紫草醌通过调控JNK信号通路抑制卵巢癌细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探索紫草醌对卵巢癌细胞增殖、凋亡以及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路表达的影响。方法将体外培养人卵巢癌细胞(SKOV-3)细胞分为对照组及紫草醌2.5、5和10μmol/L组。检测各组细胞增殖和凋亡情况,蛋白质印迹检测增殖细胞核抗原(PCNA)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达和c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)的磷酸化。结果紫草醌对SKOV-3细胞增殖的抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)=10.59μmol/L;与对照组比较,紫草醌中剂量组和紫草醌高剂量组细胞存活率和克隆形成率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中PCNA、(p-JNK1/2)/(JNK1/2)蛋白表达明显下降(P<0.05),cleaved Caspase-9/Caspase-9、cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论紫草醌可以抑制SKOV-3细胞增殖,抑制JNK信号通路,诱导细胞凋亡。

紫草醌通过调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路影响骨微环境和脊柱肿瘤细胞的异质性的机制

目的评价紫草醌在体内对脊柱肿瘤的潜在治疗作用及其作用机制。方法成功建立脊椎肿瘤模型后,将大鼠分为假手术组(正常大鼠,仅进行手术操作+等量0.9%氯化钠溶液灌胃)、模型组(脊椎肿瘤模型大鼠+等量0.9%氯化钠溶液灌胃)和紫草醌组(脊椎肿瘤模型大鼠+100 mg/kg的紫草醌溶液灌胃),每组10只,均连续灌胃2周。采用苏木精-伊红(HE)染色对大鼠脊椎瘤形态进行观察,利用转染法、TUNEL法对大鼠脊椎瘤的凋亡情况进行测定,通过实时PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测紫草醌对大鼠脊柱肿瘤的细胞因子迁移率族蛋白B1(HMGB1)、TOLL样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)mRNA及相关蛋白的表达量。结果治疗后3、7和14 d紫草醌组BBB得分随时间而显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后3、7和14 d,与假手术组相比,模型组和紫草醌组BBB得分显著降低,紫草醌组则较模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果表明,与模型组相比,紫草醌骨髓组织结构的疏松、中性粒细胞浸润等组织学损伤明显减轻。与假手术组相比,模型组和紫草醌组HMGB1、TLR4和NF-κB mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著增加,紫草醌组则较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。紫草醌组肿瘤细胞凋亡率和Caspase-3的表达量与模型组相比均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫草醌通过调节HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路影响骨微环境和脊柱肿瘤细胞的异质性,从而可能对脊柱肿瘤具有一定的缓解作用。

紫草醌通过TGF-β1/Smad3信号通路改善哮喘小鼠气道重塑

目的探讨紫草醌对哮喘小鼠气道重塑的影响及其作用的机制。方法建立OVA诱导的哮喘Balb/c小鼠慢性气道炎症模型,经腹腔注射紫草醌0.5 mg/kg、2 mg/kg及4 mg/kg 3种剂量,对照组用生理盐水代替;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行细胞涂片,Diff-Quick染色进行炎症细胞的分类及计数;采用ELISA法检测小鼠BALF细胞因子及IgE水平;肺组织HE及Masson染色观察其病理学改变。试剂盒检测肺组织中HYP含量;Western blot法检测小鼠肺组织中α-SMA、TGF-β1、p-Smad3、Smad3水平。结果紫草醌抑制了BALF中炎症细胞数量的增加,并降低了BALF中总IgE及OVA特异性IgE含量,调节BALF中Th1/Th2细胞因子的平衡;紫草醌能减轻小鼠慢性气道炎症模型的炎性细胞浸润和胶原沉积,减少胶原纤维的形成并抑制支气管平滑肌的增生;Western blot结果显示,紫草醌抑制了α-SMA、TGF-β1、Smad3的蛋白表达量,并抑制Smad3的磷酸化水平。结论紫草醌能改善哮喘小鼠的气道重塑,其机制可能与TGF-β1/Smad3信号通路有关。

紫草抗氧化成分的提取及其活性研究

分别用石油醚、三氯甲烷和乙醇依次提取紫草成分 ,用OSI仪测定了三种提取物对猪油氧化稳定性的影响 ,发现石油醚提取成分 (LE - pet)和三氯甲烷提取成分 (LE -chl)有明显的抗氧化活性 ,添加到猪油中后 ,w =0 0 2 %时 ,猪油的氧化稳定性比空白样品提高了约 1倍。对LE -pet和LE -chl进行薄层层析分离鉴定 ,得到三种化合物 :β ,β 二甲基丙烯酰紫草醌 (Ⅰ)、乙酰紫草醌 (Ⅱ)和紫草醌 (Ⅲ)。对它们的抗氧化活性进行测试 ,化合物Ⅱ和Ⅲ表现出明显的抗氧化活性 ,当w(Ⅱ)=0 .0 6 %、w(Ⅲ) =0 0 6 %时 ,猪油的氧化稳定性分别提高了 6 0 4和 3 94倍。化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与VE均有较强的协同作用 ,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的质量分数为 0 .0 2 %与VE 的质量分数为 0 0 2 %共同使用时 ,其抗氧化协同系数 (SE)分别为 81 4(Ⅰ)、5 2 7(Ⅱ)和 132 6 (Ⅲ )

复方紫草油的质量标准研究

目的 建立复方紫草油的质量标准。方法 采用薄层色谱法定性鉴别紫草和冰片;用分光光度法测定君药紫草中紫草醌的含量。结果 定性鉴别方法简便、专属性强;紫草醌在2.08～20.80μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999(n=6),加样回收率为99.72％,RSD=0.16％(n=6)。结论 该方法准确、简便,可用于复方紫草油的质量控制。

复方紫草油质量控制方法的研究

目的建立复方紫草油的质量控制标准。方法以薄层色谱法鉴别当归、冰片;以紫外分光光度法测定紫草中左旋紫草素含量。结果左旋紫草素的氯仿溶液浓度在2.0-24μg/m l范围内,浓度与吸收度呈良好的线形关系,r=0.9999(n=5),平均回收率99.69%,RSD=0.81(n=5)。结论定性定量方法准确、可行,可以作为紫草油的质量控制和评价标准。