2例肿瘤治疗相关急性红系白血病的诊断及治疗

目的总结肿瘤治疗相关急性红系白血病(AEL)的诊断及治疗方法。方法回顾性分析2例肿瘤治疗相关AEL患者的临床资料。结果1例原发病为套细胞淋巴瘤,经化疗后行自体造血干细胞移植达完全缓解;患者诊断套细胞淋巴瘤8年后出现乏力伴面色苍白,做检查发现全血细胞严重减少并骨髓细胞学符合AEL,诊断为AEL;后合并有肺炎、感染性休克,应用亚胺培南西司他丁钠等高级别抗生素抗感染并积极治疗休克效果不佳,因病情重未能接受针对AEL的治疗;于诊断AEL后18 d死亡。1例原发病为直肠癌,经系统化疗治疗1年后出现乏力伴面色苍白;做检查发现全血细胞极度减少并骨髓细胞学符合AEL,诊断为AEL;入院后呕血、尿血等多发出血,粒细胞缺乏伴发热;经治疗好转后接受了两个疗程的去甲基化药物(阿扎胞苷及维奈克拉)治疗;于诊断AEL后2个月17天死亡。结论肿瘤治疗相关AEL发病时贫血、出血、感染多见,全血细胞严重减少,常规处理效果差,患者病情危重且进展迅速,采用甲基化基化药物治疗后效果不理想,生存时间短,病死率高。

核转录因子红系2相关因子2和p62在宫颈鳞状细胞癌和上皮内病变中的表达及诊断价值

目的 探讨核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)与选择性自噬接头蛋白p62/Sequestosome1 (SQSTM1)在诊断宫颈癌和上皮内病变中的价值,并且分析二者在不同宫颈病变中的相关性。方法 收集2008年1月至2021年12月南通市肿瘤医院120例宫颈鳞状细胞癌(SCC)、102例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)和101例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)病人及49例宫颈良性/反应性鳞状上皮病人的石蜡标本,免疫组织化学方法检测其中Nrf2和p62的表达,并分析二者在不同宫颈病变中的相关性及评估二者在诊断中的价值。结果 Nrf2和p62在LSIL、HSIL和SCC中表达明显高于良性/反应性宫颈鳞状上皮(均P<0.05),Nrf2和p62在HSIL和SCC中表达明显高于LSIL(均P<0.05),p62在SCC中表达明显高于HSIL(P<0.05),而Nrf2在HSIL中表达稍低于SCC(P<0.05)。Nrf2和p62在良性/反应性宫颈鳞状上皮、LSIL、HSIL和SCC中均具有正相关性,相关系数分别为0.63、0.58、0.69和0.38(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,除Nrf2在诊断HSIL与SCC中差异无统计学意义外,Nrf2、p62以及联合Nrf2和p62在诊断良性/反应性鳞状上皮与LSIL、良性/反应性鳞状上皮与HSIL、良性/反应性鳞状上皮与SCC、LSIL与HSIL、LSIL与SCC、HSIL与SCC各个组别中均差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 Nrf2和p62在良性/反应性鳞状上皮中不表达或低表达,LSIL中表达有所增高,HSIL和SCC中表达最高,二者在不同宫颈病变中均具有正相关性,而且单独使用Nrf2或p62就能够有效诊断不同的宫颈病变,二者联用诊断效果更佳。

白藜芦醇对血虚证小鼠模型的改善作用及诱导红系分化机制研究

目的 以血虚证小鼠模型和K562细胞为对象,研究白藜芦醇促进骨髓造血恢复及诱导红系分化的作用机制。方法 采用环磷酰胺诱导血虚证小鼠模型,BALB/c小鼠随机分为对照组,模型组,白藜芦醇低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)),每组8只,连续给药10 d后,采用全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血血常规;采用酶联免疫法(ELISA)分析小鼠血浆中白细胞介素-6(IL-6)、促红细胞生成素(EPO)浓度;流式细胞术检测不同浓度白藜芦醇对K562细胞凋亡、周期分布及细胞表面红系标志蛋白(CD71、CD235a)的影响;RT-qPCR检测红系分化相关基因(CD235a,CD71,GATA1,γ-globin,HBA1,HBB 和 ZFPM1)的表达,Western blot法检测JNK1/2/3和ERK1/2表达。结果 与模型组比较,白藜芦醇可不同程度提高模型组小鼠外周血中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、网织红细胞(RET)数量与血红蛋白(HGB)浓度(P<0.05),升高血浆中的IL-6、EPO浓度(P<0.05)。流式细胞术结果表明,白藜芦醇能够通过S期阻滞抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡;与对照组相比,白藜芦醇能显著增加红系标志抗原CD71、CD235a阳性表达率,且存在浓度依赖性(P<0.05)。RT-qPCR结果表明,白藜芦醇可呈剂量依赖性上调CD235a、CD71、GATA1、γ-globin、HBA1、HBB等红系分化相关基因的表达(P<0.05)。Western blot结果表明,白藜芦醇可上调ERK1/2和JNK1/2/3蛋白的磷酸化水平。结论 白藜芦醇能够通过调节JNK通路和ERK通路,增加细胞表面抗原CD71、CD235a阳性表达,增加红系分化关键基因的表达,诱导K562细胞红系分化,并能改善小鼠由环磷酰胺所致的血虚证症状,为白藜芦醇促进造血的作用机制研究奠定基础。

核转录因子红系2相关因子2在肝缺血再灌注损伤中的作用及麻醉药物干预的研究进展

肝缺血再灌注损伤(IRI)是一种常见的肝脏损伤类型,严重影响患者预后。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)是一种重要的转录因子,参与多种细胞生理活动。研究表明,Nrf2在肝脏IRI中起重要调控作用,激活Nrf2及相关通路能够清除活性氧,减少氧化应激损伤,从而减轻肝脏IRI。近年来,麻醉药物调控Nrf2信号通路在基础实验和临床试验中减轻肝脏IRI均取得一定成果,但仍处于实验阶段。本文通过分析近年来麻醉药物相关研究进展,对Nrf2在肝脏IRI中的作用及机制进行综述,以期为肝脏IRI的防治提供新方向。

miR-144/451的体外红系发生示踪揭示LINC01569的潜在红系发生调控影响

目的用已构建的miR-144-GFP-H1人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)示踪细胞株,以GFP荧光信号报告miR-144表达描述红系发生的进展程度,探究在红系发生过程中lncRNA的潜在功能并初步验证其功能影响。方法利用已构建的miR-144/451-GFP-H1细胞株(下文简称144-H1)进行体外红细胞诱导培养。以CD71,GPA表面分子描述进入红系发生阶段的细胞亚群。以miR-144的GFP报告基因为关键区分,对GFP阳性(高红系发生倾向)和阴性细胞群(低红系发生倾向)分别进行转录组测序,获取差异性表达的lncRNA。选取具备验证价值的lncRNA条目进行初步功能验证。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术设计对应lncRNA的功能干扰方案并获取对应lncRNA功能敲除的144-H1细胞株。使用该敲除细胞株与非敲除的144-H1细胞株进行红细胞的平行诱导培养,寻找差异节点,初步验证其对在体外发育模型下对红系发生的影响效应。结果1)构建的144-H1细胞株能够在进入体外红细胞诱导阶段后表达GFP荧光蛋白,提示miR-144的启动。2)在CD71,GPA双阳群中,GFP阳性亚群和GFP阴性亚群存在显著的lncRNA表达差异。3)对多个lncRNA条目设计了能够有效干扰其功能的序列区段删除基因编辑方案。验证编辑成功。在敲除细胞株中,lncRNA的一部分序列被直接删除。4)在红细胞诱导培养的平行验证试验中,LINC01569的功能敲除株对比非敲除株表现出明显的流式亚群差异和细胞增殖能力差异:①敲除株的GFP荧光持续高表达;②敲除株CD71-GPA双阳群在红细胞成熟过中比例持续降低;③敲除株未观察到显著的血红蛋白表达,无明显红色;④敲除株细胞增殖能力远低于非敲除株(P<0.05)。结论成功利用144-H1细胞株对lncRNA在红系发育中的潜在功能进行了探究,可设计更精密的体外发育实验来提高lncRNA功能的抓取精度。在差异性表达的lncRNA条目中,LINC01569经初步验证,对红系发生过程存在调控作用。LINC01569的功能缺失严重影响红细胞的正常分化与增殖。LINC01569在红系发生过程中的具体调控机制有待进一步探索与研究。

一种高效小鼠骨髓红系造血岛富集方法的建立

红系造血岛(erythroblastic island,EBI)是哺乳动物红细胞终末分化的独特微环境,EBI研究对于深入理解生理和病理条件下造血微环境的组成和变化至关重要。骨髓中EBI分布较为分散,现有富集方法的富集效果不尽如人意。研究旨在建立一种新的更高效的小鼠骨髓EBI富集方法。在前人研究的基础上进行了创新和优化,建立了以二次密度梯度沉降结合洗涤去除非EBI细胞团为核心的富集方法。通过细胞团形态观察、瑞氏吉姆萨染色、成像流式技术(imaging flow cytometry,IFC)等手段比较了该方法与现有富集方法的富集效果,在直接镜检和瑞氏吉姆萨染色中发现,方法4富集体系中少见单细胞,主要为以巨噬细胞为核心周围围绕红细胞的典型EBI结构。使用IFC技术对于F4/80、CD71以及CD11b进行分析,富集产物中约63.7%的细胞团为EBI,高出之前方法的最高标准(方法3),约38.4%。富集的EBI中发现巨噬细胞为CD11b^(-),且除红细胞外,部分EBI中存在CD11b^(+)细胞,与之前的研究相符。结果显示,该方法在没有造成EBI结构明显破坏的情况下,富集效果在去除单细胞以及非EBI细胞团等方面显著优于现有其他方法,适合对EBI纯度要求较高的研究,为造血微环境研究提供了有效的方法和手段。

转录因子Ikzf1促进小鼠胎肝来源红系细胞终末分化

目的通过分析单细胞转录组数据,挖掘红系终末分化过程中潜在的转录因子Ikzf1,并探究其在终末红系分化中的功能。方法利用SCENIC方法对人和小鼠红系细胞的单细胞转录组数据进行转录因子预测,从bulk转录组数据获取所预测因子Ikzf1在红系终末分化过程中的表达情况并在小鼠胎肝红系分化体系中进行RT-qPCR验证。在小鼠胎肝来源的红系细胞中利用短发夹RNA(shRNA)干扰技术敲低Ikzf1,流式分选GFP阳性的成功转染细胞,RT-qPCR验证其敲低效率,流式细胞术分析Ikzf1敲低后对红系分化和脱核的影响。结果SCENIC预测Ikzf1是人与小鼠红系终末分化共同的转录因子,转录组及RT-qPCR分析显示其在终末分化较早期的原红和早幼红细胞阶段表达量较高。将小鼠胎肝来源红系细胞中Ikzf1基因的表达成功敲低,流式细胞术检测发现Ikzf1敲低导致红细胞分化阻滞在早幼红细胞时期,细胞脱核率显著降低(P<0.05)。结论转录因子Ikzf1在红系终末分化早期高表达并参与促进红系终末分化和脱核。

核因子红系2相关因子3高表达与胶质瘤预后及迁移能力的关系

目的分析核因子红系2相关因子3(NFE2L3)在胶质瘤中的表达水平,及其与患者预后、胶质瘤迁移能力的关系。方法利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库、中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库、基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和人类蛋白质图谱(HPA)数据库确定NFE2L3在各级别胶质瘤中的表达水平及其与患者预后的关系。构建NFE2L3-siRNA载体,并在胶质瘤U251、T98细胞系中进行转染。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染NFE2L3-siRNA后胶质瘤U251和T98细胞中NFE2L3和MMP-9的表达水平。使用细胞划痕实验和transwell迁移实验检测NFE2L3对U251、T98细胞迁移功能的影响。结果NFE2L3在人脑胶质瘤组织中高表达,其表达水平越高,患者预后越差(P<0.001)。NFE2L3的表达水平与患者年龄、组织学类型、化疗状态、1p19q编码缺失状态、IDH相关突变状态密切相关(P<0.001)。在U251细胞和T98细胞中,干扰组的迁移能力、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组(P<0.01)。结论NFE2L3的高表达与胶质瘤患者的预后不良有关,NFE2L3的敲低显著抑制U251、T98细胞的迁移能力。NFE2L3促进胶质瘤U251、T98细胞的迁移,NFE2L3有可能是临床治疗胶质瘤的潜在靶标。

外周血中核转录因子红系2相关因子2对子宫内膜癌的诊断效能及其与淋巴结转移的关系

目的探究外周血核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)及其靶基因血红素加氧酶-1(HO-1)对子宫内膜癌(EC)的诊断效能及其与淋巴结转移的关系。方法选取2020年6月至2022年5月第二军医大学附属第三医院收治的80例EC患者与50例子宫良性病变患者分别作为EC组和子宫良性病变组,同时纳入体检中心50例无生殖系统疾病的健康女性作为对照组。检测3组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平及血清糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)水平,并分析上述指标在不同国际妇产科联盟(FIGO)病理分期EC患者中的变化。利用Pearson相关分析对外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平与血清CA125、HE4水平进行关联探讨。采用受试者工作者特征(ROC)曲线分析外周血Nrf2、HO-1 mRNA单项及联合预测EC发生淋巴结转移的效能。结果EC组血清CA125、HE4水平均高于子宫良性病变组与对照组,且子宫良性病变组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);EC组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平均低于子宫良性病变组与对照组,且子宫良性病变组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析发现,外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平与血清CA125、HE4水平均呈负相关(P<0.05),血清CA125水平与HE4水平呈正相关(P<0.05)。EC组血清CA125、HE4水平随FIGO病理分期增加均呈升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。EC组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平随FIGO病理分期增加均呈降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平预测EC发生淋巴结转移的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.667,当两项联合诊断时AUC、灵敏度最高,分别为0.839、81.01%,均高于单独指标诊断价值,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论检测外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平可辅助诊断EC,且Nrf2、HO-1 mRNA表达水平在FIGO病理分期中存在差异,能为判断肿瘤淋巴结转移及制定治疗方案提供参考依据。

CD45^(+)红系祖细胞抑制进展期食管癌患者内皮祖细胞功能的作用及其机制初探

目的:探讨CD45^(+)红系祖细胞抑制进展期食管癌患者内皮祖细胞功能的作用及机制。方法:收集2018年5月1日至2019年5月31日来我院就诊的食管癌初治患者,将其分为早期肿瘤组和晚期肿瘤组,选取同时期来我院健康体检的志愿者作为对照组;流式细胞术检测外周血CD45^(+)红系祖细胞的比例、凋亡细胞的比例和细胞内ROS含量;Transwell小室进行细胞共培养实验;ELISA检测细胞培养上清中VEGF、SDF-1、MMP9和IL-10的含量。结果:对照组和早期肿瘤组外周血CD45^(+)红系祖细胞比例分别为1.39%和1.45%,差异没有显著的统计学意义;晚期肿瘤组患者CD45^(+)红系祖细胞比例为3.72%,相对于早期肿瘤组,差异明显;CD45^(+)红系祖细胞内ROS含量均显著高于CD45^(-)红系祖细胞,而各组CD45^(+)红系祖细胞内ROS含量均没有显著差异;晚期肿瘤组CD45^(+)红系祖细胞能够诱导内皮祖细胞的凋亡,抑制旁分泌VEGF、SDF-1、MMP9和IL-8。ROS抑制剂能够完全阻断CD45^(+)红系祖细胞的这些作用。结论:CD45^(+)红系祖细胞通过ROS通路,诱导进展期食管癌患者内皮祖细胞凋亡,并抑制其旁分泌功能。

HCAR2介导低氧促K562细胞向红系分化作用

目的研究低氧下羟基羧酸受体2(HCAR2)对人慢性髓系白血病细胞K562向红系细胞分化的影响。方法在含氯化血红素(hemin)的培养基中培养细胞,比较常氧/低氧条件下K562细胞向红系分化的能力,以及在此过程中HCAR2的表达情况。进而利用遗传学手段干预HCAR2表达,分别使其在K562细胞中敲低或过表达,通过联苯胺染色、RT-qPCR、Western blot及流式细胞术检测HCAR2在低氧促K562细胞向红系分化中的作用。结果K562细胞向红系分化1、2、3 d后,HCAR2的表达水平和K562细胞向红系分化的能力均随时间逐渐升高,并在低氧条件下得到增强;在K562细胞中敲低HCAR2,诱导分化后红细胞生成减少,且红系分化标记分子CD235a、γ-珠蛋白(γ-globin)的mRNA和蛋白表达均降低,红系细胞膜表面分子CD71和CD235a双阳性细胞比例下降;相反,在K562细胞中过表达HCAR2,与对照组相比,诱导分化后红细胞生成增加,且CD235a、γ-globin的mRNA和蛋白表达水平均升高,CD71/CD235a双阳性细胞比例也有所增加。结论HCAR2介导了低氧促进K562细胞向红系分化。

氨磷汀联合红系生成素治疗高龄单纯红系再生障碍性贫血近期疗效观察

本研究旨在观察氨磷汀(AMF)联合重组人β红系生成素(rhβ-EPO)对单纯红系再生障碍性贫血(PEA)患者的近期疗效及副作用。采用AMF联合rhβ-EPO治疗2例高龄PEA患者。治疗方案为AMF0.4g静脉滴注,5天为1疗程,休息2天,连续3疗程为1个治疗周期;rhβ-EPO 6000U,皮下注射,1周3次。结果显示:2例PEA患者外周血的红细胞数、血红蛋白、网织红细胞在治疗后明显上升,骨髓中红系比例增高,治疗后输血间隔逐渐延长,输血量较治疗前明显下降,改善了患者的生活质量。而AMF副作用主要表现为胃肠道反应,患者均可耐受。结论:氨磷汀联合rhβ-EPO可能是高龄单纯红系再生障碍性贫血患者一种新型、安全、有效的方法,其远期疗效及作用机制尚需进一步探讨。

不同部位的巨噬细胞培养上清液对小鼠红系血细胞发生的影响

目的:探讨腹腔、肺泡和肝脏的巨噬细胞培养上清液对小鼠早期红系造血祖细胞[用红系爆式集落形成单位(BFU-E)表示]和晚期红系造血祖细胞[用晚期红系集落形成单位(CFU-E)表示]发生的影响。方法:采用造血祖细胞体外培养技术观察3种不同部位的巨噬细胞培养上清液对BFU-E和CFU-E集落数的影响。结果与结论:3种培养上清液均能促进BFU-E和CFU-E的分化与增殖,而肺泡巨噬细胞培养上清液的上述作用更明显。

腹腔巨噬细胞培养上清液对小鼠红系造血调控的研究

本文研究了未刺激和经大肠杆菌内毒素(LPS)刺激的腹腔巨噬细胞培养上清液对小鼠红系造血的调控作用。结果提示:未刺激和经LPS刺激腹腔巨噬细胞培养上清液对早期红系祖细胞(BFU-E)均呈刺激作用,对晚期红系祖细胞(CFU-E)呈双向调控,即低浓度刺激,高浓度抑制。二者比较,LPS刺激腹腔巨噬细胞培养上清液具有更高调控活性。实验还提示,腹腔巨噬细胞培养上清液具有促红细胞生成素(EPO)、BPA(Burst Promoting Activity)

神经生长因子对小鼠红系造血的影响及内在机制研究(英文)

本研究探讨神经生长因子(NGF)对红系造血的影响及内在机制。采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),对经大腿肌肉注射NGF一定时间后小鼠骨髓细胞的(BMC)增殖周期、BFU-E、CFU-E集落产率、外周血红细胞相关指标、肾脏EPO水平、骨髓细胞GM-CSF、脾脏EPO受体(EPOR)mRNA的表达及血清中EPO,GM-CSF和IL-1浓度进行检测,并观察培养体系中加入不同浓度的NGF时BFU-E、CFU-E集落产率的变化及与EPO、IL-3的关系。结果表明:注射NGF(7.5μg/kg)持续7天,骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-E和BFU-E集落产率、脾EPOR mRNA量显著高于注射生理盐水的对照组。持续13到19天,外周血网织红细胞比例、红细胞数、血红蛋白含量也有升高;在体外CFU-E培养中,无论是否加入EPO,加入的NGF均能剂量依赖性地促进集落的形成,且只加入NGF组的集落产率显著高于只加入EPO组。在BFU-E培养中加入NGF和IL-3时,集落产率显著高于加入EPO和IL-3组。结论:NGF可能通过提高造血细胞对EPO的反应性并可激活造血细胞上与EPO作用后一样的信号通路,进而促进骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向红系方向分化,促进BFU-E和CFU-E的形成,增加外周血中网织红细胞、红细胞、血红蛋白含量。

红系造血相关转录因子在红系诱导分化中表达的变化

目的探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化。方法利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化。绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化。结果HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调。结论红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调。

红系造血分化中分化调节因子的表达及调控

目的探讨红系分化调节因子(EDRF)在红白血病及正常造血组织中的表达差异及可能的调控机制。方法应用Northern blot方法检测红白血病细胞HB22.2、CB3中EDRF基因的表达,并以正常小鼠胚胎肝脏组织作为对照;通过改变培养条件,诱导红白血病细胞系HB60-5成熟分化,探讨红系分化中EDRF表达的变化;采用Southern blot方法对EDRF基因进行DNA水平检测;通过转基因的方法探讨红系造血调控因子GATA-1、NF-E2、Fli-1对EDRF表达的影响。结果在胚胎肝组织中EDRF表达水平较高,在NF-E2缺陷的红白血病细胞株HB22.2及CB3中,EDRF表达降低,同时α-珠蛋白表达缺失;Southern blot检测未发现红白血病细胞与正常胚胎肝脏组织EDRF基因的差别;HB22.2及CB3转染NF-E2基因后,血红蛋白及EDRF表达水平均明显上调;诱导HB60-5分化成熟后,NF-E2、GATA-1、α-珠蛋白及EDRF的表达逐渐增高,具有一定的相关性;HB60-5细胞转染GATA-1基因后可明显上调EDRF表达,转染Fli-1基因后则EDRF表达水平下降。结论 EDRF是红系造血相关基因,在正常红系细胞中具有高水平表达;红白血病细胞系中EDRF的表达受抑,这种表达减低不是DNA突变所致;红系造血因子GATA-1、NF-E2可上调EDRF的表达,Fli-1可下调EDRF表达。

人胚胎干细胞来源红系细胞膜蛋白表达的研究

目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养12 d的细胞,同时磁珠分选人脐血中的CD34^+细胞,在多种特定细胞因子SCF、IL-6、IL-3、FLT3-L、TPO、EPO等诱导下,分别进行集落培养12-14 d产生红系爆发式集落形成单位(BFU-E),运用流式细胞术(FACs)、qRT-PCR和免疫荧光染色等方法检测并比较hESCs和人脐血CD34^+细胞2种来源的红系细胞膜蛋白的表达情况,并以后者作为对照组。结果 hESCs来源BFU-E的膜蛋白的表达趋势与对照组相近:其膜骨架蛋白和跨膜蛋白的基因,如SPTA、SPTB、ANK1、EPB41等基因转录水平都在逐渐增强,而一些膜蛋白如黏附分子CD49d、CD29、CD71等的表达逐渐降低,CD47基本不表达;带3蛋白(Band 3)表达量较高且与成体型血红蛋白β-globin的表达呈正相关。结论在hESCs向红系诱导生成过程中,一些膜表型分子表达在逐渐降低,而膜蛋白表达逐渐增强。

正常人骨髓前红系祖细胞(BFU-E)体外培养的实验观察(摘要)

近20年来,由于细胞生物学的迅速进展,对造血干细胞的许多方面进行了实验与临床研究。有关人骨髓红系祖细胞体外培养研究由Gregory于1977年首获成功。本文采用Gregory甲基纤维素培养体系并加以改良,对13例正常人骨髓细胞进行红系祖细胞(BFU-E)培养成功,并获较高产率,培养14天可获高达40个左右中心的BFU-F集落。(一)材料与方法骨髓标本均采自健康的医务工作者共13人。男性10人,女性3人,年龄20～46岁,平均29岁。根据Gregory甲基纤维素法加以改良,

促红细胞生成素(EPO)阻止红系祖细胞凋亡的作用

促红细胞生成素（ＥＰＯ）阻止红系祖细胞凋亡的作用唐文秦省刘世广＊章静波＊（河南医科大学附属卫生生物教研室＊中国协和医科大学基础医学研究所）促红细胞生成素（ＥＰＯ）在红系发生过程中起着重要作用。ＥＰＯ可以直接作用于造血器官的红系祖细胞，促进红细胞的生成...