红凤菜叶绿体全基因组特征及其序列比较分析

为了更好地了解红凤菜叶绿体基因组(cpDNA)特征及其进化关系,本研究对红凤菜cpDNA进行了测序、组装和注释,并与近缘种进行比较分析。结果表明,红凤菜cpDNA全长为150929 bp,总GC含量为37.18%,包含一个大单拷贝区(LSC,83112 bp)、一个小单拷贝区(SSC,18127 bp)以及两个反向重复区(IRa/IRb,24845 bp)。cpDNA共注释到131个功能基因,其中86个为蛋白编码基因,37个为tRNA基因,8个为rRNA基因;共鉴定出58个SSRs位点,其碱基组成以A-T类型为主。RSCU分析表明,红凤菜cpDNA明显偏好使用以A/T结尾的密码子。基因组比较分析显示,4种菊三七属植物cpDNA在结构和组成上非常保守,变异主要集中在LSC区和SSC区。系统发育分析表明,野茼蒿属与菊三七属亲缘关系最近;菊三七属种间,白子菜、狗头七与红凤菜亲缘关系最近。

红凤菜化学成分研究

对三七草属植物红凤菜的化学成分进行研究。方法 采用95%乙醇对红凤菜药材全草进行提取,并利用经典化学成分预试分析方法对提取物的化学成分进行初步分析;采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇对乙醇提取物进行萃取分部位,用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱分离技术对红凤菜化学成分进行分离、纯化;采用1H-NMR、13C-NMR等波谱技术结合理化分析法对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果 成分预实验结果显示红凤菜含有有机酸、黄酮、甾体等化学成分。从红凤菜中乙醇提取物中分离鉴定了3个化合物,分别鉴定为:山奈酚(1)、槲皮素(2)、芹菜素(3)。结论 红凤菜化学成分复杂多样,化合物3为首次从该植物分离得到。

HPLC法测定红凤菜中绿原酸的含量

建立红凤菜中绿原酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对红凤菜药材中绿原酸的含量进行测定,色谱柱为Prevail ODS-C18,以乙腈-0.1%磷酸溶剂系统为流动相,进行梯度洗脱,检测波长为326nm。结果 绿原酸质量浓度在4.912~49.12μg/ml范围内线性关系良好(R2=0.9997),测得药材样品中绿原酸含量为3.742~3.963mg/g。结论 所建立的方法操作简单,可控性好,适用于红凤菜药材的质量控制。

红凤菜化学成分研究

目的研究菊科三七草属植物红凤菜Gynura bicolor DC.地上部分的化学成分。方法采用硅胶、凝胶柱色谱等方法分离化合物,运用理化性质和现代光谱技术鉴定化合物的结构。结果分离得到17个化合物,分别鉴定为:十八碳脂肪醇(Ⅰ)、十一碳脂肪酸(Ⅱ)、二十六碳脂肪酸(Ⅲ)、三十碳脂肪酸(Ⅳ)、己烷(Ⅴ)、对羟基苯甲酸(Ⅵ)、山柰酚(Ⅶ)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅷ)、高车前苷(Ⅸ)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷(Ⅹ)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷(Ⅺ)、槲皮素-双-3-O-β-葡萄糖苷(ⅩⅡ)、β-香树脂醇(ⅩⅢ)、α-香树脂醇(ⅩⅣ)、β-香树脂醇-3-O-β-葡萄糖苷(ⅩⅤ)、乙酰表木栓醇(ⅩⅥ)、β-谷甾醇(ⅩⅦ)。结论全部17个化合物均为首次从红凤菜中分离得到。

红凤菜中活性物质的提取及对超氧阴离子自由基的清除作用

本文研究了红凤菜不同溶剂提取物对超氧阴离子自由基的清除作用,发现水提取物有较好的清除作用,进一步采用正交实验设计确定水提取最佳工艺,并就其抗氧化性与VC、白菜、芹菜、青椒、紫甘蓝等进行了比较。实验结果表明:红凤菜提取物对超氧阴离子自由基O2·有较强的清除作用,在浓度为750μg/ml时,对O2·的清除率即可达到73.04%,水提取最佳工艺为:浸提温度30℃、固液比1:40、浸提时间为2h。--

红凤菜红色素水溶液的稳定性试验

从红凤菜 (GynurabicolorDC .)地上部分提取了红色素水溶液。在 35 0～ 70 0nm范围内的扫描结果显示 ,该色素有 2个吸收峰 ,位于 5 43nm和 5 87nm附近。在pH 2 .2～ 6 .0的范围内色素较稳定。加热使其吸收峰值增大 ,但波长基本不变。 0 .2mmol LFe3 +引起色素溶液变色并产生大量沉淀 ;Al3 +也能使其产生沉淀 ;Cu2 +对该色素的影响较小 ;Zn2 +对其无影响。氧化剂 (H2 O2 )与还原剂 (Na2 SO3 )均能使该色素褪色。光照对该色素无明显影响。

红凤菜花色苷三种提取方法的工艺优化和比较

本研究分别采用传统水浴提取法、微波辅助提取法和超声波辅助提取法对红凤菜花色苷进行提取并作工艺优化。以添加了0.6%柠檬酸的20%乙醇溶液为提取溶剂,水浴提取法的最优提取工艺参数为料液比1∶11(g/m L),提取温度80℃,提取时间120 min,花色苷提取物得率7.70%,色价1.44;微波辅助提取法的最优提取工艺参数为料液比1∶7(g/m L),提取功率700 W,提取时间2.0 min,花色苷提取物得率6.65%,色价1.26;超声波辅助提取法的最优工艺参数为料液比1∶11(g/m L),功率270 W,提取温度80℃,提取时间90 min,花色苷提取物得率8.25%,色价1.16。三种提取方法中,微波提取法的提取时间最短,超声波提取法的花色苷提取物得率最高,传统水浴法的花色苷提取物色价最高。

红凤菜和白子菜总黄酮含量的动态变化

The dynamic change of total flavonoids content in above-ground part of Gynura bicolor (Willd. ) DC. and G. divaricata (L. ) DC. from two locations was researched. The result shows that the total flavonoids content in G. bicolor and G. divaricata leaf is lower in June and July,higher in the beginning and the middle of August and then has a certain decrease with a great fluctuation. Total flavonoids content in leaf of G. bicolor reaches the highest with a value of 12.031 mg·g-1 at the 15th August,and that in leaf of G. divaricata-1(from Zhejiang of China) and G. divaricata-2 (from South America) is the highest at the 1st August with a value of 17.381 and 19.935 mg·g-1,respectively. The total flavonoids content in leaf of G. bicolor and G. divaricata is higher than that in stem. Except leaf of G. divaricata-2,the total flavonoids content in stem and leaf appears decreasing trend from upper to lower part gradually. Therefore,taking total flavonoids content for an index,it is suitable to harvest upper leaf of G. bicolor,upper leaf and stem of G. divaricata-1,and whole leaf of G. divaricata-2 in August.

红凤菜新鲜茎叶中总黄酮提取物的LC-MS分析

红凤菜（Gynura bicolor DC.）为菊科（Compositae）菊三七属（Gynura Cass.）植物，别名血皮菜、观音菜、观音苋、紫背天葵等，主要分布于中国南方各地，全草均可入药[1]；也可作为蔬菜食用，在国内多个地区均有栽培和销售。目前已知红凤菜含有黄酮类、酚性酸类、萜类、甾醇类、脂肪酸类、生物碱类及花青素类等[2-7]成分。由于黄酮类成分多具有保护心血管、抗肿瘤、抗糖尿病、抗氧化、抗炎和抗病毒等作用[8]，因此对红凤菜中黄酮类成分的研究具有深度开发价值。

HPLC测定红凤菜提取物的总黄酮含量及对提取方法的评价

为了解从红凤菜新鲜茎叶中所得提取物的有效成分含量以及提取方法的分离效果,在提取过程的不同阶段取样得到6个不同提取物,测定其总黄酮含量。首先对提取物进行酸解,再用高效液相色谱法测定槲皮素和山柰酚的含量,根据所测样品中黄酮类成分的组分折算为总黄酮含量。结果显示,经过大孔树脂和聚酰胺2次柱层析后,所得提取物的总黄酮质量分数达到84.8%,重结晶得到的2个结晶物总黄酮质量分数分别为97.1%和99.7%。可见,采用乙醇提取-大孔树脂柱层析-聚酰胺柱层析-重结晶的方法可有效地从红凤菜新鲜茎叶中提取纯化总黄酮。

红凤菜中黄酮类化合物的高效液相色谱与多级质谱联用分析

目的检测红凤菜中黄酮类化学成分。方法采用高效液相色谱与多级质谱联用法(HPLC-MSn)对黄酮成分进行鉴定分析。结果初步鉴定了5个黄酮类物质,其中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖和槲皮素-3-O-鼠李糖苷未见文献报道。结论采用HPLC-MSn可以快速鉴定红凤菜黄酮类化合物。

红凤菜抗氧化成分提取分离研究

目的有效地从红凤菜中提取分离抗氧化活性成分。方法以"乙醇提取-NKA大孔树脂柱层析-聚酰胺柱层析-重结晶"的方法进行分离,测定各阶段样品的DPPH IC50、ABTS IC50、总酚及总黄酮含量,并作相关性分析。结果大孔树脂的30%乙醇洗脱物抗氧化活性最高(DPPH IC50为31.5μg/m L,ABTS IC50为15.1μg/m L)、总酚含量较高(22.8%)、未检出黄酮苷元成分,50%乙醇洗脱物抗氧化活性较高(DPPH IC50为42.1μg/m L,ABTS IC50为33.2μg/m L)、总酚含量最高(26.3%)、总黄酮苷元及总黄酮含量均最高(分别为18.7%和33.7%);50%乙醇洗脱物经聚酰胺柱层析得到的黄酮苷结晶Ⅰ、Ⅱ及其母液干燥物,其抗氧化活性、总酚及总黄酮含量均提高;DPPH IC50与总酚含量间存在显著负相关(r=-0.883*)。结论红凤菜提取物清除DPPH自由基的活性与其总酚含量显著相关,依次采用NKA大孔树脂和聚酰胺柱层析可有效地富集抗氧化活性成分。

大孔树脂对红凤菜总黄酮的吸附分离特性研究

目的筛选适合分离纯化红凤菜总黄酮的大孔吸附树脂。方法以总黄酮含量为指标,比较不同类型大孔树脂在静态和动态情况下对红凤菜总黄酮的吸附和解吸附特性。结果D101和HPD-100大孔吸附树脂对红凤菜总黄酮具有良好的吸附分离性能,吸附快、解吸附容易,性能优于其他树脂。结论D101和HPD-100型大孔树脂对红凤菜总黄酮的分离纯化效果较好。

红凤菜地上部分的化学成分

红凤菜〔Gynura bicolor （ Willd.） DC.〕为菊科（ Compositae）菊三七属（ Gynura Cass.）植物，又名观音苋和补血菜等。红凤菜是传统山野菜，营养丰富，在东亚一些国家（如中国和日本）常用于制作蔬菜沙拉和天麸罗等供食用；而且在中国南方的部分地区还将其作为治疗糖尿病的草药[1]。据记载[2]，红凤菜全草可入药，味甘、辛，性凉，具有凉血止血、清热消肿的功效；内服治咳血、血崩、痛经、血气痛、支气管炎、盆腔炎、中暑和阿米巴痢疾；外用治创伤出血、溃疡久不收口、疗疮痈疖和甲沟炎等。

红凤菜紫色素提取和分离

为了探讨红凤菜紫色素浸提的最优条件,研究吸附树脂对红凤菜紫色素吸附分离的特性,通过采用均匀设计法对提取温度、提取时间和提取水的用量进行优化,建立提取条件与提取率之间的定量关系方程;通过研究吸附树脂对红凤菜紫色素静态吸附动力学和静态解吸实验,分析比较树脂对色素吸附和分离的优劣。研究结果建立了色素提取率与浸提条件的定量关系,比较筛选出吸附树脂NKA-9最适合用于红凤菜紫色素的吸附分离。

红凤菜总黄酮清除自由基的活性

采用DPPH·法测定红凤菜总黄酮提取物的抗氧化活性。结果显示:红凤菜总黄酮的抗氧化活性呈量效关系,半数抑制浓度为0.122 mg/mL。说明红凤菜总黄酮提取物具有抗氧化活性。

红凤菜多肽的制备及其美拉德反应产物的抗氧化性能研究

目的 优化红凤菜蛋白提取工艺并制备活性多肽,对多肽进行改性,探讨产物的抗氧化性能,深入开发其蛋白资源。方法 结合超声和高剪切技术,用响应面法优化提取红凤菜中的蛋白质,采用酶解法制备多肽并进行糖基化改性,且研究其抗氧化性能。结果 最优条件为料液比1:47 (g:mL),300 W超声波处理20 min,高剪切6次,提取温度为46.7℃,提取时间2.5 h,提取液pH 8.40时,此时蛋白提取率为79.64%,接近响应面预测值。用蛋白酶水解红凤菜蛋白制备活性肽,以抗氧化性能为指标筛选合适的酶并优化酶解条件。用超滤膜加压过滤对水解产物进行分级,分级产物中,Mw<1 kDa的多肽抗氧化性能最佳。红凤菜多肽与木糖进行美拉德反应后,对1,1二苯基-2-三硝基苯肼自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基的清除率分别为87.65%、80.65%,比改性前提高了7.99%和11.37%。结论 本方法的红凤菜蛋白提取率高,糖基化产物的抗氧化效果好。

红凤菜总黄酮提取工艺的研究

采用正交试验,研究热回流法提取红凤菜总黄酮的工艺。试验结果表明,在影响提取效果的因素中,按影响程度大小依次为:乙醇浓度>乙醇用量>提取时间。最佳提取工艺:依次以12倍量、10倍量70%乙醇提取2次,2h/次。

HPLC测定红凤菜总黄酮含量

用70%甲醇浸提红凤菜样品的干燥粉末,将所得浸膏进行酸解,以槲皮素、山柰酚为对照品,用HPLC对酸解液进行测定,经计算得到红凤菜样品的总黄酮含量,为红凤菜的资源利用提供依据。结果表明,红凤菜样品的总黄酮含量为:嫩芽0.0326 mg·g^(-1)DW,嫩叶0.1171 mg·g^(-1)DW,成熟叶片0.1081 mg·g^(-1)DW,整株样品0.1227 mg·g^(-1)DW;所有样品酸解液中的山柰酚含量均高于槲皮素。红凤菜嫩芽的总黄酮含量最低,整株样品的总黄酮含量不低于其他样品;山柰酚是红凤菜总黄酮的主要苷元。

红凤菜扦插繁殖技术研究

为了探讨红凤菜扦插繁殖的适宜条件,采用不同基质、不同成熟度插条及不同萘乙酸(NAA)浓度进行三个因素随机区组试验,萘乙酸、插条成熟度和基质组成对红凤菜插条生根数量均有显著影响,其中萘乙酸处理对红凤菜插条生根数量的影响最大,枝条成熟度其次,扦插基质影响较小,结果表明扦插生根的最佳组合为:1 000 mg/kgNAA×幼嫩枝条×泥炭土∶珍珠岩=1∶1,NAA极显著地促进插条生根,数量增多,同时又极显著地抑制根的伸长。