红景天苷对葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠Sirt1/FoxO3a信号通路的作用

目的探讨红景天苷(Sal)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠结肠组织Sirt1/FoxO3a信号通路的影响.方法采用3%DSS诱导建立小鼠结肠炎模型,将24只小鼠分为对照组(正常小鼠)、模型组(DSS)、Sal低剂量组(DSS+Sal 20 mg/kg)和Sal高剂量组(DSS+Sal 40 mg/kg),每组6只,7天后观察并记录小鼠的体重变化、结肠炎疾病活动指数(DAI)、结肠长度及结肠组织病理改变.采用RT-PCR检测小鼠结肠组织Sirt1、FoxO3a、白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8、核因子(NF)-κB p65、肿瘤坏死因子(TNF)-α等的mRNA含量.采用Western blot法检测小鼠结肠组织中Sirt1、FoxO3a、磷酸化NF-κB p65蛋白的表达水平.结果与模型组比较,Sal干预后小鼠的体重降低程度减缓,DAI降低,抑制结肠缩短(P<0.05或P<0.01),且Sal能够明显改善结肠组织病理损伤.与模型组比较,Sal干预可明显提高小鼠结肠组织Sirt1、FoxO3a的表达,降低磷酸化NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01);且可降低IL-1、IL-6、IL-8、NF-κB p65、TNF-αmRNA含量(P<0.05或P<0.01).结论 Sal对DSS诱导的小鼠结肠炎模型有保护作用,其作用机制可能与Sirt1/FoxO3a通路有关.

红景天苷对A549细胞辐射敏感性的影响及其作用机制

目的探讨红景天苷(Sal)对人肺腺癌A549细胞辐射敏感性的影响及其机制。方法将0、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L Sal与A549细胞共培养,然后采用不同剂量X射线照射,实验分为对照组、Sal组、X-Ray组和Sal+X-Ray组。使用CCK-8细胞增殖法检测Sal不同浓度作用下A549细胞增殖的抑制作用,筛选出半数抑制浓度(IC_(50));在IC_(50)药物浓度下处理24、48、72和96 h及给予0、2、4、6、8和10 Gy的辐射剂量,CCK-8细胞增殖法筛选出最佳作用时间及最佳辐射剂量。克隆集落形成实验检测A549细胞放射敏感性,并采用“单击多靶模型”拟合细胞存活曲线,计算放射生物学参数放射增敏比(SER)。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。对各组数据进行正态性和方差齐性的条件检验,相关性采用方差分析。结果细胞生长抑制实验结果显示,加入0、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L浓度的Sal作用于A549细胞后在48,72和96 h时,各组吸光度值符合正态分布,不同浓度的Sal均对A549细胞有抑制作用,细胞抑制率与0μmol/L组相比,P_(48h)分别为0.020,0.004,0.013,0.032,0.041,0.001,0.035和0.001;P_(96h)分别为0.017,0.007、0.042,0.038.0.021.0.006,0.019和0.006。加入Sal处理72 h后A549细胞株的抑制率分别为0、(14.02±0.15)%、(17.33±0.02)%、(20.70±0.73)%,(26.14±0.47)%、(32.62±0.82)%、(37.51±0.74)%、(49.15±1.54)%和(74.32±2.17)%,与0μmol/L组相比,差异均有统计学意义,均P<0.05。计算得出IC_(50)约为84.73μmol/L。采用Sal 84.73μmol/L联合8 Gy-X-Ray作用于A549细胞后,各组A549细胞的克隆形成率分别为(50.51±1.01)%、(29.73±1.10)%,(17.03±0.47)%、(11.13±0.44)%、(2.87±0.09)%和(2.47±0,09)%;随着照射剂量的增加,细胞的克隆形成率均降低,与0 Gy组相比,P值分别为0.031、0.002、0.025、0.002和<0.001。X-Ray±Sal组与X-Ray组相比,A549细胞克隆形成能力下降。X-Ray±Sal组的SER为3.38±0.16。加入IC_(50)值浓度的Sal,与A549细胞共培养72 h,8 Gy辐射剂量下,X-Ray±Sal组G2/M期比例为(31.67±0.34)%,Sal组为(3.91±0.62)%,X-Ray组为(21.48±0.75)%;方差分析显示,X-Ray±Sal组与X-Ray组差异有统计学意义,P=0.025o细胞凋亡检测结果显示,空白对照组细胞凋亡率为(2.57±0.04)%,X-Ray±Sal组为(6.28±0.53)%,X-Ray组为(4.83±0.23)%,Sal组为(3.43士0.01)%。与X-Ray组和Sal组相比,X-Ray±Sal组凋亡率显著增加,F=42.08,P<0.01;方差分析显示,X-Ray±Sal组与X-Ray和Sal组相比,差异有统计学意义,均P<0.01。Sal增强放疗诱导的A549细胞凋亡。结论Sal对A549细胞具有放射增敏作用,其机制可能是通过将细胞阻滞于放疗敏感时相G/M期,与诱发细胞凋亡有关,Sal或有望成为肺癌放射治疗新的增敏药物。