K562细胞红系诱导分化过程中血红蛋白基因与过氧化氢酶基因的表达变化

目的:研究K562细胞红系诱导分化过程中,血红蛋白α(hemoglobin subunit alpha-1,HBA-1)、血红蛋白ε(hemoglobin subunit epsilon-1,HBE-1)基因与过氧化氢酶(catalase,CAT)基因表达的变化。方法:利用氯化高铁红素(Hemin)诱导K562细胞构建红系诱导分化模型。利用联苯胺染色法和CCK-8法检测不同浓度Hemin作用K562细胞不同时间后,K562细胞分化阳性率及细胞的生长抑制率,确定后续实验Hemin的作用浓度。利用反转录实时荧光定量PCR检测K562细胞红系诱导分化过程中HBA-1、HBE-1、CAT基因mRNA表达水平的改变。结果:Hemin诱导K562细胞红系分化过程中,随Hemin诱导时间延长、浓度升高,细胞分化染色阳性率及细胞生长抑制率均升高(P<0.05)。40μmol/L Hemin诱导12 h、24 h、48 h后,与未诱导组相比,HBA-1、HBE-1基因mRNA表达量随时间延长逐渐增高(P<0.05);CAT基因mRNA表达在Hemin诱导48 h时增高(P<0.05)。结论:Hemin诱导K562细胞红系分化过程中,HBA-1 mRNA先于HBE-1 mRNA表达量增加,同时CAT基因mRNA表达量随之增高,说明CAT在红系分化早期可能起重要的抗氧化作用。

联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响

目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法,优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合。鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAS)mRNA和粒系bcr/ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Real-timePCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果K562细胞诱导120h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrinα、β)、带3蛋白(band3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍,而bcr/ablmRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、band3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,并且细胞状态良好,易于进行红系统疾病研究;CD47、band3、RhD这3种膜蛋白可以作为早期红系分化的敏感指标。

联合培养法优化K562细胞红系诱导分化及红系相关基因和膜蛋白表达分析

目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件，分析红系相关基因和膜蛋白的表达，探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法，优化诱导试剂丁酸钠、红细胞生成素、氯化高铁血红素等成分组合和剂量组合。诱导效率鉴定指标选用红系ALAS mRNA和粒系bcr／ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Realtime-PCR检测10种红系分化相关基因的表达；流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果优化红系诱导组合联合培养K562细胞120h后，联苯胺染色计数阳性细胞可达1。0％。Realtime-PCR检测Spectrinα、Spectrinβ、band3、eALAS、CD47、RhD、EPB4．2的mRNA水平分别为对照组的8．05、14．58、22．87、14．52、26．53、3．48、1．94倍，而bcr／ablmRNA水平为对照组的0．39倍。流式细胞术测定红系膜蛋白CD47，band3、RhD水平明显增高（P〈0．01），GPA无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化，良好细胞状态利于转外源基因操作，进行红系统疾病研究。RhD比GPA更早在红系细胞表达，可作为早期红系特异标记。