多肉植物红心莲茎腐病尖孢镰刀菌LAMP快速检测技术的建立

【目的】建立一种景天科多肉植物红心莲茎腐病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)快速、简便、灵敏的LAMP可视化检测方法,在茎腐病发生初期实现病原菌的快速准确检测,为病害的早期监测、诊断及防治提供依据。【方法】以EF-1a(Elongation factor-1α)基因序列为靶序列,设计LAMP(Loopmediated isothermal amplification)特异性引物;以红心莲尖孢镰刀菌DNA为模板,优化反应温度和反应时间,建立LAMP检测反应体系,开展特异性和灵敏度验证及田间病株检测。【结果】建立的LAMP反应体系可有效检测出多肉植物红心莲茎腐病尖孢镰刀菌,最佳反应温度、反应时间分别为65℃,60 min;特异性验证表明红心莲尖孢镰刀菌DNA呈绿色阳性反应,灵敏度验证表明LAMP检测最小质量浓度是10 fg·μL^-1,比常规PCR提高了10倍;采用LAMP法对15份疑似红心莲茎腐病田间样本进行快速检测,检出率为100%。【结论】本研究建立的多肉植物红心莲茎腐病菌LAMP快速检测方法不仅特异性强、灵敏度高,而且检测结果可视、假阳性低,适合田间尖孢镰刀菌引起的红心莲茎腐病的快速检测。

红心莲毁灭炭疽病菌生物学特性及高效安全药剂筛选

【目的】明确红心莲炭疽病菌毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)的生物学特性。测定不同化学结构和作用机制的6种杀菌剂对毁灭炭疽菌的室内毒力,筛选高效安全杀菌剂。【方法】采用菌丝生长速率法测定温度、pH、光周期和碳、氮源对菌丝生长的影响,以及6种杀菌剂对毁灭炭疽菌抑制效果。【结果】毁灭炭疽菌菌丝生长最适温度为30℃、最适pH为8,光周期对菌丝生长影响小,最适碳、氮源分别为淀粉和酵母。室内毒力测定结果表明,所选的6种杀菌剂对病原菌毒力差异大,其中咯菌腈的毒力最强,EC50为0.0236 mg·L^(-1);其次为咪鲜胺和吡唑醚菌酯,EC50分别为0.0306和0.0487 mg·L^(-1);甲基硫菌灵和苯醚甲环唑的毒力较弱,EC50分别为0.1526和0.1955 mg·L^(-1);多菌灵的毒力最弱,EC50为0.2199 mg·L^(-1)。【结论】温度、pH、碳氮源对毁灭炭疽菌菌丝生长具有一定影响。咯菌腈、咪鲜胺和吡唑醚菌酯等杀菌剂对毁灭炭疽菌有较好的室内毒力。