响应曲面法优化超声波提取红缘拟层孔菌总三萜工艺

采用响应面法对超声提取红缘拟层孔菌总三萜的工艺进行优化,在对温度、液料比、超声时间和超声功率单因素试验的基础之上,根据中心组合设计原理采用四因素三水平的响应曲面分析法,通过建立数学模型对各因素显著性和交互性的作用分析,得到了超声提取红缘拟层孔菌总三萜的最佳工艺条件为提取溶剂95%乙醇、提取温度70℃、液料比26:1(mL/g)、超声时间39min、超声功率450W,此时总三萜的实际提取率为9.79%。

红缘层孔菌多糖FP_2的结构与体外抗肿瘤作用的研究

从红缘层孔菌子实体中分离纯化－葡聚糖，ＭＷ约为２１４Ｋｄ，红外光谱证明其含β型糖普键，比旋值［α］_Ｄ^（１５）为＋４９°，η_（ｓｐ）为０．２２，凯氏定氮及紫外光谱分析证明ＦＰ_２为蛋白多糖。ＦＰ_２与刚果红络合及ＮａＯＨ浓度对其粘性行为的影响均显示β（１→３）ＧＬｃ为主链的分子特性。高碘酸氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、甲基化分析证实ＦＰ_２确以β（１→３）ＧＬｃ为主链，其６位上带有分支点，平均每３个糖残基带有１个支链。β－消除反应表明ＦＰ_２中的蛋白质是以Ｔｈｒ－０－糖苷键及Ｓｅｒ－０－糖苷键相联。ＦＰ_２于体外对Ｓ－１８０肿瘤细胞无抑制作用。

红缘拟层孔菌醇提物弱极性成分分析及抗肿瘤、抗氧化活性

用石油醚淋洗红缘拟层孔菌醇提物得到弱极性组分,采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析其成分;用Alamar Blue法检测其对NCI-H460人非小细胞肺癌细胞增殖的影响;用DPPH自由基清除法检测其抗氧化活性。从红缘拟层孔菌醇提物弱极性成分中鉴定出26种化合物,主要成分为麦角甾醇类、羊毛甾醇类和脂肪酸及酯类,其中含量最高的为麦角甾-7,22-二烯-3-醇(12.47%)和麦角甾醇(11.548%)。红缘拟层孔菌醇提物弱极性成分在100μg/mL时对NCI-H460肿瘤细胞的抑制率为95.93%,在20 mg/mL浓度时,其DPPH自由基清除率为95.0%。结果表明红缘拟层孔菌醇提物弱极性成分具有一定的抗肿瘤活性和抗氧化活性。

红缘拟层孔菌子实体中抗肿瘤活性成分研究

目的对红缘拟层孔菌Fomitopsis pinicola子实体的石油醚提取物、氯仿提取物、水层提取物和氯仿提取物中获得的化合物A(3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸)进行了体内外抗肿瘤活性和细胞凋亡实验研究。方法通过测定脾脏指数、胸腺指数以及血清中白介素-2(IL-2)的含量,检测了各提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果氯仿提取物和化合物A对H22荷瘤小鼠具有较高的抑瘤率,当氯仿提取物剂量为200 mg.kg-1.d-1时,抑瘤率为52.97%,胸腺指数明显高于对照组和环磷酰胺(CTX)组(P<0.05),而接近于正常组(P>0.05);脾脏指数接近于对照组和CTX组而明显高于正常组(P<0.01);IL-2的含量明显升高;化合物A具有较好的抗肿瘤作用,各剂量组之间存在良好的剂量关系;且同对照组相比存在显著性差异(P<0.01);在剂量为10mg.kg-1.d-1时,抑瘤率最高可达到52.31%。体外实验研究结果表明化合物A对人肝癌细胞SMMC-7721和人乳腺癌细胞MCF-7均具有良好的抑制作用,其抑制率最大分别为77.63%和90.29%,IC50分别为213.80μg/ml和123.03μg/ml。化合物A作用后的细胞凋亡率仅为23.2%,接近阴性对照组的20.9%,促进细胞凋亡效果不明显。结论结合体内外实验可推断化合物A(3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸)为红缘拟层孔菌抗肿瘤活性成分之一,提高机体免疫活性可能是其抗肿瘤作用的机理之一。

红缘拟层孔菌化学成分与药理活性研究概述

对红缘拟层孔菌的化学成分、药理活性、菌丝发酵和木质素降解作用等方面的研究进行了综述。化学成分研究表明,红缘拟层孔菌含有多种三萜类、多糖类、脑苷脂类、挥发性等成分;药理活性研究表明,红缘拟层孔菌具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病、抗炎镇痛、抑菌、保肝等药理作用;菌丝发酵研究表明,红缘拟层孔菌菌丝发酵的最佳碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏和麦芽汁。此外,红缘拟层孔菌对纤维素有降解作用。

红缘拟层孔菌发酵条件优化及菌丝化学成分定性分析

采用摇床培养的方法研究了红缘拟层孔菌菌丝生长的最佳碳源、氮源和pH值,并定性分析了菌丝体主要化学成分.结果表明:在测试条件下,最佳碳源为乳糖,最佳氮源为豆饼粉,最适pH为7.0.菌丝体中含有有机酸、还原糖、多糖、甾体及三萜类化合物、香豆素、挥发油等多种化学成分.本研究为红缘拟层孔菌的进一步开发利用奠定了基础.

红缘拟层孔菌的培养条件

为了解药用真菌红缘拟层孔菌的最佳培养条件,在单因素试验的基础上,以葡萄糖、蛋白胨、黄豆粉煮汁、pH值为因素,以菌丝干质量和发酵液抗肿瘤活性为标准,采用正交试验方法从中选出最优培养条件。结果表明:红缘拟层孔菌生长的最适温度为25℃,中性偏酸性环境,最适碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,以菌丝干质量为标准,最优培养条件为:葡萄糖25 g/L,蛋白胨10 g/L,黄豆粉煮汁3 g/L,pH值为6;以发酵液抗肿瘤活性为标准,最佳培养条件为:葡萄糖20 g/L,蛋白胨8 g/L,黄豆粉煮汁4 g/L,pH值为6。

红缘拟层孔菌发酵物体外抗氧化活性研究

分别采用DPPH自由基、羟自由基清除能力和氧化损伤酵母保护能力实验,对红缘拟层孔菌发酵物的体外抗氧化活性进行研究。结果表明:红缘拟层孔菌发酵浓缩物和醇沉物具有显著清除自由基和保护细胞氧化损伤的作用,二者抗氧化活性与天然抗氧化剂BHT相近,并呈线性剂量依赖性。一定的质量浓度范围内,浓缩物和醇沉物对DPPH自由基的EC50分别为7.69和7.72mg/mL,羟基EC50值分别为4.42和4.44mg/mL,紫外氧化损伤酵母细胞EC50值分别为30.40和34.87mg/mL,H2O2氧化损伤酵母细胞EC50值分别为27.12和30.61mg/mL,说明红缘拟层孔菌发酵物具有显著的抗氧化活性。

不同来源红缘拟层孔菌粗多糖的抗氧化活性

采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2’-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基、羟自由基清除实验和铁氰化钾还原法,对3种不同产地(吉林、黑龙江、云南)红缘拟层孔菌子实体(Fomitopsis pinicola fruiting body,分别记为JFPF、HFPF、YFPF)、红缘拟层孔菌菌丝体(Fomitopsis pinicola mycelium,FPM)及其发酵液(Fomitopsis pinicola fermentation broth,FPFB)粗多糖的体外抗氧化活性进行对比研究;并采用紫外线和H2O2氧化损伤酵母细胞保护实验模型,评价上述5种粗多糖对氧化损伤酵母细胞的保护作用。结果表明:这5种红缘拟层孔菌粗多糖均表现出不同程度的体外抗氧化活性,并均能明显提高氧化损伤酵母细胞的存活率,且呈一定的剂量依赖效应;其中,YFPF粗多糖对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、羟自由基的清除能力及还原能力在5种粗多糖中较强;在质量浓度为5 mg/mL时,其对3种自由基的清除率分别为78.78%、99.24%、64.38%,还原能力为0.84。FPM粗多糖对氧化损伤酵母细胞保护作用最强,可明显提高氧化损伤酵母细胞的存活率,当其质量浓度为20 mg/mL时,紫外和H2O2氧化损伤酵母细胞的存活率分别为75.48%、48.38%。因此,不同来源红缘拟层孔菌粗多糖的抗氧化活性存在差异,这为红缘拟层孔菌的开发利用提供理论依据。

响应面法优化红缘拟层孔菌胞外多糖发酵培养基

为提高红缘拟层孔菌(Fomitopsis pinicola)胞外多糖(EPS)产量,采用响应面法对其发酵培养基进行优化。在单因素实验基础上,利用中心组合设计原理,以蔗糖、酵母粉、MgSO4·7H2O浓度为实验因素,以多糖产量为响应值,采用3因素5水平响应面分析方法建立数学模型。结果显示,红缘拟层孔菌产EPS的最佳培养基为:蔗糖186g/L、酵母粉7g/L,MgSO4·7H2O 27g/L,KH2PO42g/L。在此条件下,EPS产量预测值为4.02g/L,验证值为(3.92±0.18)g/L。采用响应面法对红缘拟层孔菌EPS发酵培养基进行优化,方法可行。

红缘拟层孔菌子实体和发酵菌丝体营养成分比较分析

采用多种分析方法对不同产地红缘拟层孔菌子实体(吉林1号、黑龙江1号和云南1号)及其发酵菌丝体的营养成分进行比较分析。结果表明,3种红缘拟层孔菌子实体及发酵菌丝体中碳水化合物、蛋白质、氨基酸、脂肪酸和矿物质元素的含量差异较大,并且红缘拟层孔菌子实体样品中的碳水化合物和脂肪含量均高于菌丝体,而菌丝体样品中的蛋白质和灰分含量相较子实体高。所有样品均含有丰富的氨基酸、不饱和脂肪酸和微量元素(Zn、Fe、Mn、Cu);其中必需氨基酸总量由高到低依次为发酵菌丝体>黑龙江1号>云南1号>吉林1号;不饱和脂肪酸占比由高到低依次为黑龙江1号>发酵菌丝体>吉林1号>云南1号;微量元素总含量由高到低依次为黑龙江1号>吉林1号>发酵菌丝体>云南1号。

红贝俄氏孔菌精油化学成分及抗氧化活性分析

【目的】分析红贝俄氏孔菌精油化学成分及其抗氧化活性,为红贝俄氏孔菌的综合利用提供科学依据。【方法】联合运用乙醚提取法和水蒸气蒸馏法从红贝俄氏孔菌子实体中提取精油,采用气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分,通过峰面积归一法计算各成分的相对含量,并用羟自由基清除试验评价其抗氧化活性。【结果】从红贝俄氏孔菌精油中鉴定出35种化合物,占精油总量的88.33%,包括脂肪烃7种、芳香烃4种、醇2种、醛3种、酮3种、羧酸及其衍生物10种、含硫化合物2种和萜类化合物4种。精油中相对含量较高的化学成分有(R)-(-)-3-甲基-2-丁醇(49.70%)、4-甲基-4-羟基-2-戊酮(10.57%)、甘菊蓝(8.01%)、甲苯(4.36%)、棕榈酸(4.01%)和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸(4.01%)。红贝俄氏孔菌精油具有一定的抗氧化活性,对羟自由基的清除能力随精油质量浓度的增加而增强,半数清除浓度(EC_(50))为2.73 mg/mL。【结论】红贝俄氏孔菌精油化学成分丰富,以羧酸及其衍生物和脂肪烃为主,且具有一定的抗氧化活性,可作为天然抗氧化剂资源进行开发应用。

野生和人工培养红贝俄氏孔菌化学成分及抑菌活性测定

【目的】考察不同培养基对红贝俄氏孔菌乙酸乙酯提取物化学成分及抑菌活性的影响,为红贝俄氏孔菌的人工培养提供理论依据。【方法】分别用葡萄糖酵母膏蛋白胨培养基(GYP)和综合马铃薯培养基(CPDA)对红贝俄氏孔菌进行人工培养,采用乙酸乙酯提取菌丝体和发酵液化学成分,通过气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)对比分析野生和人工培养红贝俄氏孔菌乙酸乙酯提取物的化学成分,通过微量稀释培养法评价野生菌和人工培养红贝俄氏孔菌乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性。【结果】GC-MS分析结果表明,野生菌和培养菌丝体乙酸乙酯提取物的主要成分为棕榈酸甲酯、棕榈酸和油酸等,其中,从野生菌检测出13种成分,含量较高的主要成分是亚油酸甲酯(18.522%)、棕榈酸甲酯(15.976%)和棕榈酸(11.164%);从GYP培养菌丝体共检出13种成分,含量较高的主要成分是棕榈酸(28.677%)、油酸(15.108%)和棕榈酸甲酯(8.983%);从CPDA培养菌丝体共检出14种成分,含量较高的主要成分是棕榈酸甲酯(22.575%)、棕榈酸(17.643%)和硬脂酸甲酯(4.787%);有7种相同成分共同存在于3种提取物中,有3种成分仅在野生菌中检测到,有7种成分仅在培养菌丝体中发现。从GYP培养液中共检出9种成分,含量较高的主要成分是十八甲基环壬硅氧烷(4.663%)、1-十九碳烯(2.423%)和(E)-3-十八碳烯(1.785%);从CPDA培养液中共检出14种成分,含量较高的主要成分是棕榈酸(12.913%)、(Z,E)-2,13-十八碳二烯-1-醇(5.985%)和棕榈酸甲酯(5.591%)。体外抑菌试验结果表明,GYP培养液提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,其最低抑菌浓度(MIC)为0.80 mg/m L,其余提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC均为1.60 mg/m L。【结论】可采用GYP和CPDA作为培养基对野生红贝俄氏孔菌进行规模培养,以解决野生红贝俄氏孔菌资源不足的问题。

红缘拟层孔菌菌丝的生物学特性研究

以取自福建农林大学菌物研究中心的红缘拟层孔菌为试材,对其菌丝体的生物学特性进行研究。考察其菌丝生长速度,并以菌丝生长速度为评价指标,通过单因素试验及正交试验筛选出红缘拟层孔菌菌丝体的最适生长条件,以期为今后进一步的开发利用提供参考。通过十字划线法来研究不同碳源、氮源、pH和温度在培养皿培养条件下对红缘拟层孔菌菌丝生长的影响,对以上4个因素进行单因素试验,从中选出3个最优的水平进行正交试验。结果表明,红缘拟层孔菌菌丝生长的最适培养条件为以麦芽糖为碳源,酵母粉为氮源,培养基pH为4,培养温度为30℃。在最适的培养条件下,红缘拟层孔菌菌丝的生长速度最快,为13.10 mm·d^(-1)。试验结果为红缘拟层孔菌的人工培养提供了一定的理论依据。

红缘拟层孔菌多糖提取工艺的响应面优化

【目的】优化红缘拟层孔菌多糖的超声提取工艺,为其工业化生产和综合利用提供依据。【方法】以红缘拟层孔菌为材料,考察超声功率、提取温度、液(mL)料(g)比和提取时间对红缘拟层孔菌多糖得率的影响;在此基础上,通过Box-Behnken响应面法,设计4因素3水平试验,建立多糖提取回归方程,确定其最佳提取工艺。【结果】超声功率、提取温度、液(mL)料(g)比和提取时间4个因素对红缘拟层孔菌多糖提取的影响大小依次为:提取温度>超声功率>提取时间>液料比,在单因素试验及响应面优化基础上,确定红缘拟层孔菌多糖的最佳提取工艺为:超声功率60W,提取温度63℃,液料比21∶1,提取时间32min;在此条件下,多糖得率为12.87%,纯度为69.42%。【结论】得到了红缘拟层孔菌多糖超声提取的优化工艺,该工艺方便可行。

红缘拟层孔菌多糖分离纯化、结构表征及其免疫活性分析

红缘拟层孔菌是一种药用蘑菇以及有待开发利用的食品新资源。从红缘拟层孔菌中提取出水提多糖(FPS)和碱提多糖(FPJ),用DEAE Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B对FPS进行分离纯化,首次得到4个多糖级分FPS1-1、FPS1-2、FPS2-1、FPS2-2。MTT实验表明,4个多糖级分均具有一定的免疫活性,其中FPS1-2和FPS2-1具有一定的量效关系,FPS2-1的免疫活性高于其他3个级分。HPSEC法测得FPS1-2、FPS2-1两种级分均呈单一峰,重均相对分子质量分别为9.10×10~3和3.02×10~5。经单糖组成、红外色谱和核磁共振分析,FPS1-2为含有α-(1→6)糖苷键链接方式的杂多糖,FPS2-1为含有α-(1→4)糖苷键链接方式的杂多糖。

红缘拟层孔菌最佳母种培养基筛选及液体发酵培养液配方的初步研究

[目的]筛选并优化红缘拟层孔菌的最佳母种培养基和液体发酵培养基的配方。[方法]将等量红缘拟层孔菌分别接种4种不同的固体培养基上,定期观察各组培养基上菌丝的长势和老化度。以胞内多糖和菌丝体生物量为指标,利用单因素和正交设计实验对红缘拟层孔菌的液体培养基配方进行筛选及优化。[结果]红缘拟层孔菌液体发酵培养基最佳配方为(10 g/L):大米粉5,酵母粉1,磷酸二氢钾0.1,硫酸镁0.15,维生素B10.04。[结论]优选出了红缘拟层孔菌的最佳母种培养基和液体发酵的培养基,为下一步液体培养条件的探索奠定了基础。

活性氧在红缘拟层孔菌杀伤白血病细胞中的作用研究

红缘拟层孔菌抗肿瘤作用受到广泛关注,但其弱极性化合物对白血病细胞的增殖抑制及作用机制尚缺乏实验证据。采用MTT法评价红缘拟层孔菌不同极性组分抗肿瘤活性,结果显示氯仿组分(FPKc)可显著抑制U937细胞的增殖;进而结合流式细胞术分析FPKc杀伤白血病细胞的作用机制,发现其能够显著提升胞内活性氧含量,同时伴随细胞质膜电位下降、胞内钙离子浓度上升、线粒体膜电位崩解、细胞凋亡率增加,而活性氧抑制剂则能明显缓解细胞凋亡的发生,提高细胞存活率。因此,FPKc可能调控活性氧的过量生成促进U937细胞的死亡。

长白山红缘拟层孔菌的林下仿生栽培

红缘拟层孔菌是一种林木病原菌,但同时也是珍贵的药用真菌,因人类的采摘和利用其野生资源日渐稀少,本文介绍了红缘拟层孔菌的生态习性和林下仿生栽培技术,为其保护和可持续利用开辟了一条新途径。

段木栽培食药用菌的三种竞争性杂菌

报道了段木栽培食药用菌生产中的3种常见竞争性杂菌,包括:Annulohypoxylon stygium(Lév.)Y.M.Ju,J.D.Rogers&H.M.Hsieh,暗色环纹炭团菌,银耳瓦灰霉病害;Chondrostereum purpureum(Pers.)Pouzar,eská Mykol.13(1):17(1959),紫色软韧革菌,韧革菌、紫色革菌病害;Pycnoporus sanguineus(L.)Murrill,Bull.Torrey bot.Club31(8):421(1904),红密孔菌,红栓菌病害对3种病原菌的形态特征、危害情况进行了描述,提供子实体图片。