mPEG修饰红细胞Rh抗原稳定性的研究

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS-PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况,用红细胞血影凝集实验及4℃CPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验,观察mPEG修饰后红细胞Rh抗原被遮蔽的稳定性。结果发现:不同保存时间的mPEG修饰的红细胞在模拟输血(即混血前后)的血型保持不变,同时mPEG修饰的红细胞在保存过程中游离血红蛋白水平正常,并且混血后经37℃孵育的mPEG修饰的红细胞游离血红蛋白水平低于不混合的修饰的红细胞。比较分析PEG特异的碘染和考马斯亮蓝染的显色图谱发现,特殊的碘染显示出mPEG与红细胞膜蛋白结合的条带,mPEG-SPA与红细胞膜蛋白结合后导致蛋白分子迁移速度发生改变。mPEG修饰的红细胞血影凝集实验证实,修饰红细胞在质膜裂损后mPEG仍有效地遮蔽抗原。结论:mPEG-SPA不论在红细胞膜蛋白被单独提取后,还是膜破损后以及存活状态下,均能与红细胞膜蛋白稳固结合。

mPEG修饰解决血型匹配困难的体外研究

本研究的目的是通过mPEG修饰红细胞表面抗原以期找到一种解决临床疑难配血的方法。收集了含高效价抗体及发生临床配血困难病例的血清共 2 9例 ,分析了病因及所含的抗体 ,并采用 1.0mmol/L的mPEG BTC与献血者红细胞混合 ,2 5℃孵育 1小时 ,用聚凝胺法和抗人球蛋白法检测对比mPEG修饰前后的红细胞与 2 9例血清的凝集情况。结果表明 :临床配血困难及血清含高效价抗体的病例主要发生在血液系统疾病和肿瘤及新生儿溶血病产妇 ,所含的抗体主要是Rh血型系统的抗体和自身抗体。 1.0mmol/LmPEG BTC修饰的红细胞后 ,不会与这些病例血清中的抗体发生反应 ,达到了临床配血输用的要求。结论

KODE技术修饰红细胞在抗-Mur筛查中的应用及Mur抗原遗传背景研究

目的探讨KODE技术修饰红细胞(即利用KODE技术制备的Mur抗原修饰红细胞)应用于抗-Mur筛查中的可行性,同时了解广州地区人群Mur抗原的遗传特征。方法利用含KODE技术修饰红细胞的筛选细胞在微柱凝胶卡中筛查3 579名献血者血浆中的不规则抗体,并对阳性样本进行抗体鉴定;同时,采用单克隆抗-Mur筛查528名献血者红细胞上的Mur抗原,然后通过PCR产物直接测序法对Mur抗原阳性样本进行序列分析。结果 3 579名献血者血浆中不规则抗体阳性者有11例,其中抗-Mur 7例,抗-S 2例,抗-E 1例,抗-Lea 1例;528名献血者红细胞表面表达Mur抗原的有51名,经过DNA序列分析,发现该51名Mur抗原阳性献血者均携带有GYP(B-A-B)杂交基因,其中表达GP.Mur的有50名,表达GP.Bun的有1名。结论KODE技术修饰红细胞在抗-Mur筛查中的成功应用,表明利用该技术制备更多其他的人工修饰稀有红细胞用于抗体筛选与鉴定具有可行性,从而为输血安全提供保障;GYP(B-A-B)杂交基因是广州地区Mur抗原的遗传基础,并且,GP.Mur是表达Mur抗原的主要杂交糖蛋白。