紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响

目的探讨紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响。方法建立A375细胞与HaCaT细胞的共培养细胞体系,实验分为对照组(等体积培养液),紫铆花素低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组,0.5,1.0,5.0μg/L)。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞的周期分布和线粒体膜电位;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测干细胞因子(SCF)和其受体c-Kit,以及小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞酪氨酸酶相关蛋白1,2(TRP-1,TRP-2)及SCF,c-Kit,MITF的蛋白表达水平。结果与对照组比较,中、高剂量组细胞的增殖率均显著升高(P<0.01);与对照组比较,各剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G_(2)/M期细胞比例均显著升高(P<0.01),高线粒体膜电位细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01),SCF,c-Kit,MITF的mRNA表达水平及SCF,c-Kit,MITF,TRP-1,TRP-2的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论紫铆花素可能通过调节SCF,cKit,MITF的表达而影响A375细胞与HaCaT细胞共培养细胞的增殖、细胞周期和线粒体膜电位等细胞生物学活性。

紫铆花素通过下调miR-34a对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨紫铆花素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法体外培养的HUVECs,将其分为对照组、模型组、低、中、高剂量紫铆花素组、anti-miR-NC组、anti-miR-34a组、高剂量紫铆花素加miR-NC组、高剂量紫铆花素加miR-34a组;分别进行RT-qPCR、流式细胞术和Western blot检测miR-34a表达水平、细胞凋亡率和相关蛋白表达;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率、炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平均显著升高(P<0.05);紫铆花素处理或下调miR-34a均可显著降低细胞凋亡率以及炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平(P<0.05);紫铆花素可显著降低miR-34a的表达水平(P<0.05);且上调miR-34a逆转了紫铆花素对ox-LDL处理HUVECs凋亡和炎性细胞因子的影响。结论紫铆花素可能通过下调miR-34a表达缓解ox-LDL诱导的HUVECs损伤。

5-异戊烯基紫铆花素的全合成研究

以廉价的3,4-二羟基苯甲醛和2,4-二羟基苯乙酮为起始原料,经过C-异戊烯基化,酚羟基保护,羟醛缩合和去保护基等步骤,以32%的总收率完成了天然产物5-异戊烯基紫铆花素的全合成。所有新化合物的结构都经过^(1)H NMR、IR、MS确认。

紫铆花素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及对线粒体功能的影响研究

目的:研究紫铆花素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及对线粒体功能的影响。方法:将大鼠PC12细胞分为正常对照组、模型组、溶剂对照组(1‰二甲基亚砜)和紫铆花素高、中、低浓度组(2、1、0.5μmol/L)。后4组给予相应试剂/药物干预24 h后,除正常对照组外的其余组均以100 m U/mL葡萄糖氧化酶诱导氧化应激模型。培养4 h后,检测细胞存活率、凋亡率和细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、三磷酸腺苷(ATP)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平或活性以及线粒体膜电位(MMP)变化。结果:与正常对照组比较,模型组细胞存活率和SOD、CAT、GSH-Px、ATP活性或水平均显著降低,凋亡率、ROS含量和MDA、IL-1β、TNF-α水平均显著增加(P<0.05或P<0.01),MMP明显降低。与模型组比较,溶剂对照组上述指标均无明显变化(P>0.05),紫铆花素高、中、低浓度组细胞存活率和SOD(除中、低浓度组外)、CAT、GSH-Px(除中、低浓度组外)、ATP(除低浓度组外)活性或水平均显著升高,凋亡率、ROS含量和MDA、IL-1β、TNF-α水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),MMP明显增加。结论:紫铆花素可通过增强抗氧化酶活性,稳定线粒体功能,抑制氧化应激和炎症反应,增加能量生成,进而抑制神经细胞凋亡,最终发挥神经保护的作用。

紫铆花素抑制脂多糖诱导的骨髓源性巨噬细胞炎症反应的研究

目的:研究紫铆花素(butein)对脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓源性巨噬细胞炎症反应的抑制效应,并探讨JAK2-STAT3通路在其中的作用。方法:分离C57BL/6小鼠骨髓,用40 ng/m L的巨噬细胞集落刺激因子刺激7 d,诱导为骨髓源性巨噬细胞(BMDM)。采用500 ng/m L的LPS刺激BMDM 12 h建立炎症模型,butein干预组采用5、10、20μmol/L butein与LPS共处理,butein单独处理组为20μmol/L的butein处理12 h,并设立空白对照组。ELISA法检测BMDM培养液中TNF-α、IL-6和NO的水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;Western blot法检测细胞内i NOS、p-JAK2、JAK2、p-STAT3和STAT3蛋白表达水平,并分析P-JAK2/JAK2和P-STAT3/STAT3蛋白表达水平的比值变化。结果:ELISA实验结果显示,LPS刺激BMDM后,培养液中的TNF-α、IL-6和NO含量显著升高,而5、10、20μmol/L的butein干预可抑制上述促炎因子的分泌,且呈现剂量-效应关系。流式细胞术检测结果显示,butein抑制了LPS活化BMDM的ROS水平升高。Western blot检测结果表明,LPS刺激后BMDM内i NOS蛋白表达水平升高,JAK2和STAT3蛋白表达水平虽未明显变化,但磷酸化水平显著增加。而butein干预可有效抑制JAK2和STAT3蛋白磷酸化。结论:Butein可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,JAK2-STAT3信号通路可能参与调控这一效应,提示butein是一种炎症相关疾病的候选药物。

紫铆花素对黑色素瘤细胞与角质形成细胞共培养体系中黑色素合成的影响

目的探讨不同浓度紫铆花素对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养体系细胞增殖、酪氨酸酶(TYR)活性、黑色素合成及酪氨酸相关蛋白1(TRP-1)、酪氨酸相关蛋白2(TRP-2) mRNA表达的影响。方法建立黑色素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养体系,以不同浓度紫铆花素处理共培养体系48 h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,氢氧化钠(Na OH)裂解法测定细胞黑色素含量,多巴氧化速率法测定黑色素细胞TYR活性,实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测TRP-1、TRP-2基因表达。结果与细胞共培养体系(即阴性对照组)比较,1.0,5.0μg·mL^(-1)紫铆花素与共培养体系细胞共孵育48 h后,可明显促进共培养细胞增殖(P<0.05或P<0.01),促进黑色素细胞TYR活性(P<0.05或P<0.01);在0.5～50μg·mL^(-1)范围内,紫铆花素可促进共培养体系黑色素合成(P<0.05或P<0.01);在0.1～0.5μg·mL^(-1)范围内,紫铆花素各剂量组TRP-1 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);在0.5～5.0μg·mL^(-1)范围内,紫铆花素各剂量组TRP-2 mRNA表达升高(P<0.01)。讨论紫铆花素可能通过促进TYR活性和TRP-1、TRP-2mRNA表达增强共培养体系黑色素合成功能。

紫铆花素通过调节AMPK/GSK-3β信号通路抑制心肌缺血再灌注损伤

目的:研究紫铆花素对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:体外建立H9c2心肌细胞缺血再灌注模型,分为正常组、模型组、紫铆花素低、中和高剂量组(10,20和40μM)。检测细胞存活率,LDH释放水平,试剂盒检测MDA、SOD、IL-1和IL-6水平,蛋白印迹法检测Bax,Bcl-2蛋白的表达以及AMPK和GSK-3β磷酸化水平。结果:与模型组比较,紫铆花素能够提高细胞存活率,减少LDH水平,降低MDA、IL-1和IL-6,增加SOD水平。减少Bax,Caspase-3蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05)。同时,紫铆花素能够剂量依赖性的促进AMPK和GSK-3β磷酸化。进一步研究发现,紫铆花素的保护作用以及对GSK-3β的促磷酸化被AMPK抑制剂Compound C抵消。结论:紫铆花素能减轻心肌缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡,其作用机制可能通过激活AMPK/GSK-3β信号通路,减轻氧化应激水平有关。

驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素的分离及其对人A375黑素瘤细胞黑素合成作用的影响

目的分离纯化驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素,初步探讨这两种化合物对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成作用的影响。方法采用硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析分离纯化紫铆素、紫铆花素;分别采用MTT法、酶学法及NaOH法测定这两种化合物对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果分离得到化合物紫铆素、紫铆花素,在0.50~10.00μg·mL-1内紫铆素、紫铆花素促进A375细胞增殖,且紫铆花素促增殖作用强于紫铆素(P<0.05);在0.10~1.00μg·mL-1内两种化合物均上调酪氨酸酶活性;在0.50~5.00μg·mL-1内,紫铆花素促进黑素合成,紫铆素抑制黑素合成。结论紫铆素、紫铆花素可能是驱虫斑鸠菊的药效成分;紫铆花素促进A375细胞的增殖,且使A375细胞黑素合成增加,紫铆素轻度抑制黑素合成。

紫铆花素对人黑素瘤细胞A375生物活性及线粒体膜电位的影响

目的观察紫铆花素对人黑素瘤细胞A375细胞增殖、细胞周期、酪氨酸酶活性、黑素合成及线粒体膜电位的影响。方法用不同浓度紫铆花素处理人黑素瘤细胞A375 48h后,采用MTT法测定黑素细胞增殖率;流式细胞仪测定黑素细胞周期和线粒体膜电位变化;L-DOPA法测定黑素细胞酪氨酸酶活性及Na OH裂解法测定黑素含量变化。结果与对照组相比,0.1~5.0μg/m L浓度范围紫铆花素与人黑素瘤细胞A375共孵育48h后,能明显促进人黑素瘤细胞A375增殖,具有不同程度提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成及调节细胞周期和线粒体膜电位的作用。结论紫铆花素对体外培养的人黑素瘤细胞A375起促进细胞增殖、提高酪氨酸酶活性、增加黑素合成的作用,其作用可能与紫铆花素对细胞周期和线粒体膜电位的调节有关。

紫铆花素上调人黑素瘤细胞A375酪氨酸酶活性及其相关蛋白表达

目的探讨驱虫斑鸠菊(Vernonia anthelmintica willd)的黄酮类化合物-紫铆花素对人A375细胞中黑素合成作用的影响。方法采用MTT法、L-Dopa氧化法、NaOH裂解法、Realtime PCR法及Western印迹法分别检测紫铆花素对细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性及相关mRNA和蛋白表达的影响。结果在0.5~5.0μg/mL浓度范围内,紫铆花素能够促进人A375细胞内黑素合成和酪氨酸酶(TYR)活性,上调酪氨酸酶相关蛋白(TRP)-1、TRP-2和小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA和蛋白表达,且无明显细胞毒性。结论紫铆花素可以通过提高酪氨酸酶活性以及促进其相关基因的mRNA和蛋白表达水平,诱导人A375细胞的黑素合成水平。

UPLC法同时测定降香中7个黄酮类成分含量及主成分分析

目的:建立同时测定市售降香中甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A含量的UPLC法,并应用主成分分析法评价其质量。方法:使用甲醇超声提取降香药材中上述7个黄酮类成分,并应用超高效液相色谱法测定其含量。色谱条件:采用ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(1.7μm,3.0 mm×100 mm),柱温35℃,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1_),检测波长270 nm和370 nm;使用统计学软件SPSS 22.0,对样品中7个黄酮类成分含量测定结果进行主成分分析。结果:甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性范围分别为0.014 0～0.140 0μg(r=0.999 9)、0.008 3～0.083 0μg(r=0.999 9)、0.008 1～0.081 0μg(r=0.999 9)、0.005 8～0.058 0μg(r=0.999 9)、0.008 2～0.082 0μg(r=0.999 9)、0.025 5～0.255 0μg(r=0.999 9)、0.015 2～0.152 0μg(r=0.999 9);平均回收率(n=9)分别为98.7%、98.1%、98.5%、99.6%、98.9%、99.2%、100.9%,RSD分别为1.7%、2.1%、2.7%、2.6%、2.4%、1.4%、2.3%;降香样品中上述7个黄酮类成分含量范围分别为0.19～6.41、0～0.45、0～1.03、 0～12.61、0.12～2.06、0.59～5.96、0～4.86 mg·g^(-1)。由主成分分析可知,选择3个因子(F_1、F_2、F_3)对不同来源降香药材进行综合评价,综合评价函数为F=43.840F_1+26.436F_2+13.250F_3,其中,海南产降香药材,相对于其他地方产的药材质量较好。结论:该方法操作简便、快捷,结合主成分分析,可以对不同来源降香质量进行客观、有效的评价。