红汁乳菇(Lactarius hatsutake)的成功栽培—分子方法评估

自1998年始，我们已在湖南、江苏等地建立了65ha以上红汁乳菇马尾松种植园。这些林分一般三年后开始产菇，年产量可达675kg／ha。为了确认所产红汁乳菇子实体来源于接种的菌根苗而非自然侵入的孢子，我们进行了子实体、菌根苗菌根的分子研究。首次比较了试验地所产子实体与红汁乳菇-马尾松菌根苗培养钵内的菌根的ITS序列。同时，用RAPD法分析了取自于试验地内的10个红汁乳菇子实体。结果表明，10个子实体中的9个与起始菌种CX1相比具有75％～96％的相似性。其余一个及作为外群取自于340km外的广西融水的子实体与起始菌种分别具有61％和37％的相似性。我们认为，上述9个子实体与起始菌种的相关性比外群和第10个子实体更为紧密。推测认为起始菌株及其子代菌丝形成了上述9个子实体，而其余一个子实体可能来源于周边森林侵入的孢子。

松乳菇Lactarius deliciosus与红汁乳菇L. hatsudake子实体内可培养细菌多样性的研究

分离松乳菇Lactarius deliciosus与红汁乳菇L.hatsudake子实体内可培养的细菌,进行分类鉴定,为后期细菌与乳菇的相互作用研究奠定基础。利用传统平板法分离培养乳菇子实体内的细菌,进行16S r DNA片段的扩增和测序及系统发育树的构建和物种多样性分析。从松乳菇中获得66株细菌,红汁乳菇中获得48株细菌。松乳菇子实体内细菌隶属于3个门6个属10个种,其中变形菌门的γ-变型菌纲为优势类群,占细菌总数的77.28%,β-变形菌纲的Pandoraea和拟杆菌门的金黄杆菌属Chryseobacterium分别占细菌总数的12.12%和10.6%。红汁乳菇子实体内共分离、鉴定出细菌3个门7个属7个种,其中变形菌门中的γ-变型菌纲为优势类群,占细菌总数的77.09%,厚壁菌门的芽胞杆菌属Bacillus和拟杆菌门的金黄杆菌属Chryseobacterium分别占细菌总数的14.58%和8.33%。松乳菇与红汁乳菇子实体内存在一定种类和数量的细菌,其中荧光假单胞菌Psedomonas fluorescens和美洲爱文氏菌Ewingella americana为优势细菌。

利用代谢组学分析红汁乳菇-马尾松菌根苗根系分泌物

为探究红汁乳菇(Lactarius hatsudake)与宿主共生后菌根苗根系分泌物中促进红汁乳菇生长及菌根合成的潜在物质,利用非靶向代谢组(LC-MS/MS)分析红汁乳菇-马尾松菌根苗与马尾松非菌根苗的根系分泌物。结果表明:与马尾松非菌根苗相比,红汁乳菇-马尾松菌根苗根系分泌物在正、负离子模式下的差异代谢物共有352种,其中315种显著上调,37种显著下调;差异代谢物主要分布在代谢途径、抗生素生物合成、赖氨酸降解、次生代谢产物生物合成等28条通路中;差异代谢物2-异丙基苹果酸、磷酸、UDP-N-乙酰葡糖胺、茉莉酸、甲羟戊酸等参与多条代谢通路,可能在红汁乳菇-马尾松菌根形成中起重要作用。选取的9种差异显著代谢物中,1 mg·L^(-1)的D-天冬氨酸、DL-精氨酸、脱硫生物素、脱落酸对红汁乳菇JH5菌丝生长具有促进作用;1 mg·L^(-1)脱硫生物素、烟酸、脱落酸对红汁乳菇-马尾松菌根形成有促进作用。本研究可为红汁乳菇-马尾松菌根苗的高效培育提供参考。

基于菌株生长和菌根苗品质的红汁乳菇菌株筛选

【目的】筛选用于菌根苗接种的高质量红汁乳菇菌株,为提高红汁乳菇产量提供支持。【方法】以10个红汁乳菇菌株(JH1、JH2、JH4、JH5、JH7、JH8、JH10、JH11、JH12、JH13)为研究对象,将菌株分别在PDA和BAF培养基上培养后,测定菌株生长势指标(菌丝生长速度、菌丝生物量);将红汁乳菇液体菌种接种于马尾松幼苗根部合成菌根苗,以不接种为对照(CK),培养210 d后对菌根合成能力(菌根数量、菌根侵染率、菌根化率)和宿主植物生长量(苗高、主根长、地径、干质量)进行测定。对上述9个参数进行相关性分析,并用隶属函数法对菌株性状进行综合评价。【结果】①在PDA固体培养基上,以菌株JH1菌丝生长速度最快,达到3.17 mm/d;在BAF液体培养基上,以菌株JH5的菌丝生物量最大,为3.28 g/L。②所有菌株均能与马尾松根系形成外生菌根,但菌根形态并不相同。接种红汁乳菇菌株JH5的马尾松苗的菌根数量为45.65个/株,菌根化率为90.67%,菌根侵染率为79.60%,显著高于其他9个菌株,表现出较强的合成菌根苗能力。③接种不同红汁乳菇菌株的马尾松苗,在苗高、主根长、地径和干质量等指标上表现各异。接种菌株JH4的马尾松苗高、主根长和干质量表现最优,较对照分别提高24.45%,16.72%和53.33%;接种菌株JH5的马尾松苗地径生长量表现最优,较对照提高5.19%。④相关性分析表明,菌丝生物量与菌根化率和菌根苗干质量呈极显著正相关(P<0.01),菌根数量与菌根化率和菌根苗地径呈极显著正相关(P<0.01)。⑤基于隶属函数法的综合评价结果表明,红汁乳菇JH5为适合培育菌根苗的最佳菌株,JH4和JH7为次优菌株。【结论】筛选出1个优良红汁乳菇菌株JH5,该菌株的生长势和菌根苗品质整体表现较好。

不同碳氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响

【目的】探讨不同碳、氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响,为红汁乳菇的开发利用提供依据。【方法】以红汁乳菇LH-1菌株为供试材料,以菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数为测定指标,研究了13种碳源、22种氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响。【结果】红汁乳菇具有较广的碳源及氮源谱,在13种碳源中,以果糖为碳源时,红汁乳菇菌落长势最好,其菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数分别为48.31mm、8.37mm/d和41.87;在22种氮源中,以酵母膏为氮源时红汁乳菇菌落长势最好,其菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数分别为50.82mm、7.84mm/d和39.18;红汁乳菇对氨基酸及铵盐类物质利用较差。【结论】红汁乳菇菌丝生长的最佳碳源、氮源分别为果糖和酵母膏。

野生松乳菇和野生红汁乳菇蛋白多糖的研究

选用合适的溶剂、方法、条件从野生松乳菇和野生红汁乳菇中提取蛋白多糖。粗多糖经Sevage法脱游离蛋白、DEAE-纤维素柱、SephadexG100柱层析分离、纯化,纯化的蛋白多糖进行紫外及红外光谱分析并测定蛋白质、多糖的含量及抗氧化能力。结果表明,松乳菇蛋白多糖中蛋白质和多糖含量分别为24.53%和68.83%;红汁乳菇中分别为15.53%和66.52%,两蛋白多糖均具有体外抗氧化的能力。经鉴定松乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和甘露糖,红汁乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和半乳糖。

红汁乳菇醇提物对水稻、稗草的化感影响

研究了红汁乳菇子实体乙醇抽提物对水稻、稗草的化感影响。用不同浓度的红汁乳菇子实体乙醇抽提物处理水稻和稗草种子 ,测量处理后不同时间的水稻和稗草幼苗的根长和苗高 ,按照 Willamson,G.B.的方法计算化感作用效应 (RI)。结果表明 :红汁乳菇乙醇抽提物对稗草幼苗的生长有显著的抑制作用 ,能够导致稗草叶片发黄 ,缩短稗草的根和苗 ,甚至延迟部分种子的萌发。其中 8.5 mg/ ml的乙醇抽提物处理稗草种子后 3d、8d,对根长的化感作用效应分别为 - 0 .98、- 0 .5 8;对苗高的化感作用效应分别为 - 0 .5 0、- 0 .5 1。 6 .5 m g/ ml和 10 .5 mg/ ml处理组的结果与 8.5 mg/ ml处理组的结果在 p=0 .0 5水平上差异不显著。对水稻幼苗的生长表现出一定的调节作用 ,在较低浓度下 (≤ 4 .5 0 mg/ m l)对水稻幼苗有一定促进作用 ,如 4 .5 0 m g/ ml处理水稻种子后 3d、8d,对苗高的化感作用效应分别为 0 .2 5、0 .10 ;在较高浓度下 (如≥ 6 .5 0 mg/ ml)对水稻根长和苗高均为抑制作用 ,6 .5 0 mg/ ml时抑制作用最强 ,处理水稻种子后 3d、8d对幼苗的根长的化感作用效应分别为 - 0 .93、- 0 .4 8;对苗高的化感作用效应分别为 - 0 .5 0、- 0 .2 2 ,在 p=0 .0

红汁乳菇子实体营养成分的测定与分析

测定了红汁乳菇子实体中氨基酸、矿质元素、灰分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维和多糖含量。结果表明,测定的17种氨基酸中,7种必需氨基酸含量占氨基酸总量的43.26%;矿质元素K、Na、Ca、Fe、Mg、Mn、Cu、Zn含量分别是2435.55、158.71、22.70、226.12、29.62、4.02、3.90和17.34mg 100g;灰分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、多糖含量分别是5.82%、29.12%、3.98%、7.68%和6.99%。

红汁乳菇中一个新的薁类色素(英文)

从担子菌红汁乳菇的子实体中分离得到一个新的绿色薁类色素,其化学结构通过波谱学方法包括二维核磁共振鉴定为:1-[(15E)-丁烯-17-酮]-4-甲基-7-异丙基薁。同时还从该菌中分离得到其它三个红紫色的薁类色素。

红汁乳菇及人工合成菌根的形态结构特征

用生物显微镜和扫描电子显微镜研究了红汁乳菇（Lactarius hatsutake Tanaka）子实体、担孢子、菌丝体的形态及与马尾松（Pinus massoniana Lamb.）形成的菌根的结构特征,并首次报道了红汁乳菇--马尾松形成的菌根菌丝套的网格结构.红汁乳菇担孢子大小为5.87～6.40×7.04～7.62 μm;表面棱脊高度0.30～0.45 μm,宽0.39 μm,相邻脊间最宽距离2.0 μm.菌丝套厚度平均为9.31 μm;哈蒂氏网平均厚度63.86 μm.菌丝直径、菌丝套厚度、哈蒂氏网厚度、菌根直径的比例为1∶4.7∶31.9∶138.4.菌丝套网格中网孔大多呈菱形,少数为不规则四边形.网孔长度为宽度的2.85倍,网孔宽度为网脊宽度的6倍.对菌根外延菌丝、斜面培养和液体培养菌丝的观测发现,红汁乳菇菌丝相邻细胞连接处没有锁状联合.

红汁乳菇、半血红乳菇及橙色乳菇的rDNA ITS序列分析

从分子角度对红汁乳菇(Lactarius hatsudake)、半血红乳菇(Lactarius semisangui fluus)及橙色乳菇(Lactarius akahatsu)的分类地位进行了阐述。利用真菌通用引物对湖南衡阳的红汁乳菇rDNA的转录间隔区(ITS)进行扩增、测序。所得序列与GenBank中的半血红乳菇及橙色乳菇的ITS序列比较,最后得出Lactarius semisanguifluus和Lactarius hatsudake是同物异名,而Lactarius semisanguifluus和Lactarius akahatsu则不是同种的结论;试验中还发现GenBank中的AF096988 Lactarius semisanguifluus是错误的命名种,应该是乳菇属中的松乳菇。

红汁乳菇固体培养条件响应面法的初步研究

在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对影响红汁乳菇固体培养的主要因素(pH、温度和VB含量)进行优化,建立影响因素与响应值(菌落直径)之间的函数关系。根据回归方程寻优得出,最佳工艺条件为pH6.5、温度23.5℃、VB含量为56.9mg/L。红汁乳菇菌落的最大直径为78.5mm。结果表明:响应面法对红汁乳菇固体培养条件优化合理,可为工业化生产提供一定理论依据。

红汁乳菇菌丝体液态发酵条件研究

采用现代生物发酵技术,对红汁乳菇菌丝体液态发酵的生长周期、温度、pH值、碳营养、氮营养等条件进行研究。结果表明:发酵后5 d是其对数增长高峰,5 d后菌丝体生长进入稳定期,7 d后开始衰亡;红汁乳菇液态培养最适温度为27℃,发酵液中菌丝体干重最高,达8.7 g/L;适宜起始pH值为6.0,菌丝体干重为8.2 g/L;以3%玉米粉作碳源、0.3%蛋白胨作氮源的菌丝体干重最高。采用现代生物发酵技术,对红汁乳菇菌丝体液态发酵的生长周期、温度、pH值、碳营养、氮营养等条件进行研究。结果表明:发酵后5 d是其对数增长高峰,5 d后菌丝体生长进入稳定期,7 d后开始衰亡;红汁乳菇液态培养最适温度为27℃,发酵液中菌丝体干重最高,达8.7 g/L;适宜起始pH值为6.0,菌丝体干重为8.2 g/L;以3%玉米粉作碳源、0.3%蛋白胨作氮源的菌丝体干重最高。

红汁乳菇多糖提取最佳工艺研究

对红汁乳菇多糖提取、纯化工艺进行了优化研究 ,结果表明在料液比 1∶30 ,浸提温度 95℃浸提时间 2h ,pH8 0 ,可获得最佳提取效果。在醇析浓度为 70 % ,V (氯仿 ) :V (正丁醇 ) =1∶0 2 ,V (氯仿 +正丁醇 ) :V (样品 )=1∶1时 ,纯化含量为 5 8%。同时用超声波法对红汁乳菇多糖的提取作了研究 ,其得率为 6 99% ,效果较佳。

红汁乳菇液体发酵基质配方的优化

【目的】研究不同营养物质对红汁乳菇发酵液抑菌效果的影响,为红汁乳菇的开发利用提供依据。【方法】以红汁乳菇菌株SH-3为研究对象,大肠杆菌为指示菌,用摇瓶培养法研究不同碳源、氮源对红汁乳菇发酵液抑菌效果的影响,采用二次通用旋转组合设计安排试验方案,并通过回归分析和响应面分析优化红汁乳菇发酵基质的配方。【结果】在试验范围内,以葡萄糖和麦芽糖为碳源,蛋白胨和酵母膏为氮源时,发酵液的抑菌效果最佳;最佳的液体发酵基质配方为:葡萄糖48.30g/L,麦芽糖45.29g/L,蛋白胨4.69g/L,酵母膏4.12g/L,KH2PO41.0g/L,MgSO40.5g/L,水1 000mL(pH=7.0),抑菌圈理论直径为2.01cm。【结论】发酵基质配方影响发酵液的抑菌效果,红汁乳菇发酵的最佳碳源为葡萄糖和麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨和酵母膏,最终确定的最佳基质配方对提高红汁乳菇发酵的经济效益有一定参考作用。

红汁乳菇菌丝体醇提物对水稻、稗草的化感作用

用不同浓度的红汁乳菇菌丝体乙醇抽提物处理水稻和稗草种子,7 d后测量水稻和稗草幼苗的苗高和根长.结果表明:不同浓度的抽提物对稗草种子均起抑制作用,其中质量浓度为7.0 g/L的抽提物对受试稗草种子的苗高和根长的化感效应分别为-0.787 7和-0.711 3.质量浓度为1.75 g/L时,对水稻幼苗的苗高和根长的促进作用分别为0.308 1和0.306 3;质量浓度大于等于3.5 g/L时,对水稻苗高和根长均为抑制作用;质量浓度为7.0 g/L时,化感效应分别达到-0.414 7、-0.498 6.运用GC-MS联用分析抽提物的化学成分,结果表明:抽提物中含有低分子量的脂肪酸、有机酸、酮、酯、醇、吲哚、烃、苯酚类等化合物.

红汁乳菇子实体与液态发酵菌丝体营养成分分析

为了解红汁乳菇子实体和人工培养菌丝体营养成分的区别,对红汁乳菇子实体和人工培养菌丝体所含的水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分和粗多糖等各项营养成分的含量进行了比较与分析。结果显示,野生红汁乳菇子实体和人工培养菌丝体的各项营养成分含量无明显差异。

红汁乳菇液体发酵试验初报

本文探讨了红汁乳菇液体发酵是可行的 ,并筛选出以马铃薯为主料的培养液 ,其红汁乳菇菌球 (或菌体 )产量高。

红汁乳菇酸奶发酵条件优化研究

研究以红汁乳菇发酵液和鲜牛奶为原料,用保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌为发酵剂进行乳酸发酵,L9(34)试验结果表明:红汁乳菇菌丝体发酵液25%、鲜牛乳75%、蔗糖9%、接种量3%,采用酸奶制作工艺,在42℃条件发酵4h,生产出具有菇味清香、酸甜适口、凝乳均匀、色泽淡黄的凝固型红汁乳菇酸奶。

红汁乳菇和多汁乳菇的化学成分及其开发利用前景

报道了红汁乳菇和多汁乳菇的主要化学成分及其在营养、药用、橡胶生产和营林中的应用价值 。