多瘤病毒增强活化子3和红细胞生成素产生肝细胞受体A2在脑胶质母细胞瘤中的作用

目的探讨多瘤病毒增强活化子3(PEA3)、红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EPHA2)在脑胶质母细胞瘤中的作用。方法构建人脑星形胶质母细胞瘤U87细胞基因转染模型,将细胞系分为5组:空白组、PEA3干扰组、PEA3干扰空载组、EPHA2干扰组、EPHA2干扰空载组。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测细胞增殖率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果CCK-8检测细胞增殖结果显示,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的细胞增殖率均明显低于空白组[(59.7±1.3)%、(59.5±0.7)%比(67.8±1.3)%](P<0.01或P<0.001),PEA3干扰空载组和EPHA2干扰空载组的细胞增殖率与空白组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。细胞划痕实验结果显示,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的划痕愈合率低于空白组[(31.7±1.1)%、(23.0±2.6)%比(42.8±8.8)%],差异均有统计学意义(均P<0.05),PEA3干扰空载组和EPHA2干扰空载组划痕愈合率与空白组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。Transwell检测细胞侵袭能力结果显示,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的侵袭细胞数明显少于空白组[(643±20)、(542±165)个比(1225±70)个](均P<0.001),而空白组与PEA3干扰空载组和EPHA2干扰空载组侵袭细胞数比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论干扰PEA3基因和EPHA2基因能明显降低脑胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力。

促红细胞生成素产生肝细胞受体在肝纤维化、肝癌发病机制中的作用

促红细胞生成素产生肝细胞(Eph)受体是受体酪氨酸激酶家族中最大的亚族,参与机体胚胎发育、血管生成、轴突导向等生理过程。近来有研究显示,Eph受体过量表达于肝纤维化及肝癌组织中,并在肝癌的生长、侵袭、转移中发挥重要作用。探讨了Eph受体在肝纤维化及肝细胞癌中的作用机制,提示Eph受体可能是肝纤维化、肝癌发生发展过程中的重要分子。

促红细胞生成素产生肝细胞受体-配体系统在胚胎着床和发育中的作用

促红细胞生成素产生肝细胞受体(erythropoietin-producing hepatocellular receptor,Eph受体)是受体酪氨酸激酶家族成员之一,通过与配体Ephrin结合发挥生物功能。Eph-Ephrin系统有16个受体成员和8个配体成员,均为膜蛋白结构,受体配体结合后发生细胞双向信号传递,调节胚胎对子宫内膜的粘附和侵入,引导胚胎血管重塑,促进胚胎多个系统发育。本文综述了Eph-Ephrin系统在胚胎着床和发育中的作用。

促红细胞生成素产生细胞与慢性肾脏病贫血及肾纤维化关系的研究进展

慢性肾脏病的基本特征是持续性的肾功能下降、细胞外基质的累积以及进行性的组织纤维化。肾间质纤维化和肾性贫血是慢性肾脏病的常见并发症。介导肾间质纤维化的关键细胞是激活的肌成纤维细胞,而介导肾性贫血的重要因素则为肾促红细胞生成素产生细胞的减少,导致促红细胞生成素分泌下降。肾促红细胞生成素产生细胞向肌成纤维细胞的转化是慢性肾脏病贫血与纤维化之间联系的基础,且其转化具有可逆性。近年来研究人员试图为治疗慢性肾脏病贫血与纤维化寻找替代疗法,中药因其独特的优势已越来越多地用于治疗慢性肾脏病。该文主要探讨促红细胞生成素产生细胞与慢性肾脏病贫血和肾纤维化的关系,并对其相关中药研究现状进行阐述。

促红细胞生成素产生细胞与肾脏纤维化

肾脏中合成红细胞生成素(EPO)的细胞称为肾脏促红细胞生成素产生细胞(REPs),EPO生成不足会引起肾性贫血和慢性疾病相关性贫血。REPs可转分化成致瘢痕的肌成纤维细胞(MF),造成肾脏纤维化,在慢性肾脏病(CKD)患者中,REPs转分化成肌成纤维细胞(MF-REPs)后产生EPO能力下降。近年来关于肾脏REPs的研究取得较大进展,对REPs的研究将有望成为治疗肾性贫血和肾间质纤维化的新靶点。

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)SAM结构域对激酶结构域的脂质体结合能力与激酶活性的调控研究

促红细胞生成素产生肝细胞受体(Eph receptor)是受体酪氨酸激酶(RTK)家族中最大的亚家族,其介导的双向信号传导对细胞的形态、黏附、运动、增殖、生存及分化都有重要的调控作用。EphA2是Eph受体家族中一个被广泛研究的重要亚型,在白内障和乳腺癌等病理发生过程中发挥了重要作用。既往研究发现:EphA2受体的激酶结构域可结合细胞膜,其激酶活性受磷脂膜的调控,但是相邻的SAM结构域对激酶结构域与脂膜的相互作用以及激酶活性的影响尚不清楚。在此项研究中,通过与磷酸酶PTP1B1-301活性片段共表达的方式,表达、纯化了EphA2受体的胞内段激酶-SAM串联结构域,通过比较胞内段激酶-SAM串联结构域与单独激酶结构域的脂质体结合能力,以及测定对应的激酶活性,发现:EphA2受体胞内段的SAM结构域使其激酶结构域与脂质体(4 mg/mL)的结合能力增强约6倍(P<0.001);磷酸化后的EphA2胞内段激酶-SAM串联结构域结合脂质体(4 mg/mL)的能力比非磷酸化的胞内段激酶-SAM串联结构域提高2.5倍(P<0.05);而结合脂质体后,激酶结构域的激酶活性也被进一步提高,从而形成正反馈。综上所述,本研究的发现提示:EphA2胞内段的酪氨酸激酶结构域与相邻的SAM结构域可形成一个完整的结构功能单位,其激酶活性和脂质体结合能力与单独的激酶结构域相比都形成了明显的差异,我们的这一发现对进一步理解Eph受体家族其他亚型的激酶结构域的活性调控提供了参考与思路。

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2基因沉默对人卵巢癌细胞生物学性状的影响

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)基因沉默对人卵巢癌HeyA8-MDR细胞生长、迁移和侵袭的影响。方法利用质粒和脂质体介导转染法,经稳定筛选后,采用Western blot检测细胞EphA2蛋白表达情况,应用CCK-8和Transwell小室侵袭实验,观察EphA2基因沉默对卵巢癌HeyA8-MDR细胞生物学性状的影响。采用SPSS21.0软件进行统计分析。结果与HeyA8-MDR(阴性对照组)、HeyA8-MDR+空白对照组进行比较,HeyA8-MDR+实验组EphA2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。结论EphA2基因沉默可抑制卵巢癌HeyA8-MDR细胞生长、迁移和侵袭,为卵巢癌的治疗提供了新思路。

EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法取对数生长期人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、空载组及沉默组,分别转染Lipofectamine;2000、含无义随机序列(siRNA-NC-PGCsi3.0)和EphA2干扰序列(EphA2-siRNA-PGCsi3.0)质粒和脂质体的复合物。稳定转染后,Brd U法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western blotting分别检测细胞中EphA2、Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA及蛋白相对表达量。结果对照组、空载组、沉默组BrdU阳性率分别为(26.48±2.79)%、(23.52±2.57)%、(13.29±2.06)%,Brd U阳性率组间比较,差异有统计学意义(F=38.560,P=0.000)。与对照组、空载组比较,沉默组Brd U阳性率降低(P <0.05);对照组与空载组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组、空载组、沉默组细胞划痕愈合率分别为(83.16±8.31)%、(82.35±7.24)%、(34.24±5.27)%,细胞划痕愈合率组间比较,差异有统计学意义(F=78.869,P=0.000)。与对照组、空载组比较,沉默组细胞划痕愈合率降低(P <0.05);对照组与空载组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组、空载组、沉默组穿膜细胞数分别为(326.74±33.15)个、(331.27±34.59)个、(126.23±26.18)个,穿膜细胞数组间比较,差异有统计学意义(F=68.997,P=0.000),与对照组、空载组比较,沉默组穿膜细胞数减少(P <0.05);对照组与空载组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、Ecadherin、Vimentin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(P <0.05),与对照组、空载组比较,沉默组Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA相对表达量降低(P <0.05),E-cadherin mRNA相对表达量升高(P <0.05)。对照组、空载组、沉默组细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P <0.05),与对照组、空载组比较,沉默组EphA2、Wnt1、β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量升高(P <0.05)。对照组和空载组上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用,其机制可能与阻止Wnt/β-catenin信号通路相关。

雄激素依赖性前列腺癌细胞中雄激素受体上调EphA3表达

目的探讨雄激素依赖性前列腺癌细胞中促红细胞生成素产生肝细胞A型受体(EphA)3表达和雄激素受体(AR)信号通路的关联。方法首先通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)分别检测前列腺癌细胞LNCa P和22Rv1中EphA3和AR的mRNA及蛋白水平,然后用双氢睾酮(DHT)刺激48 h,测定细胞EphA3、AR和前列腺特异抗原(PSA)表达水平的变化。同时,将成功构建的荧光素酶报告基因重组质粒EphA3-Luc(-789^+146)与AR表达质粒pc DNA3.1(+)-AR或AR特异性小分子干扰RNA(si AR)共转染22Rv1细胞,分析AR对EphA3转录活动的影响。结果 EphA3在前列腺基质细胞WPMY-1中表达水平极低,但在前列腺癌细胞LNCa P和22Rv1中则明显升高,与AR表达模式相似。10 nmol/L DHT不仅明显上调22Rv1细胞中AR、PSA和EphA3表达水平,也显著升高LNCa P细胞中相关基因和蛋白水平。而且细胞内不同AR表达水平会显著影响EphA3启动子活性。结论 AR通过提高EphA3启动子活性上调EphA3表达水平。

受体酪氨酸激酶Eph受体在肝细胞癌中作用的研究进展

促红细胞生成素产生肝细胞(Eph)受体是受体酪氨酸家族最大的亚群之一,Eph与其配体ephrin在胚胎发育、血管生成、细胞迁移和轴突导向等生理过程中发挥重要作用。Eph/ephrin双向信号通路可以和其他信号通路相互作用,导致Eph受体和ephrin配体在肿瘤中异常表达进而影响肿瘤恶性程度,但其不同的信号调节模式可能促进或者抑制肿瘤生长。Eph受体和ephrin配体的异常表达也被证明与肝细胞癌(HCC)生长、血管生成、迁移和侵袭密切相关。近年来关于Eph受体和ephrin配体的研究是一大热点,Eph基因有望成为HCC诊断、治疗和预后的新分子标志物。

敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的:探讨敲低EphB1基因对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组(不做任何处理)、H 2O 2组(H 2O 2细胞损伤)、阴性对照组(转染siRNA control)和转染si-EphB1组(转染si-EphB1后H 2O 2细胞损伤)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:与空白组比较,H 2O 2组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05);与H 2O 2组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与空白组比较,H 2O 2组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义(P>0.05);与H 2O 2组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),ROS和MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。结论:敲低EphB1基因能够抑制H 2O 2诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2在儿童脑胶质瘤中的表达及其意义

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）在儿童脑胶质瘤中的表达水平及其意义。方法收集2009年1月至2013年3月在郑州大学第五附属医院住院的具有明确病理分级的儿童胶质瘤标本78例为胶质瘤组，其中低级别组36例（Ⅰ-Ⅱ级）、高级别组42例（Ⅲ～Ⅳ级），另收集脑外伤行内减压去除的儿童脑组织标本33例为对照组。分别采用反转录（RT）-PCR、Westernblot和免疫组织化学法测定胶质瘤组和对照组中EphA2mRNA及蛋白表达水平。结果1．RT—PCR和Westernblot显示，EphA2mRNA在对照组脑组织中不表达，而在胶质瘤组中均呈高表达，差异有统计学意义（F=36．271，P〈0．05）；EphA2蛋白在高级别儿童胶质瘤组表达水平显著高于低级别儿童胶质瘤组，差异有统计学意义（F=42．839，P〈0．05）。2．免疫组织化学法显示，EphA2在对照组脑组织中呈阴性表达，在低级别胶质瘤组中的阳性表达为88．57％，在高级别胶质瘤组中的阳性表达为100．00％，且胶质瘤的级别越高，EphA2的阳性表达分布越强，差异有统计学意义（Z=4．962，P〈0．05）。结论EphA2在儿童脑胶质瘤中呈高表达，且与胶质瘤的病理分级相关，可能参与儿童脑胶质瘤的发生和进展。

血管内皮生长因子对静脉分子指纹产生促红细胞生成素的肝癌细胞B4受体表达的调控及其抑制移植静脉内膜增生的机制

目的探讨自体静脉移植后血管内皮生长因子（VEGF）对产生促红细胞生成素的肝癌细胞B4受体（EphB4）表达的调控及其抑制移植静脉内膜增生的机制。方法建立小鼠自体颈静脉移植重建颈总动脉的模型，采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）方法，检测术后不同时间点VEGF和EphB4mRNA水平；利用小干扰RNA（siRNA）阻断内源性VEGF的产生，比较处理组与非处理组内膜增生情况；以VEGF刺激鼠静脉内皮细胞观察EphB4表达；分别用VEGF传导通路的阻断剂预处理细胞，再以VEGF刺激细胞，检测EphB4表达。结果阻断移植静脉VEGF的表达后，EphB4表达显著减少（处理组0．52±0．14比非处理组2．10±0．79，P〈0．05），且内膜增生程度明显高于未处理组[处理组（29．8±2．09）μm比非处理组（14．7±0．05）μm，P〈0．05]。VEGF下调EphlM呈时间及剂量依赖性。VEGF通过VEGF受体2（VEGF-R2）及其下游信号传导通路细胞外调节激酶（ERK）1／2抑制EphB4表达。结论VEGF可能通过负性调控EphB4的表达而抑制移植静脉内膜增生，此调节作用通过VEGF-R2-ERKl／2途径实现。

循环EphA2、PGRN与冠状动脉疾病患者内皮炎症及黏附因子的相关性

[目的]探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)、颗粒蛋白前体(PGRN)与冠状动脉疾病(CAD)患者内皮炎症及黏附因子的相关性。[方法]入选2020年1月—12月复旦大学附属中山医院心内科收治的拟行冠状动脉造影的73例CAD患者,入院次日晨空腹采集肘静脉血5 mL,ELISA测定血清中EphA2、PGRN水平,Premixed Luminex测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及γ干扰素(IFN-γ)水平。[结果]急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清EphA2、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)及肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)心肌损伤标志物水平较慢性冠状动脉综合征(CCS)患者升高6.3倍、15倍、161倍、13倍、2.5倍(P<0.001),血清TNF-α、IL-6和VCAM-1较CCS患者升高37.9%、500.0%、196.6%(P<0.01),血清PGRN水平较CCS患者未见明显升高(P=0.051)。血清EphA2、PGRN、IL-6、VCAM-1预测ACS的曲线下面积(AUC)分别为0.932、0.646、0.926和0.861。血清EphA2、VCAM-1、IL-6、TNF-α、MCP-1均与Gensini评分正相关(r=0.533,P<0.001;r=0.549,P<0.001;r=0.621,P<0.001;r=0.263,P=0.027;r=0.264,P=0.026)。血清EphA2与IL-6、VCAM-1呈正相关(r=0.565,P<0.001;r=0.474,P<0.001)。未见PGRN与各炎症因子和黏附因子之间的相关性(P>0.05)。血清PGRN、EphA2与心肌损伤标志物呈正相关(P<0.05)。[结论]本研究从临床的角度支持EphA2参与斑块损伤急性期内皮炎症过程,同时提示EphA2、PGRN有望成为干预内皮炎症与预测动脉粥样硬化病变进展的潜在靶点。

EphB3受体在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究EphB3受体在乳腺癌组织中的表达及其对预后的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定80例原发性乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织中EphB3受体的表达,分析EphB3受体表达与患者临床病理参数的关系。应用Kaplan-Meier法对患者无进展生存期进行分析,Cox比例风险回归模型研究影响乳腺癌患者无进展生存期的因素。结果:EphB3受体在乳腺癌组织中表达水平高于对应癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.001)。EphB3受体表达与乳腺癌组织学分级(P=0.032)、淋巴结转移(P=0.034)和病理类型(P=0.028)密切相关。与EphB3受体低表达患者相比,高表达患者无进展生存期较短,差异有统计学意义(P=0.019)。EphB3受体高表达、HER-2阳性、分子分型三阴性、淋巴结转移是影响乳腺癌无进展生存期的独立危险因素。结论:EphB3受体在乳腺癌组织中表达水平明显增高,EphB3受体高表达是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。

间苯三酚对宫腔内人工授精妊娠结局及患者血清EphA5、SFlt-1表达的影响

目的:探究间苯三酚对宫腔内人工授精妊娠结局及患者血清促红细胞生成素产生肝细胞受体(Eph)A5、可溶性血管内皮细胞生长因子受体-1(SFlt-1)表达的影响。方法:选取2019年5月-2022年2月本院生殖医学中心收治的120例接受宫腔内人工授精术中超声发现子宫内膜蠕动快的患者,按知情同意原则分为对照组(n=60,采用宫腔内人工授精)和观察组(n=60,在对照组基础上给予间苯三酚)。比较两组妊娠结局、血清EphA5、SFlt-1、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))水平、卵泡成熟个数、子宫内膜厚度及不良反应。结果:治疗后,观察组临床妊娠率(23.3%)、异位妊娠率、生化妊娠率(15.0%)和28周以上持续妊娠率(18.3%)均高于对照组(8.3%、3.0%、5.0%),流产率、多胎妊娠率低于对照组(P<0.05)。两组血清SFlt-1、E_(2)水平均较治疗前降低、EphA5、LH水平较治疗前升高,且观察组上述指标变化幅度大于对照组,不良反应总发生率观察组(5.0%)低于对照组(20.0%)(均P<0.05)。结论:间苯三酚可改善宫腔内人工授精妊娠结局,可提高患者血清EphA5、LH水平,降低血清SFlt-1、E_(2)水平,用药安全可靠。

PEA3和EPHA2在脑胶质母细胞瘤中的表达及在Wnt/β-catenin通路的作用

目的探讨多瘤病毒增强活化子3(PEA3)及红细胞生成素产生肝细胞受体2(EPHA2)在脑胶质母细胞瘤中的表达及在Wnt/β-catenin信号通路的作用。方法构建脑胶质瘤U87细胞基因转染模型,将细胞系分为5组:空白组、PEA3干扰组、PEA3干扰空载组、EPHA2干扰组、EPHA2干扰空载组,Western blotting实验检测细胞中EPHA2、PEA3的蛋白表达水平,细胞活力检测(CCK-8)实验检测PEA3、EPHA2对细胞增殖能力的影响,定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)实验检测Wnt/β-catenin通路下游基因转录因子4(TCF-4)、淋巴细胞增强结合因子1(LEF1)表达水平。结果Western blotting实验结果显示:与空白组相比,EPHA2在EPHA2干扰组中表达量降低,PEA3在PEA3干扰组和EPHA2干扰组中表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);5组细胞Wnt1、β-catenin蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8实验结果显示,与空白组相比,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的细胞增殖率明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,TCF-4、LEF1基因在PEA3干扰组、EPHA2干扰组中表达量下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过干扰PEA3和EPHA2基因可降低胶质母细胞瘤的增殖能力,但PEA3和EPHA2是否通过Wnt/β-catenin通路促进胶质母细胞瘤的增殖能力值得进一步研究证实。

非小细胞肺癌患者EphB3高表达促进血管生成拟态结构的形成

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织样本中促红细胞生成素产生肝细胞受体B3(EphB3)的表达以及与血管生成拟态(VM)形成之间的相关性。方法收集TCGA数据库中有关EphB3的基因表达数据,对比分析515例肺腺癌组织和59例正常组织、503例肺鳞癌组织和52例正常组织的基因表达差异。利用GEPIA2网站筛选出前100个与EphB3相关相似的基因。在仙桃数据库中进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。收集56例NSCLC患者组织样本,将样本固定在10%多聚甲醛溶液中并用石蜡包埋,按照SP两步法操作,检测其癌组织及癌旁组织中EphB3表达情况。常规CD31免疫组化染色至DAB显色步骤,向组织上滴加PAS染色溶液,镜下观察血管生成拟态结构。结合患者临床特征与EphB3、VM表达情况进行相关性分析。结果EphB3在肺鳞癌和肺腺癌中的表达量均高于对应的癌旁组织,差异均有统计学意义(P均<0.05)。GO/KEGG功能富集分析结果显示KEGG通路富集到Notch信号通路,GO分析结果显示与细胞间连接、细胞黏附分子结合、表皮细胞分化等相关(P<0.05)。免疫组化结果显示,56份样本中癌组织的面积分数为(13.04±1.77)%,癌旁组织为(3.92±0.61)%(P<0.05),其中有41例呈阳性表达,15例呈阴性表达,阳性表达率为73.21%,阴性表达率为26.79%。EphB3在癌组织中的高表达与年龄、吸烟史、T分期有关(P<0.05)。CD31/PAS双染结果显示,在29例样本中,EphB3阳性表达并存在血管生成拟态11例,EphB3阴性表达并出现血管生成拟态1例,EphB3的表达与血管生成拟态形成有关(P<0.05)。结论非小细胞肺癌中EphB3的高表达会促进血管生成拟态的形成,有望成为非小细胞肺癌抗血管生成治疗的潜在治疗靶点。

EphA2蛋白调控鼻咽癌紫杉醇敏感性的实验研究

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(erythropoietin-producing hepatocellular re-ceptor,EphA2)蛋白对鼻咽癌细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法采用脂质体2000将EphA2蛋白过表达载体pEGFP-N1-EphA2和空白载体pEGFP-N1分别转染鼻咽癌5-8F细胞,Western blot验证转染效果,CCK-8法检测各组细胞生存率,并计算各组紫杉醇药物IC50值;流式细胞术检测紫杉醇作用后鼻咽癌5-8F细胞周期及凋亡率的改变。结果鼻咽癌5-8F细胞EphA2蛋白上调后,紫杉醇药物在亲本细胞组和空白载体对照组中的IC50值分别为(1.4±0.05)nM/L和(1.3±0.06)nM/L,而实验组中的表达为(3.8±0.52)nM/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期结果显示实验组(45.76±3.89)%较亲本细胞组(65.85±2.28)%和对照组(64.52±3.31)%的G0/G1期细胞的比例明显减少,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而S期细胞的实验组(31.56±1.59)%较亲本细胞组(2 5.7 6±1.8 9)%和对照组(2 4.5 5±3.6 4)%和G2/M期细胞的实验组(2 3.1 0±4.55)%较亲本细胞组(8.39±0.81)%和对照组(10.94±3.27)%的比例则明显增多,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);而细胞凋亡率3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论该研究结果表明EphA2蛋白能通过影响鼻咽癌细胞周期改变而调控其对紫杉醇药物的敏感性。