四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K5 6 2 /ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P <0 .0 1) ;但对K5 6 2 /ADM细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K5 6 2 /ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

钙离子载体A23187对人红白血病细胞株K562超微结构的影响

目的观察钙离子载体A23187对人红白血病细胞株K562超微结构的影响，为白血病的治疗提供新思路。方法体外培养K562细胞，密度增至（1-2）×10^5几时随机分为观察组和对照组（容积均为5mL），观察组取2mmol/L细胞溶液加入A23187溶液7．5灿，至最终浓度为3panol/L；对照组加入等体积生理盐水。细胞培养到第10、20和30Jnin时，依次取两组细胞溶液离心、制备超薄切片，H-7500型透射电镜下观察其超微结构。结果对照组K562细胞超微结构无明显改变；观察组K562细胞线粒体呈现空泡样改变和基质深染。结论钙离子载体A23187在体外可能通过改变人红白血病细胞株K562细胞超微结构诱导其凋亡，此为白血病的临床治疗提供了一种新思路。

氨肽酶抑制剂对人白血病细胞株凋亡的研究

目的 探索氨肽酶抑制剂对体外培养人红白血病细胞株K5 62作用及其机制。方法 应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、荧光显微镜、透射电检测镜、流式细胞仪观察氨肽酶抑制剂对人红白血病细胞株K5 62生长的影响。结果 氨肽酶抑制剂能明显抑制白血病细胞生长 ,其半数生长抑制剂量为 2 8.8μg/ml;透射电镜超微结构证实氨肽酶抑制剂能诱发肿瘤细胞凋亡的典型形态变化 ;流式细胞仪检测证实氨肽酶抑制剂可诱发细胞凋亡 ;免疫组化SP法及流式细胞仪定量分析发现氨肽酶抑制剂能使癌基因Bcl 2表达降低、抑癌基因P53表达增强。结论 氨肽酶抑制剂能诱导K5 62细胞凋亡 ,其作用机制可能与癌基因Bcl 2表达减少。

中华眼镜蛇毒对K562和难治性白血病细胞体外作用的研究

目的:探讨中华眼镜蛇毒(Naja Naja Actra Venom,NNAV)抗白血病作用。方法:应用不同剂量NNAV和阿霉素(THP)于人红白血病细胞株(K562)和难治性白血病细胞株,观察NNAV直接或协同THP的细胞毒性及采用流式细胞仪进行凋亡检测。结果:NNAV对K562有明显的细胞毒及促进细胞凋亡作用,并剂量依赖地增强THP杀伤作用。但对难治性白血病细胞株作用不一:单用NNAV有细胞毒性25%(5/20);单用无效联合THP有效55%(11/20),以NNAV 100μg/ml+THP 5μg/ml作用最强;凋亡百分率增多60%(12/20)。临床对比研究结果,体外实验THP及NNAV无效的9例病人,含蒽环类全部无效(其他机制药物有效3例);THP及NNAV有效的5名病人,含蒽环类缓解2例,1例其它药物缓解;双相吻合率超过60%。结论:NNAV体外对难治性白血病细胞株有一定杀伤作用,和适当剂量THP合用有效率及杀伤作用明显增加,提示蛇毒中可能含有特殊抗难治性白血病的组分。

绞股蓝总皂甙对小鼠S_(180)肉瘤及K_(562)细胞的抑制作用

目的 绞股蓝总皂甙 (GP)对小鼠S180 肉瘤及K562 细胞的抑制作用。方法 通过动物实验观察绞股蓝总皂甙对小鼠S180 肉瘤生长状况、肿瘤坏死面积 (TNA)与肿瘤总面积 (TTA)的比率、瘤周瘤内免疫活性细胞浸润状况及荷瘤小鼠脾脏的影响 ;通过细胞培养观察绞股蓝总皂甙对K562 细胞生长的抑制作用。结果 经重复实验证实 ,GP能显著抑制小鼠S180 肉瘤的生长 ,TNA与TTA的比率显著增加 ,瘤周尤其是瘤内淋巴细胞、巨噬细胞浸润数量明显增加 ,荷瘤小鼠脾重增加、脾白髓数目增多、体积增大。同时证实 ,GP对K562 细胞株具有明显的生长抑制作用。结论 GP的抑瘤作用主要是直接杀伤瘤细胞 。

红葱抗稻瘟霉活性成分研究

目的阐明红葱抗稻瘟霉活性的物质基础。方法利用稻瘟霉筛选体系对红葱的60%(φ)乙醇提取物及其氯仿、正丁醇和水的萃取部分进行活性筛选,并对活性部位的化学成分进行分离鉴定。结果与结论从活性部位中分离得到10个化合物,通过理化性质和波谱数据鉴定它们的结构分别为:异红葱甲素(1)、异红葱乙素(2)、红葱乙素(3)、β-谷甾醇(4)、8-羟基-3,4-二甲氧基-1甲-基蒽醌-2-羧酸甲酯(5)、4羟基红葱乙素(6)、hongconin(7)、4,8二羟基3甲氧基1甲基蒽醌2羧酸甲酯(8)、dihydroeleutherinol(9)、1,3,6-三羟基-8-甲基蒽醌(10)。其中,9和10为首次从该属植物中分得。化合物2、3、5、6、7、9、10具有较好的诱导稻瘟霉菌丝变形的活性,它们的最小变形浓度(minimummorphologicaldeformationconcentrate,MMDC)分别为30、30、170、130、55、60、150μmol·L-1。用MTT法测定10个化合物的抗肿瘤活性,发现化合物2、3、5、6、7、9有较强的抑制人类红白血病细胞株K562细胞生长的活性,它们的IC50值分别为33、49、266、35、174、154μmol·L-1。

逆转肿瘤细胞多药耐药性的四物合剂有效组分

目的:研究四物合剂逆转人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药作用的药效活性组分。方法:用大孔吸附树脂分离四物合剂,并用体外细胞模型作药效评价,寻找发现活性部位,再用HPLCMS方法研究活性部位的化学组成,进而确定其主要活性组分。结果:熟地黄粗多糖对K562/ADM的耐药性有明显的逆转作用,其逆转倍数与对照组(无逆转剂)相比有显著差异(P<0.01),并且与主要活性部位的逆转作用无明显差异(P>0.05)。结论:熟地黄粗多糖能逆转K562/ADM细胞的多药耐药性,是四物合剂逆转K562/ADM多药耐药性的主要活性组分之一。

三氧化二砷对K_(562)细胞凋亡的诱导及生长抑制作用的研究

目的 :研究三氧化二砷 ( As2 O3)对人红白血病细胞株 K56 2 的生长抑制和凋亡诱导作用。方法 :以As2 O3作为耐药逆转剂 ,用台盼兰排染法 ,噻唑兰 ( MTT)还原法 ,Hoechst33342和 PI荧光染色法 ,流式细胞仪技术和荧光分光光度法 ,观察了不同浓度的 As2 O3( 0 .2～ 5 .0 μm ol/L)对人红白血病细胞株 K56 2 的生长抑制和凋亡诱导作用。结果 :As2 O3对 K56 2 细胞具有明显生长抑制和凋亡诱导作用 ,其作用强度在一定范围内均具药物浓度和时间依赖性。结论 :As2 O3主要以诱导肿瘤细胞凋亡而表现其毒性作用。

提高体外细胞培养的成功率

提供介绍在ＲＰＭＩ－１６４０培养液中加入适量丙酮酸钠前后，肿瘤细胞株Ｋ５６２（人红白血病细胞株）、ＣＥＭ（人类Ｔ淋巴细胞白血病株）等状态的变化情况，旨在阐述体外细胞培养中较为可观的两点因素．

硝普钠促进辐射诱导的K562细胞凋亡的相关研究

目的:观察经不同剂量X射线及联合一氧化氮供体硝普钠在照射后不同时间点对K562细胞生长增殖及凋亡的影响,为提高肿瘤放射治疗效果提供理论依据。方法:以人红白血病细胞株K562细胞为研究对象,加入终浓度为0.1mmol/L的硝普钠共孵育一段时间后,经不同剂量X射线照射,继续培养不同时间分别收获细胞样品,MTT法检测细胞增殖,AO/EB双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。结果:单纯辐射与硝普钠联合辐射对K562细胞的生长增殖均有一定的抑制作用并诱导其凋亡,且硝普钠与辐射联合作用时,X射线诱导K562细胞生长增殖抑制及细胞的凋亡率大于硝普钠和X射线单独作用之和,且随时间的延长及照射剂量的增加而增加;硝普钠对细胞周期的影响在照射前后小剂量(<4Gy)时没有明显差异,均以G0/G1期阻滞为主,只是在大剂量时有明显不同;8Gy、12h时,照射前以G0/G1期阻滞为主,照射后12h出现明显的G2/M期阻滞,随照射剂量的增加G2/M期阻滞达到高峰,以后随时间的延长G2/M期阻滞逐渐解除,组间有统计学差异。结论:硝普钠在一定程度上可以抑制肿瘤细胞的生长增殖并促进辐射所致肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性。

K_（562）细胞及K_（562）／ADM耐药细胞内cAMP及cGMP含量的测定

测定正常人淋巴细胞内环磷腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷鸟苷（ｃＧＭＰ）含量和人红白血病细胞株（Ｋ５６２）及其耐阿霉素细胞株（Ｋ５６２／ＡＤＭ）的增殖状况和细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量。结果Ｋ５６２与Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞内ｃＡＭＰ含量均低于正常人淋巴细胞内ｃＡＭＰ，但无显著差异，Ｋ５６２与Ｋ５６２／ＡＤＭ之间细胞内ｃＡＭＰ的含量有显著差异，ｃＧＭＰ含量均未见差异。Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞的增殖状况与ｃＡＭＰ含量呈负相关（ｒ＝－０．５８２３，Ｐ＜０．０５），加入逆转耐药的药物潘生丁、维拉帕米后，其增殖速度下降且差异显著（Ｐ＜０．０５），ｃＡＭＰ含量呈上升趋势；Ｋ５６２细胞也有此改变，但两种药物对两种细胞的影响程度不同。

硼替佐米诱导急性髓性白血病细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib、Bor)诱导急性红白血病细胞株(TF1)和急性早幼粒白血病细胞株(NB4)凋亡及其对SALL4基因表达的影响。方法 MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测SALL4蛋白表达;实时荧光定量PCR检测SALL4 RNA的表达变化;Western Blotting检测SALL4蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示,硼替佐米能够抑制两种细胞的增殖,呈时间和计量依赖性,TF1细胞和NB4细胞48 h IC50分别为(29.15±0.55)和(30.55±0.74)nmol.L-1;流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着硼替佐米浓度的增加而增加,呈剂量依赖性。免疫细胞化学显示两种细胞均表达SALL4蛋白,定位于细胞核;实时荧光定量PCR结果表明,经不同浓度Bor(10,30,50 nmol.L-1)处理24 h后,两种细胞的SALL4 RNA均出现了不同程度的下调,50 nmol.L-1 Bor作用后,SALL4基因表达下降为对照组的45.11%(TF1)和69.77%(NB4),差异均具有统计学意义(P<0.05);Western Blotting结果表明,Bor能够抑制两种细胞中SALL4B蛋白的表达,具有时间剂量依赖性。结论硼替佐米能够抑制TF1、NB4细胞的增殖并促进细胞凋亡,同时抑制SALL4基因表达。

硝普钠促进辐射诱导的K562细胞凋亡的相关研究

目的观察硝普钠联合辐射对 K562细胞生长增殖及凋亡的影响,为提高肿瘤放射治疗效果提供理论依据。方法以人红白血病细胞株 K562细胞为研究对象,经不同剂量 X 线照射后不同时间收获细胞,MTT 法检测细胞增殖,AO/EB 双染法和流式细胞仪检测凋亡和细胞周期。结果单纯辐射与硝普钠联合辐射均能抑制

黄芪总黄酮诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的:研究黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus,TFA)对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡的作用。方法:应用MTT比色法检测不同浓度TFA对K562细胞的抑制作用。

EPO激活HEL细胞内CREB转录因子

CREB(cAMPresponseelementbindingprotein)是一种细胞核内转录因子 ,激活的CREB能与特异调控元件CRE(cAMPresponseelement)结合 .研究结果显示 ,EPO(Erythropoietin)诱导HEL细胞 (Humanerythroleukemiacell) 2 0min后 ,HEL细胞核内CREB的 133位丝氨酸残基被磷酸化 ,并具有转录因子功能 .用 133位丝氨酸磷酸化的CREB特异抗体能抑制CREB转录因子与CREDNA序列的结合 ,揭示了CREB133位的丝氨酸残基磷酸化不仅与CREB转录因子活性相关 。