组织芯片制作仪在制作免疫组化外对照中的应用

目的 免疫组化染是病理诊断过程中重要的检测手段,设置阳性对照尤其重要。本文旨在探讨一种流程简单的使用组织芯片制作仪制作单组织阳性外对照的方法。方法 用组织芯片制作仪中直径2 mm规格的穿刺针在提前备好的空白蜡块上打孔。对照阳性切片的免疫组化染色结果,找出阳性染色部位对应的供体蜡块位置,用直径2 mm规格的穿刺针进行穿刺,并将穿刺出的组织芯注入受体蜡块孔洞中,组织芯片蜡块即制作完成。结果 同一张玻片上,单组织阳性对照呈直径2 mm的圆形,与待检组织界限清楚,阳性定位准确,从而确认了试剂的有效性及染色过程的准确性。结论 用组织芯片制作仪制作单组织阳性对照流程简单,效果良好,适合有条件的单位日常开展使用。

组织芯片仪在制作阳性对照方面的应用

目的 探讨手动组织芯片仪在制作阳性对照方面的应用。方法 使用手动组织芯片仪分别制作ALK、p16、HER2、EBER阳性组织对照蜡块。结果 目标蜡块包含完整阳性组织细胞,染色清晰,玻片干净、整洁。结论 手动组织芯片仪在制作阳性对照蜡块方面有着操作简单、制片稳定、更加标准化、节省成本等优点。

KDELR2在胶质瘤中的表达及临床意义:基于组织芯片技术分析

目的探讨KDELR2在脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤病人临床特征、病理特征和预后的关系。方法选择组织芯片HBraG180Su01作为实验标本,收集并整理完整的临床资料。免疫组化染色检查胶质瘤组织KDELR2的表达,分析KDELR2的表达水平与胶质瘤病人临床特征、病理特征以及预后的关系。结果最终纳入165例胶质瘤。免疫组化染色显示,KDELR2主要表达于胶质瘤细胞的细胞质。胶质瘤KDELR2表达阳性率高达98.18%;KDELR2表达水平与胶质瘤WHO分级、复发状态、PDL1表达及病人年龄、生存状态呈显著相关(P<0.05),与胶质瘤Ki-67、EGFR表达及病人性别无明显关系(P>0.05)。Cox比例回归风险模型分析显示,KDELR2高表达是胶质瘤病人生存预后不良的独立危险因素(P<0.05);生存曲线分析显示,KDELR2高表达组总体生存期和无进展生存期较KDELR2低表达组明显缩短(P<0.05)。结论胶质瘤KDELR2呈高表达,与胶质瘤WHO分级、复发显著相关,并与胶质瘤病人的生存预后显著相关。这提示KDELR2可作为胶质瘤靶向治疗的一个潜在靶点。

生物芯片技术在生物医学研究中的应用进展

生物芯片技术源于Southern印迹技术,是一项基于生物分子间特异性相互作用原理的高通量的微量分析技术。从单纯地将生物组分集成以降低成本、提高效率,到结合微刻技术及多种微流结构对实验步骤进行优化、集成,再到对组织、器官自然状态的模拟,生物芯片技术发展迅猛,且在医学生物研究领域展现出巨大的应用前景。本文简述生物芯片技术的概念、发展与分类,并对近年来不同类型生物芯片在生物医学研究中的最新应用进展进行综述。

组织芯片制备仪联合STR检测在葡萄胎病理诊断中的应用

目的探讨应用组织芯片制备仪精准分离绒毛组织和蜕膜组织联合短串联重复序列(STR)分析在葡萄胎病理诊断中的应用价值。方法收集中国医科大学附属盛京医院2017年3月至2022年9月可疑葡萄胎的组织标本90例。标本常规固定、脱水及石蜡包埋。分别应用组织芯片制备仪、传统方法分离标本中绒毛组织和蜕膜组织,应用检测试剂盒进行STR检测。结果应用组织芯片制备仪STR检测成功率为95.6%,采用传统方法STR检测成功率为60.0%。成功进行STR检测86例,包括葡萄胎67例和非葡萄胎19例。结论应用组织芯片制备仪精准分离绒毛组织联合STR分析技术提高了STR检测的成功率,在葡萄胎病理诊断中具有重要意义。

基于组织芯片技术探讨GLUT10在主动脉夹层发病机制中的作用

目的研究主动脉夹层患者的主动脉组织中葡萄糖转运体10(glucose transporter 10,GLUT10)表达水平及意义。方法选取2018年1~11月于武汉大学人民医院确诊为主动脉夹层的27例患者为夹层组,另选取18例心脏移植患者作为对照组。将以上患者的主动脉标本制作成组织芯片,检测GLUT10在人体主动脉组织中的蛋白表达水平及其相关性;采用载shRNA慢病毒敲低血管平滑肌细胞GLUT10编码基因,检测其周期蛋白、基质金属蛋白酶、细胞骨架蛋白的表达,探讨GLUT10表达下调致主动脉重构的病理机制。结果在组织芯片的免疫组化染色中发现,夹层组GLUT10的表达水平较对照组正常主动脉明显下调;提取GLUT10敲低后的细胞蛋白进行Western blot法检测发现,GLUT10敲低组的细胞周期蛋白、基质金属蛋白酶的表达水平较对照组明显增高,而细胞骨架蛋白的表达水平明显下降。结论GLUT10表达下调致血管平滑肌细胞周期紊乱、金属蛋白酶异常表达、细胞骨架蛋白表达下调、主动脉重构,与主动脉夹层的发生、发展密切相关。

一种通量模板的简易组织芯片制作方法

目的:介绍一种通量模板的简易组织芯片制作方法。方法:用一次性注射器针头制作组织芯片穿刺针及打孔针,配合设计制作通量模板,制作组织芯片蜡块及组织芯片,并进行HE及免疫组化染色。结果:依照上述方法制作口腔鳞状细胞癌组织芯片蜡块完整无开裂,蜡块内无气泡,无变形,组织芯柱与周围石蜡融为一体结合紧密,矩阵排列整齐,无移动、错位或漂浮。肉眼大体观察组织芯片切片,微阵列排列整齐,切片完整,无刀痕、裂隙、皱褶现象。HE结果显示,组织形态结构完整,诊断结果与大体标本诊断一致。免疫组化结果与原免疫组化结果一致。结论:通量模板制作的组织芯片经济实用。

生物芯片技术在生物医学研究中的应用进展

生物芯片是20世纪80年代发展起来的一种高密度、高通量、微型化和自动化的分析技术,它是把样品经各种处理后,用特制的芯片来进行检测。该技术的特点是将样品处理、分离、检测和分析等各步骤集成于一块芯片上,用计算机程序控制和管理。该技术使样品处理、分离纯化和检测等实验过程快速、准确、高效,可以大大缩短实验周期,节省人力物力,并且可以同时对大量样品进行分析。因此,生物芯片技术在科研领域的应用前景极为广阔。

卵巢肿瘤组织中Wee1蛋白激酶的表达及意义

目的:评估Wee1蛋白激酶在卵巢肿瘤组织中的表达水平及其临床意义。方法:采用免疫组化染色技术,对包含14例良性、9例交界性及36例恶性卵巢肿瘤组织的组织芯片中Wee1蛋白激酶表达水平进行检测。采用Kaplan-Meier法绘制Wee1蛋白激酶高、低表达卵巢恶性肿瘤患者的生存曲线,采用Cox回归分析Wee1蛋白激酶表达与卵巢恶性肿瘤预后的关联。结果:良性、交界性和恶性卵巢肿瘤组织中Wee1蛋白激酶表达水平分别为(1.29±0.47)、(2.22±0.83)和(2.03±1.00),3组比较,差异有统计学意义(P=0.017),恶性和交界性肿瘤组织中Wee1蛋白激酶表达水平高于良性肿瘤组织(P<0.05)。卵巢恶性肿瘤患者中15例Wee1蛋白激酶高表达,21例低表达;Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,高表达组生存状况差于低表达组(P<0.001);Cox回归分析结果显示,Wee1蛋白激酶高表达者预后差,HR(95%CI)为6.38(1.54~26.52)。结论:卵巢恶性肿瘤组织中Wee1蛋白激酶表达水平高于良性肿瘤组织,且与恶性肿瘤预后有关。

非小细胞肺癌组织芯片中RRM1表达和预后因子分析

背景与目的RRM1与非小细胞肺癌的预后可能有关。本研究的目的是采用组织芯片技术检测非小细胞肺癌中RRM1的表达并分析预后因素。方法取广东省肺癌研究所标本库的417例非小细胞肺癌术后标本制作成组织芯片。通过SP法检测RRM1的表达情况并分析其与预后的关系。结果RRM1在不同的性别、年龄、肿瘤部位、病理类型、分化程度、T状态、N状态、M状态和病理分期等组间的差异均无统计学意义(P均>0.05)。单因素分析显示RRM1表达不是有统计学意义的预后因素(P>0.05)。COX模型多因素分析显示,分化程度、N状态是独立的预后因素。结论通过免疫组化检测的RRM1表达不能作为非小细胞肺癌独立的预后因素。TNM分期仍然是目前最好的预后因素。

应用组织芯片检测食管鳞状细胞癌中APC、β-catenin、E-cadherin与cyclin D1的表达及其意义

背景与目的:食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的发生是个多因素多阶段的演进过程。Wnt信号转导通路在肿瘤发生发展中起重要作用。本研究探讨4种Wnt通路上的蛋白在食管鳞癌发生中的作用及在早期诊断中的意义。方法:制作由199例食管鳞癌组织与其癌旁164例正常粘膜、34例基底细胞增生和30例不典型增生上皮组成的组织芯片,应用免疫组化方法检测APC、β-catenin、E-cadherin、cyclin D1的表达情况。结果:APC和E-cadherin在ESCC阳性率分别是69.6%、19.6%,均低于各自正常组(98.0%、96.3%,均为P<0.01),β-catenin和cyclinD1在ESCC的异常表达率分别是65.5%和70.9%,均高于各自正常组(1.2%,0.8%,均为P<0.01)。按正常粘膜→基底细胞增生→不典型增生→ESCC的顺序,APC低表达发生在ESCC,β-catenin和E-cadherin表达异常始于不典型增生,cyclin D1过表达始于基底细胞增生。随着ESCC分化程度由高到低的改变,APC、E-cadherin和cyclin D1阳性率逐渐减少,β-catenin逐渐增加。β-catenin的表达与APC无相关(r=-0.10,P>0.05),与E-cadherin呈负相关(r=-0.31,P<0.01),与cyclin D1呈正相关(r=0.49,P<0.01)。结论:APC、E-cadherin、β-catenin和cyclin D1可能在ESCC发生过程中起重要作用。β-catenin、E-cadherin和cyclin D1的表达检测有助于ESCC的早期诊断。

应用组织芯片检测肝细胞癌组织中8种p53相关基因的表达

背景及目的:肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生是一个多步骤、多基因参与的过程。目前已知与HCC相关的癌基因和抑癌基因有十余种,其中p53基因家族的功能变化是HCC发生发展过程中的重要分子事件。本研究利用组织芯片高通量的优点,探讨肝细胞癌及癌旁肝组织中p53基因家族及相关基因中8种癌基因及抑癌基因的表达差异。方法:应用Instrumedics公司生产的组织芯片制作仪,取样针直径2mm,制作成3个肝细胞癌组织芯片蜡块,包括273例肝细胞癌组织、144例癌旁肝组织及10例非肝病死亡的尸检正常肝组织。应用免疫组织化学方法检测了p16INK4a、p21WAF1、p33ING1b、p53、p57KIP2、p73、mdm2和ATM8种基因在HCC及癌旁肝组织中的表达率,同时观察乙肝病毒(hapatitisBvirus,HBV)感染与这8种基因表达间的关系。结果:3个肝癌组织芯片分别含有136、143和148个位点。8种基因在HCC和癌旁肝组织中的阳性表达率分别为p16INK4a35.9%和9.0%、p21WAF141.8%和11.1%、p33ING1b43.65%和14.6%、p5346.2%和12.5%、p57KIP239.2%和16.7%、p739.5%和2.8%、mdm241.4%、9.0%和ATM6.6%和1.4%。在癌组织中上述基因的表达强于癌旁肝组织(P<0.05);不同分化程度的HCC组织中8种基因的阳性表达率差异均不显著(P>0.05);除了p16INK4a、p21WAF1、

免疫组化方法检测肿瘤标志在肺癌组织芯片中表达的可靠性研究

目的 用免疫组化方法检测肺癌组织芯片肿瘤标志的可靠性和有效性进行了探讨。方法 建立含有 4 18例非小细胞肺癌标本的组织芯片 ,并随机选取了 5 0例与组织芯片标本相对应的全组织标本。用免疫组化方法研究并对比了Ki 6 7和p5 3在组织芯片和全组织标本中的表达情况及其符合程度和可靠性。结果 组织芯片和全组织切片中Ki 6 7和 p5 3表达的一致率分别为 98%和 96 %。非小细胞肺癌三位点组织芯片检测Ki 6 7和p5 3表达的可靠性好 ,Kappa值分别为0 .95和 0 .91。结论 三位点组织芯片可有效、可靠地检测肿瘤标志物在非小细胞肺癌中的表达。本研究表明组织芯片技术特别适用于大样本。

肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨

目的 :探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法 ,以及在基因表达分析中的应用。方法 :选取肺癌石蜡包埋组织 90例 ,新鲜液氮冻存肺癌及癌旁肺组织 2 0例 ,常规切片HE染色下确定穿刺部位 ,石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法 (1998) ,每例穿取 0 6mm组织柱 2条 ,制备 180点阵组织芯片 ;而新鲜组织芯片参考Fejzo等方法 (2 0 0 1) ,并略作改良 ,制备 5 0点阵组织芯片。所有组织芯片模块 ,经 4 μm切片、常规组织学染色和免疫组化染色 ,以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性。结果 :180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片 ,组织排列整齐 ,HE染色后组织形态可观察率在 98%以上 ;p5 3、c myc、bcl 2、bax和Ki 6 7等免疫组化染色后 ,肺癌组织可见不同程度的抗原表达 ,组织点阵的形态可观测率在 89%～ 95 %之间。新鲜组织芯片经HE染色后 ,形态可观测率和基因表达可分析率在 70 %左右。结论 :手工法组织芯片制备简便易行 ,使用组织少 ,不破坏原蜡块 ;实验均一性、可比性好 ,且节省试剂。与常规组织切片相比 ,2点 0 6mm组织可以获得原蜡块 95 %以上的信息 ,完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析 ;新鲜组织芯片技术已经初步建立 ,但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA分析方法。

组织芯片技术的建立及其在大肠癌的研究

目的:探讨石蜡包埋组织芯片技术的方法学及其在大肠癌研究中的意义.方法:选取病理科档案材料中44例大肠癌、13例癌旁结肠黏膜和26份大鼠结肠石蜡包埋组织,采用组织芯片仪及手工法制作208点列阵组织芯片,并进行he染色和mib-1抗体免疫组织化学染色.光镜观察并计数mib-1阳性细胞在各组的分布.结果:经染色后组织芯片大部结构完整,每一点阵均有代表性组织形态;mib-1阳性细胞标记指数(li)在中低分化大肠腺癌(50.17%)中明显高于高分化(管状)大肠腺癌(32.38%),而癌旁大肠黏膜li为10.08%.三者之间均具有非常显著性差异(p<0.01).结论:手工法组织芯片制作技术是一种简易可行的方法,在肿瘤病理研究中必将起到重要作用.mib-1阳性细胞标记指数与肿瘤细胞生长活跃程度相关,可作为判断大肠癌生物学行为及其预后的指标之一.

组织芯片简易制作方法及免疫组化有效性分析

目的探索一种组织芯片的简易制作方法,并对它的有效性进行分析。方法在实验中探索出组织芯片的制作方法,收集乳腺癌病例124例,制作成直径1.6cm的组织芯片,进行雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及c-erBb2受体免疫组化染色,同时与普通切片的免疫组化染色结果对比,并进行统计学分析。结果组织芯片与普通切片的ER、PR及c-erBb2染色积分(0～7分)显著相关,ER、PR及c-erBb2的表达(阳性/阴性)一致率分别达94.35%、93.55%和91.94%。比较组织芯片与普通切片的ER、PR及c-erBb2的表达,两者之间无统计学差异(P>0.05),即组织芯片的结果与普通切片的结果是一致的。结论自制1.6mm直径的组织芯片在进行免疫组化染色时能够代表普通切片,自制组织芯片的方法可靠有效。

组织芯片在免疫组化染色阳性对照中的应用

目的应用组织芯片制作一种高效方便的免疫组化阳性对照片。方法选择60例不同病变不同抗体染色的免疫组化阳性片和相应的组织蜡块,使用组织芯片制备仪制成组织芯片蜡块,经过连续切片,共获得150张组织芯片,每张组织芯片包含77个组织芯点位,每个组织点的直径为0·6mm,芯片中组织所占面积为0·8cm×0·5cm。每张芯片至少包含了50种常见的抗原。然后将常规工作中测试片裱贴在同一张芯片组织的旁边,同时进行免疫组化染色。结果常见的数10种抗体染色,总能在芯片中出现至少1个阳性点位,其余点位则成为了阴性对照。旁边的测试组织是否阳性有了明确的对照。结论与传统的阳性对照片相比,组织芯片阳性对照片具有更高的效率,参考值更多,更科学,并且简便易行。

组织芯片检测乳腺癌相关癌基因产物表达

目的 检测乳腺癌相关癌基因产物的表达情况 ,为临床制定治疗方案和判断预后提供依据。方法 运用组织芯片技术、免疫组化S P法检测 48例乳腺癌ER、PR、p5 3、c erbB 2、Ki 6 7、TopoⅡ和E cadherin(E cad)的表达情况 ,并与常规病理学方法进行比较。结果 48例乳腺癌中ER阳性 32例、PR阳性 36例、p5 3阳性 42例、c erbB 2阳性 31例、Ki 6 7阳性 45例、TopoⅡ阳性 41例 ;44例浸润性导管癌中 ,E cad阳性 37例 ;而 4例浸润性小叶癌E cad均阴性。对照组的 13例乳腺组织均E cad呈阳性表达。随访 :44例浸润性导管癌中 3例死亡 (6 8%) ;4例浸润性小叶癌中 2例死亡 (5 0 0 %)。结论 组织芯片技术具有高信息量、简捷、快速、高效、成本低、重复性好等优点 ,在病理学领域中具有重要的实际意义和广阔的应用前景。

组织芯片技术检测人鼻咽癌组织及细胞株KIAA1173基因的表达

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)致病的分子机制至今仍不清楚,已有研究表明,染色体3p21～22区域存在与鼻咽癌发生密切相关的抑癌基因。KIAA1173基因是定位于3p22.1的一个新的肿瘤相关基因,其与NPC发病的关系尚未见报道。本研究采用KIAA1173基因特异性原位杂交探针,检测其在NPC组织及细胞株中的表达,探讨KIAA1173基因与NPC发病的关系。方法:克隆KIAA1173基因片段(354bp),并制备cDNA探针;采用组织芯片技术,通过原位杂交检测73例鼻咽部不同组织标本(41例NPC、18例鼻咽非典型增生上皮、14例正常鼻咽粘膜上皮)和6种NPC细胞株(CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、6-10B、5-8F)中KIAA1173基因mRNA的表达情况。结果:KIAA1173基因在NPC细胞、非典型增生上皮和正常鼻咽粘膜上皮的阳性率分别为21.9%(9/41)、83.3%(15/18)、92.8%(13/14),而6种NPC细胞株均未见表达;在正常鼻咽粘膜上皮和非典型增生上皮中强阳性率分别是64.3%(9/14)和38.9%(7/18),而NPC中无强阳性,在鼻咽部不同上皮组织中的表达差异有显著性(P<0.001);在38例伴有淋巴细胞浸润的NPC组织中,癌细胞与浸润淋巴细胞之间KIAA1173基因表达有显著性差异(P=0.026),并且呈明显负相关(κ=-0.337,P=0.020)。结论:KIAA1173基因在鼻咽部不同组织中表达不同,正常鼻咽上皮强表达,而NPC细胞中低表达甚至不表达,提示该基因可能参与NPC演变的过程。