARP-1的m RNA及蛋白表达水平。结果培养处理12及24 h时,高糖组细胞凋亡比例、细胞周期S期、细胞增殖率及PARP-1 m RNA、蛋白相对表达水平均高于正常糖浓度组,而细胞周期G0/G1期、Notch1 m RNA、蛋白相对表达水平均低于正常糖浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05);高糖+紫草酸组细胞凋亡比例、细胞周期S期、细胞增殖率及PARP-1 m RNA、蛋白相对表达水平均低于高糖组,而细胞周期G0/G1期、Notch1 m RNA、蛋白相对表达水平均高于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05);高糖+紫草酸组内3个不同剂量间相比,浓度越高其细胞凋亡比例、细胞周期及细胞增殖与Notch1、PARP-1的m RNA及蛋白相对表达水平变化幅度越大,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论紫草酸作用于高糖诱导人视网膜血管内皮细胞,能够有效抑制细胞调亡,促进Notch1表达,降低PARP-1表达,其作用效果具有剂量依赖性。

HPLC法测定软脉灵口服液中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷

目的建立HPLC法测定软脉灵口服液中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷。方法采用Venusil XBP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5µm);以乙腈–0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为330 nm(0~17 min检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)、280 nm(17~50 min检测迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10µL。结果毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷分别在1.23~30.75、0.59~14.75、0.71~17.75、1.47~36.75、9.78~244.50、6.57~164.25、1.19~29.75μg/mL线性关系良好(r≥0.9991);平均回收率分别为99.14%、97.62%、96.84%、98.96%、100.11%、99.46%、98.92%,RSD值分别为1.15%、1.27%、1.02%、0.96%、0.65%、1.41%、0.87%。结论该方法操作简便、重复性好,为软脉灵口服液中多指标质量评价和临床应用提供参考依据。

HPLC法测定活力苏口服液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷

目的建立高效液相色谱法同时测定活力苏口服液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长280 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。结果迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷分别在0.59~14.75、0.81~20.25、5.07~126.75、1.86~46.50、1.18~29.50、8.79~219.75、2.07~51.75μg/m L线性关系良好(r≥0.9991);各成分平均加样回收率分别为96.95%、97.80%、99.43%、98.53%、99.19%、100.01%、98.77%,RSD值分别为1.13%、1.28%、0.91%、0.88%、0.97%、0.62%、1.33%。结论所建立的方法操作便捷,结果准确,为全面评价活力苏口服液的内在产品质量提供了科学依据。