核转录因子红系2相关因子2和p62在宫颈鳞状细胞癌和上皮内病变中的表达及诊断价值

目的 探讨核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)与选择性自噬接头蛋白p62/Sequestosome1 (SQSTM1)在诊断宫颈癌和上皮内病变中的价值,并且分析二者在不同宫颈病变中的相关性。方法 收集2008年1月至2021年12月南通市肿瘤医院120例宫颈鳞状细胞癌(SCC)、102例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)和101例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)病人及49例宫颈良性/反应性鳞状上皮病人的石蜡标本,免疫组织化学方法检测其中Nrf2和p62的表达,并分析二者在不同宫颈病变中的相关性及评估二者在诊断中的价值。结果 Nrf2和p62在LSIL、HSIL和SCC中表达明显高于良性/反应性宫颈鳞状上皮(均P<0.05),Nrf2和p62在HSIL和SCC中表达明显高于LSIL(均P<0.05),p62在SCC中表达明显高于HSIL(P<0.05),而Nrf2在HSIL中表达稍低于SCC(P<0.05)。Nrf2和p62在良性/反应性宫颈鳞状上皮、LSIL、HSIL和SCC中均具有正相关性,相关系数分别为0.63、0.58、0.69和0.38(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,除Nrf2在诊断HSIL与SCC中差异无统计学意义外,Nrf2、p62以及联合Nrf2和p62在诊断良性/反应性鳞状上皮与LSIL、良性/反应性鳞状上皮与HSIL、良性/反应性鳞状上皮与SCC、LSIL与HSIL、LSIL与SCC、HSIL与SCC各个组别中均差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 Nrf2和p62在良性/反应性鳞状上皮中不表达或低表达,LSIL中表达有所增高,HSIL和SCC中表达最高,二者在不同宫颈病变中均具有正相关性,而且单独使用Nrf2或p62就能够有效诊断不同的宫颈病变,二者联用诊断效果更佳。

核转录因子红系2相关因子2在肝缺血再灌注损伤中的作用及麻醉药物干预的研究进展

肝缺血再灌注损伤(IRI)是一种常见的肝脏损伤类型,严重影响患者预后。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)是一种重要的转录因子,参与多种细胞生理活动。研究表明,Nrf2在肝脏IRI中起重要调控作用,激活Nrf2及相关通路能够清除活性氧,减少氧化应激损伤,从而减轻肝脏IRI。近年来,麻醉药物调控Nrf2信号通路在基础实验和临床试验中减轻肝脏IRI均取得一定成果,但仍处于实验阶段。本文通过分析近年来麻醉药物相关研究进展,对Nrf2在肝脏IRI中的作用及机制进行综述,以期为肝脏IRI的防治提供新方向。

红系衍生核因子相关因子2基因在芬维A胺诱导NB4细胞凋亡中的作用

目的:研究干扰红系衍生核因子相关因子2(NRF-2)基因表达对芬维A胺诱导NB4白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病治疗的新思路。方法:采用核转染技术将NRF-2的小干扰RNA(siRNA)转入NB4细胞干扰NRF-2的表达,然后再用芬维A胺(1μmol/L)处理NB4细胞,24、48 h后应用流式细胞术膜联蛋白(Annexin-V)异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双标记法检测细胞凋亡情况。结果:1μmol/L芬维A胺能明显诱导NB4细胞凋亡,并呈时间依赖性和药物剂量依赖性,在凋亡发生过程中NRF-2的mRNA和蛋白水平有上升趋势。通过RNA干扰NRF-2表达后,NRF-2的mRNA以及蛋白水平都明显下降,芬维A胺诱导NB4细胞凋亡的效能也随之减弱。流式细胞术分析干扰组细胞凋亡率仅(29.90±2.45)%,明显低于非干扰组的(43.85±14.40)%(P=0.001)。结论:NRF-2在芬维A胺诱导NB4细胞凋亡过程中扮演着重要的角色,提示芬维A胺可能通过氧化应激途径诱导细胞凋亡。通过这样的途径,设计提高白血病细胞的氧化应激能力可能成为靶向治疗白血病的新途径。

核因子红系2相关因子3高表达与胶质瘤预后及迁移能力的关系

目的分析核因子红系2相关因子3(NFE2L3)在胶质瘤中的表达水平,及其与患者预后、胶质瘤迁移能力的关系。方法利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库、中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库、基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和人类蛋白质图谱(HPA)数据库确定NFE2L3在各级别胶质瘤中的表达水平及其与患者预后的关系。构建NFE2L3-siRNA载体,并在胶质瘤U251、T98细胞系中进行转染。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染NFE2L3-siRNA后胶质瘤U251和T98细胞中NFE2L3和MMP-9的表达水平。使用细胞划痕实验和transwell迁移实验检测NFE2L3对U251、T98细胞迁移功能的影响。结果NFE2L3在人脑胶质瘤组织中高表达,其表达水平越高,患者预后越差(P<0.001)。NFE2L3的表达水平与患者年龄、组织学类型、化疗状态、1p19q编码缺失状态、IDH相关突变状态密切相关(P<0.001)。在U251细胞和T98细胞中,干扰组的迁移能力、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组(P<0.01)。结论NFE2L3的高表达与胶质瘤患者的预后不良有关,NFE2L3的敲低显著抑制U251、T98细胞的迁移能力。NFE2L3促进胶质瘤U251、T98细胞的迁移,NFE2L3有可能是临床治疗胶质瘤的潜在靶标。

外周血中核转录因子红系2相关因子2对子宫内膜癌的诊断效能及其与淋巴结转移的关系

目的探究外周血核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)及其靶基因血红素加氧酶-1(HO-1)对子宫内膜癌(EC)的诊断效能及其与淋巴结转移的关系。方法选取2020年6月至2022年5月第二军医大学附属第三医院收治的80例EC患者与50例子宫良性病变患者分别作为EC组和子宫良性病变组,同时纳入体检中心50例无生殖系统疾病的健康女性作为对照组。检测3组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平及血清糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)水平,并分析上述指标在不同国际妇产科联盟(FIGO)病理分期EC患者中的变化。利用Pearson相关分析对外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平与血清CA125、HE4水平进行关联探讨。采用受试者工作者特征(ROC)曲线分析外周血Nrf2、HO-1 mRNA单项及联合预测EC发生淋巴结转移的效能。结果EC组血清CA125、HE4水平均高于子宫良性病变组与对照组,且子宫良性病变组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);EC组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平均低于子宫良性病变组与对照组,且子宫良性病变组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析发现,外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平与血清CA125、HE4水平均呈负相关(P<0.05),血清CA125水平与HE4水平呈正相关(P<0.05)。EC组血清CA125、HE4水平随FIGO病理分期增加均呈升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。EC组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平随FIGO病理分期增加均呈降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平预测EC发生淋巴结转移的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.667,当两项联合诊断时AUC、灵敏度最高,分别为0.839、81.01%,均高于单独指标诊断价值,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论检测外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平可辅助诊断EC,且Nrf2、HO-1 mRNA表达水平在FIGO病理分期中存在差异,能为判断肿瘤淋巴结转移及制定治疗方案提供参考依据。

人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2和线粒体转录因子A在前列腺癌中的表达及意义

目的检测前列腺癌组织标本中人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)、人类线粒体转录因子A(TFAM)的表达,并分析其表达与Gleason评分的关系。方法用免疫组织化学S-P法检测40例前列腺癌组织标本中Nrf2与TFAM的表达,应用Spearman相关分析Gleason评分与Nrf2、TFAM表达强度的关系。结果 Nrf2和TFAM的表达与Gleason评分正相关(P值为0.0052,0.0003);Nrf2与TFAM的表达也有相关性(P=0.006)。结论 Nrf2与TFAM是前列腺癌恶性程度的相关因素之一,Nrf2与TFAM很可能通过同一机制参与前列腺癌的发生发展过程。

核转录因子红系2相关因子2和血红素加氧酶-1在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的观察核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在食管鳞癌和癌旁组织中的表达情况,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测Nrf2和HO-1在食管鳞癌和癌旁组织中的阳性表达情况,并分析二者表达之间的相关性。结果在食管鳞癌组织中,Nrf2、HO-1均呈高表达,二者表达水平与食管鳞癌的浸润深度、分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期均有相关性(均P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤部位均无相关性(均P>0.05),且二者在食管鳞癌中的表达有明显的相关性(P<0.05)。结论Nrf2和HO-1在食管鳞癌中均呈高表达,二者在食管鳞癌中的表达有明显的相关性,联合检测能够为食管鳞癌的诊断和预后评估提供客观、准确的参考。

蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1的表达

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:将25只SD大鼠的气道上皮细胞随机分为对照组、CSE3h组、RO318220(PKC抑制剂)组、Nrf2 siRNA组和Nrf2 siRNA+RO318220组,每组5只。对照组用DMEM/F12正常培养,CSE3h组用10%CSE共培养3 h;RO318220组则用3μmol/L RO318220预处理0.5h,余处理同CSE3h组;Nrf2 siRNA组先用Nrf2 siRNA预处理,余处理同CSE3h组;Nrf2 siRNA+RO318220组则先用3μmol/L RO318220和Nrf2 siRNA预处理,余处理同CSE3h组。用Western印迹法分别检测HO-1,Nrf2和PKC蛋白表达,细胞免疫化学法观察HO-1蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HO-1mRNA表达,免疫荧光法观察Nrf2核转位,测定HO-1活性。结果:CSE明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被RO318220阻断。HO-1蛋白在CSE3h组强阳性表达,在对照组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和Nrf2siRNA+RO318220组均弱阳性表达。CSE3h组PKC蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达较对照组显著升高,HO-1活性较对照组明显增强(P<0.05)。PKC蛋白表达水平在Nrf2 siRNA组和CSE3h组无明显差异(P>0.05)。结论:CSE通过PKC信号通路诱导Nrf2核转位,上调HO-1的表达水平。

香烟烟雾提取物通过蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1表达

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响。方法:通过CSE刺激雄性SD大鼠气道上皮细胞,使用PKC抑制剂RO318220和Nrf2 siRNA,将细胞分为对照组、CSE 3 h组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和RO318220+Nrf2 siRNA组,用Western blotting法分别检测HO-1、Nrf2和p-PKC蛋白表达,免疫细胞化学法观察HO-1蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HO-1 mRNA表达,免疫荧光法检测Nrf2蛋白定位,测定HO-1活性。结果:暴露CSE 3 h后,Nrf2蛋白主要表达在胞核,胞核蛋白表达增强,p-PKC蛋白、HO-1的mRNA和蛋白高表达,HO-1活性增强。预先给予RO318220,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1的mRNA和蛋白表达均明显减弱,HO-1活性显著降低。预先用siRNA沉默Nrf2,胞浆和胞核的Nrf2蛋白表达均减弱,HO-1活性、mRNA和蛋白水平明显降低。RO318220联合Nrf2 siRNA处理后,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达均明显降低,HO-1活性明显降低。结论:CSE通过PKC激活Nrf2,诱导Nrf2核转位,从而上调HO-1的表达水平。

核转录因子红细胞系相关因子-2干扰质粒构建及鉴定

目的设计及构建小鼠核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)基因的干扰质粒,并筛选出效果最好的干扰质粒。方法设计3组针对Nrf2基因的核糖核酸干扰(RNAi)序列,应用基因重组技术克隆入载体中构建短发夹RNA(shRNA),分别为shRNA1、shRNA2及shRNA3,通过基因测序鉴定,经Lipofectamine2000转染至BV2细胞,实时PCR检测Nrf2 mRNA的表达,Western Blot法检测Nrf2蛋白的表达。结果测序表明,克隆入载体中的Nrf2干扰序列及读码框完全正确,实时PCR及Western Blot显示shRNA3干扰效果最强。结论成功构建小鼠Nrf2的有效干扰质粒,为Nrf2信号通路在脑卒中领域的功能研究奠定了基础。

红系造血相关转录因子在红系诱导分化中表达的变化

目的探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化。方法利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化。绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化。结果HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调。结论红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调。

核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)是调节抗氧化基因表达的关键转录因子.γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是肺内主要的抗氧化基因,但Nrf2如何调节γ-GCS表达目前仍不清楚.该文采用香烟烟雾提取物(CSE)诱导大鼠气道上皮细胞为研究对象,探索Nrf2调节γ-GCS基因表达机制.细胞免疫荧光显示,Nrf2蛋白质在CSE处理1、3和6h组,主要在胞核中表达.细胞免疫化学与Western印迹显示,γ-GCS蛋白质在CSE1、3、6h组表达明显增强,其中Western印迹结果高于对照组(P<0.05);Nrf2胞核蛋白质表达增强.p-aPKCι/ζ蛋白质在CSE1、3h组表达增强,与对照组相比差异显著(P<0.05).RT-PCR结果表明,γ-GCSmRNA在CSE1、3、6h组表达明显高于对照组(P<0.05).γ-GCS活性在CSE1、3、6h组增高并高于对照组(P<0.05).GSH含量在CSE3、6h组明显高于对照组(P<0.05).预先加入aPKCι/ζ抑制剂RO813220,Nrf2胞浆蛋白质表达增强,GSH含量、p-aPKCι/ζ蛋白质、γ-GCS蛋白质与其mRNA和活性均明显低于CSE3h组(P<0.05).相关性分析显示Nrf2与γ-GCS、γ-GCS活性、p-aPKCι/ζ呈正相关,p-aPKCι/ζ与Nrf2、γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关(P<0.05).以上结果表明,CSE可能通过aPKCι/ζ-Nrf2信号通路调节γ-GCS的表达水平和活性.

急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景:Toll样受体9(TLR9)、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程。目的:测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。方法:从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。结果与结论:在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9mRNA表达高于正常对照组(P<0.01),化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义(P>0.05);各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组(P<0.01)。TLR9mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关。

硫氢化钠增加高糖高脂条件下小鼠心房肌细胞系HL-1谷胱甘肽合成

目的研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠2型糖尿病心肌病(DCM)。方法将小鼠心房肌细胞系HL-1分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理72 h组。Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用。结果与对照组比高糖高脂处理HL-1细胞后CSE、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达。高糖高脂组ROS含量高于NaHS组。与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1与Nrf2的相互作用增加,Nrf2泛素化水平明显增加。结论硫氢化钠减轻Nrf2的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达。

红细胞膜相关蛋白通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中Th17细胞分化

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。

右美托咪定通过核转录因子红系2相关因子2/重组人血红素加氧酶-1信号转导通路对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探索右美托咪定通过核转录因子红系2相关因子2/重组人血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号转导通路对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将50只小鼠随机分为假手术组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组10只。用双侧肾动脉夹闭法构建肾缺血再灌注模型,假手术组仅切开腹部不夹闭双侧肾蒂。在造模前30 min,低、中、高剂量实验组分别给予腹腔注射25,50和100μg·kg^(-1)右美托咪定,假手术组与模型组均给予腹腔注射等体积0.9%NaCl。用生化分析仪检测血清肌酸酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,用酶联免疫试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),用蛋白质印迹法检测肾组织Nrf2和HO-1蛋白的表达水平。结果 高剂量实验组、模型组和假手术组的SCr分别为(80.11±11.12),(159.72±15.88)和(45.88±7.23)μmol·L^(-1),BUN分别为(15.81±3.29),(30.18±5.12)和(5.11±0.78)mmol·L^(-1),SOD分别为(160.27±16.15),(101.17±13.73)和(188.82±20.08)U·mg protein^(-1),MDA分别为(32.37±5.01),(48.13±10.11)和(27.81±3.63)nmol·mg protein^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为0.61±0.11,0.24±0.04和0.76±0.13,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.60±0.12,0.21±0.04和0.88±0.18,NQO1蛋白相对表达水平分别为0.67±0.10,0.30±0.07和0.85±0.18。高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 右美托咪定具有保护肾缺血再灌注模型小鼠肾组织的作用,该作用可能是通过激活Nrf2/HO-1通路实现的。

原癌基因Pokemon及核转录因子E2F3在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨POK红系髓性致癌因子(POK erythroid myeloid ontogenic factor,Pokemon)及核转录因子E2F3(E2Ftranscrip tion factor 3)在喉鳞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Max Vision二步法观察61例喉鳞癌组织及46例癌旁正常喉黏膜组织中Pokemon及E2F3的表达,并结合患者年龄、性别、原发部位、TNM分期、临床分期及预后之间的关系进行分析。结果 Pokemon及E2F3在喉鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常喉黏膜组织中的阳性表达率(P<0.001);颈淋巴结转移(N+)、中低分化、临床晚期(Ⅲ+Ⅳ)喉鳞癌患者中Pokemon及E2F3表达强度增强(P<0.05);Pokemon及E2F3阳性表达患者的5年累积生存率较阴性表达患者低(P<0.05)。结论 Pokemon与E2F3在喉鳞癌组织中高表达,并与其预后不良相关。两者可能在喉鳞癌发生及恶性进展过程中发挥重要作用,有望成为喉鳞癌发病机制及分子靶向治疗的新指标。

核因子红细胞系2相关因子2抑制铁死亡对高氧肺损伤的影响

目的观察不同条件下人肺微血管内皮细胞(HPMEC)中核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达变化, 探讨Nrf2抑制铁死亡在减轻高氧肺损伤(HLI)过程中的作用。方法采用HPMEC建立高氧暴露模型。将HPMEC按照简单随机分组分为4组:对照组、高氧组(氧体积分数950 mL/L)、铁死亡抑制剂组(氧体积分数950 mL/L, 10 μmol/L Ferrostatin)及Nrf2抑制剂组(氧体积分数950 mL/L, 10 μmol/L ML385), 分别在24 h、48 h使用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性, 荧光活性氧(ROS)试剂盒检测各组细胞内ROS水平, 应用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测Nrf2、GPX4的mRNA及其蛋白表达水平。2组间比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果 1.与对照组相比, 高氧组HPMEC细胞活性降低, 细胞内ROS含量增加, 24 h及48 h GPX4 mRNA(24 h:0.750±0.010比1.010±0.160, 48 h:0.690±0.050比1.000±0.070)和蛋白表达(24 h:0.160±0.010比0.290±0.010, 48 h:0.190±0.010比0.250±0.010)均下降, Nrf2 mRNA(24 h:1.740±0.050比1.000±0.050, 48 h:2.130±0.020比1.000±0.030)和蛋白表达(24 h:0.840±0.010比0.480±0.010, 48 h:0.840±0.010比0.550±0.030)均增加, 差异均有统计学意义(均P<0.05);2.与高氧组相比, 铁死亡抑制剂组细胞活性增加, 细胞内ROS含量减少, 24 h及48 h GPX4 mRNA(24 h:1.520±0.110, 48 h:1.880±0.050)和蛋白表达(24 h:0.290±0.010, 48 h:0.250±0.004)均增加, Nrf2 mRNA(24 h:0.780±0.040, 48 h:0.760±0.030)和蛋白表达(24 h:0.480±0.010, 48 h:0.540±0.020)均下降, 差异均有统计学意义(均P<0.05);3.与高氧组相比, Nrf2抑制剂组细胞活性进一步下降, 细胞内ROS水平进一步增加, 24 h及48 h GPX4 mRNA(24 h:0.600±0.030, 48 h:0.590±0.003)及蛋白表达(24 h:0.150±0.001, 48 h:0.180±0.001)均下降, Nrf2 mRNA表达量在24 h表达升高(3.360±0.130), 48 h表达下降(1.430±0.130), 差异均有统计学意义(均P<0.05), Nrf2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论铁死亡参与了HLI的发生, Nrf2可以通过抑制铁死亡, 从而减轻高氧暴露引起的HLI。因此, Nrf2抑制铁死亡对于HLI的改善作用可以为相关疾病提供新的治疗靶点。

两种生育酚酯衍生物对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用

为探究两种生育酚酯衍生物(D-α-生育酚醋酸酯和DL-α-生育酚醋酸酯)的抗衰老作用,本实验测定其体外抗氧化能力,并采用D-半乳糖构建衰老小鼠模型,同时用两种生育酚酯衍生物干预42 d,分析衰老相关指标变化规律。结果表明:在0.1~0.3 mg/mL质量浓度范围内,两种生育酚酯衍生物的羟自由基清除能力、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力、Fe2+螯合能力、总还原能力均优于VC。与衰老模型组相比,经过生育酚酯衍生物干预后,小鼠血清中丙二醛含量显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001),谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化能力显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001);血清中炎症因子白细胞介素-6、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α和肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001);小鼠肝脏中核因子-E2-相关因子(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase,NQO1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA及蛋白相对表达量提升,其中DL-α-生育酚醋酸酯的Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA相对表达量分别增加了514.08%、461.78%、515.32%,蛋白相对表达量分别增加了620.00%、988.89%、1200.00%(P<0.0001)。综上所述,两种生育酚酯衍生物对D-半乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用,且DL-α-生育酚醋酸酯效果更好,二者抗衰老作用可能与调控Nrf2信号通路相关。

核转录因子红系2相关因子2在创面愈合中的作用研究进展

创面愈合是机体常见的病理生理过程之一。如何改善创面愈合条件,使创面快速愈合,一直是研究的热点。氧化应激是影响创面愈合的重要因素之一。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)是一种经典的抗氧化应激因子,也是极具潜力的促创面愈合因子。Nrf2的激活可以调控下游的抗氧化应激元件,发挥抗细胞凋亡、维持细胞稳态的作用,从而改善创面的愈合环境,促进创面的修复。该文概述了Nrf2常见的激动剂及抑制剂,并综述了Nrf2促进糖尿病溃疡、辐射损伤、缺血再灌注损害等皮肤创面愈合的作用。