猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称猪蓝耳病,是由病毒引起的一种高度接触性传染病,可导致母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率。该病毒已在全世...猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称猪蓝耳病,是由病毒引起的一种高度接触性传染病,可导致母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率。该病毒已在全世界范围内广泛流行,给养殖业造成了重大的经济损失。目前,传统的疫苗无法提供完全的保护作用,开发研制新型疫苗已迫在眉睫。PRRSV基因组长约15kb,有8个不同程度的开放阅读框(ORFS),即ORF1-ORF7。该病毒具有3个重要的结构蛋白,即E蛋白,M蛋白和N蛋白,这三种蛋白分别由病毒基因ORF5,ORF6和ORF7编码。本试验构建了含猪繁殖与呼吸综合征病毒E+M+N基因的重组腺病毒。首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因、M基因和N基因,将三者用口蹄疫病毒2A序列串联起来,将连接好的E+M+N基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将获得的重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/E+M+N;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染HEK-293细胞,成功地得到含有E+M+N基因的重组腺病毒,为重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定基础。展开更多
文摘猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称猪蓝耳病,是由病毒引起的一种高度接触性传染病,可导致母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率。该病毒已在全世界范围内广泛流行,给养殖业造成了重大的经济损失。目前,传统的疫苗无法提供完全的保护作用,开发研制新型疫苗已迫在眉睫。PRRSV基因组长约15kb,有8个不同程度的开放阅读框(ORFS),即ORF1-ORF7。该病毒具有3个重要的结构蛋白,即E蛋白,M蛋白和N蛋白,这三种蛋白分别由病毒基因ORF5,ORF6和ORF7编码。本试验构建了含猪繁殖与呼吸综合征病毒E+M+N基因的重组腺病毒。首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因、M基因和N基因,将三者用口蹄疫病毒2A序列串联起来,将连接好的E+M+N基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将获得的重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/E+M+N;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染HEK-293细胞,成功地得到含有E+M+N基因的重组腺病毒,为重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定基础。
