运动减肥对肥胖儿童少年红细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻及ATPase酶活性的影响

目的:探讨肥胖儿童少年红细胞膜PS外翻水平和ATP酶活性及运动减肥干预对其的影响。方法:对64名肥胖儿童少年(按体脂百分比分为轻、中和重度肥胖组共3组)进行4周有氧运动减肥,采用流式细胞术测定红细胞膜PS外翻,干预前后进行血脂、PS外翻及Na+K+-ATPase和Ca2+Mg2+-ATPase酶活性的测定。结果:运动干预前轻度肥胖组PS外翻与其他2组肥胖者之间存在显著性差异(P≤0.05),HDL仅在轻度组和重度组之间存在显著性差异;运动干预后Na+K+-ATPase活性显著增加(P≤0.05),Ca2+Mg2+-ATPase活性虽有增加,但未呈显著性水平;运动干预后PS外翻虽然有所下降,但无显著性差异。结论:脂代谢紊乱的初期,膜PS外翻可能比血脂指标更能体现肥胖的发展。有氧运动减肥能显著增加红细胞膜Na+K+-ATPase活性,改善红细胞膜PS外翻水平,但后者对运动干预的效应滞后于血脂变化。

氧化应激指标、血管内皮损伤与慢性肾病患者磷脂酰丝氨酸外翻的关系

目的探讨不同阶段的慢性肾病(CKD)患者磷脂酰丝氨酸(PS)外翻与氧化应激水平、血管内皮损伤的相关性。方法选取2019年1月—2021年12月在北京中医医院顺义医院收治的CKD 2~5期患者88例。根据CKD分期分为轻度(2~3期)20例、中度(4期)15例、重度(5期)53例3组,比较其临床资料,检测血液PS、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,分析3组患者上述指标表达水平差异,并分析其中的相关性;另选取静脉血管标本40例,CKD5期患者行自体动静脉瘘(AVF)30例,肢体外伤手术正常10例,将血管内皮细胞进行免疫组化染色,观察超氧化物歧化酶1(SOD-1)、GPx、VEGF、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在静脉内皮细胞内的表达情况。结果3组CKD患者血清SCr、BUN、UA水平随病情加重而升高(F=61.316、43.258、5.044,P均<0.001);血清MDA、eNOS水平随病情加重而升高,SOD、GPx表达随病情加重而降低(F/P=6.984/0.030、4.155/0.020、14.937/<0.001、3.172/<0.001);血清VEGF、PS表达随病情加重而升高(F/P=29.871/<0.001、10.286/<0.001)。CKD5期患者PS、VEGF水平分别与SOD、GPx表达呈负相关(P<0.01),与MDA、eNOS表达呈正相关(P<0.01),PS暴露水平与VEGF表达呈正相关(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线表明,SOD、GPx、MDA、eNOS、VEGF对PS外翻预测的曲线下面积为0.819、0.818、0.735、0.824、0.892。SOD-1、GPx、VEGF、VEGFR2在AVF术CKD患者的静脉组织中呈高表达。结论氧化应激可加重患者血管内皮损伤与PS外翻,从而加重CKD 5期患者病情,血管内皮损伤指标对PS外翻具有预测价值,PS外翻有望成为CKD治疗的新靶点。

吞噬细胞的磷脂酰丝氨酸外翻与其血清依赖的调理作用的关系

目的:探讨外周血中单核吞噬细胞的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻与其血清依赖的调理作用之间的关系,为探索生理微环境对于吞噬细胞功能的影响奠定基础.方法:基于Ficoll-paque密度梯度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),经过PBS充分洗涤之后利用含有和不含血清的RPMI 1640培养基处理细胞,一定时间之后利用Annexin V染色检测血清处理前后PS外翻的情况;通过比色法检测胞膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,以考察脂质过氧化产物对Annexin V检测结果的影响;通过anti-CD3、anti-CD56、antiHLA-DR等不同的表面分子抗体染色,利用流式分析PBMC中不同细胞群的PS外翻情况;利用表达绿色荧光蛋白的细菌与PBMC共孵育,通过流式细胞术检测细胞的吞噬能力.结果:流式分析表明PBMC经血清处理后PS+细胞比例明显升高,并且这种升高发生在血清短暂的处理之后;血清处理对于细胞膜MDA的含量没有显著影响,排除了脂质过氧化对PS检测的影响;针对PBMC的细胞表型分析表明HLA-DR+单核吞噬细胞是PBMC中对血清处理敏感的主要细胞亚群,其在血清处理后Annexin V+细胞中的比例有显著的增加(P<0.05);细菌吞噬实验表明外翻的PS参与了血清诱导的调理作用.结论:吞噬细胞PS外翻是血清依赖的,并且这种外翻的PS参与了对细菌的调理作用.

精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻与线粒体膜电位的关系

目的:探讨精子早期凋亡过程中质膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻与线粒体膜电位丧失的相关性。方法:42例精液标本用AnnexinV/PI和Rh123/PI双染法染色后,用流式细胞术(FCM)分析。结果:AnnexinV/PI染色法中,与正常生育组比,不育组活精子和死精子百分率均存在统计学差异(P=0.001,P=0.003),凋亡精子百分率无统计学差异。Rh123/PI染色法中,与正常组相比,线粒体膜电位正常精子百分率和死精子百分率均存在统计学差异(P=0.000,P=0.001),线粒体膜电位丧失精子百分率差异无显著性(P=0.120)。两组中凋亡精子百分率与线粒体膜电位丧失精子百分率间均呈正相关。结论:精子存在质膜PS外翻和线粒体膜功能紊乱,且两者间存在相关性。

急性脑血栓形成与磷脂酰丝氨酸外翻、微粒释放相关性的研究

目的:通过对急性脑血栓患者血浆磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻、微粒(microparticle,MP)释放的动态变化的观察,探讨其与急性脑血栓的关系,为临床早期治疗提供依据。方法:将符合条件的急性脑血栓患者20例作为试验组(排除标准:糖尿病、恶性高血压、尿毒症、恶性肿瘤、近6个月输血史),同时收集20例正常体检人员,无心脑血管疾病,检测前无使用抗凝剂等干扰血凝系统的药物,作为对照组。通过流式细胞仪、共聚焦显微镜检测PS暴露,比较正常人与脑血栓患者的结果差异是否有显著性,得出结论。结果:试验组与对照组相比,差异有显著性(P<0.05),试验组微球总数明显高于对照组。结论:磷脂酰丝氨酸外翻、微粒释放可以促进凝血因子复合物及凝血酶的生成,最终促进凝血的发生,在急性脑血栓形成中起到非常重要的作用。

磷脂酰丝氨酸外翻是凋亡“食我”的信号

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）在真核细胞膜中广泛存在,具有重要的生物学功能。翻转酶可以将细胞内的PS经过生化反应而使其外翻在细胞表面,如细胞凋亡、血小板活化。细胞凋亡时,细胞内的ATP供应不足会引起胞浆Ca^2＋浓度升高,使得PS外翻。细胞凋亡及凋亡细胞的清除是动物体内基本的生理过程,对于要清除的凋亡细胞,必须显示一个“食我”（“eat me”）的信号来促使吞噬细胞识别进行吞噬,而这一信号最有可能是由PS发出。当PS外翻在细胞表面,凋亡细胞表面的PS就会充当起“食我”的信号,并且能够活化血小板产生血液凝血因子。在早期研究中并没有发现反转录和翻转酶,而近期发现外翻在细胞表面的PS受到越来越多学者的关注,成为研究热点。本文介绍了在血小板活化和凋亡细胞中PS外翻,并讨论清除凋亡细胞的过程。

质膜组分磷脂酰丝氨酸外翻的分子调控机制

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是细胞质膜重要的磷脂成分之一,具有重要的生物学功能。在细胞凋亡及一些特殊的病理条件下,细胞内ATP供能不足,胞浆Ca2+浓度升高,引起PS发生外翻。PS外翻在不同类型细胞中具有不同的生物学功能,且外翻的程度与疾病发展程度密切相关,可作为癌症等多种疾病治疗的靶标。文章综述了细胞质膜中磷脂酰丝氨酸的重要生物学功能和意义、磷脂酰丝氨酸外翻的分子机制及在临床医学方面的应用,以期对未来的功能和临床应用研究提供参考。

磷脂酰丝氨酸外翻与结直肠癌细胞环磷酰胺耐药的相关性

目的建立环磷酰胺诱导的结直肠癌耐药细胞株HCT 116、HT-29,并探讨磷脂酰丝氨酸外翻与结直肠癌细胞环磷酰胺耐药的相关性。方法用流式细胞仪检测环磷酰胺耐药患者和非耐药患者磷脂酰丝氨酸外翻的表达,实时荧光定量PCR检测耐药相关基因的表达。采用CCK-8测定环磷酰胺的半数抑制浓度值,并以此为筛选浓度,在体外间歇诱导下建立环磷酰胺诱导的耐药细胞株模型。实时PCR检测4种多药耐药基因MRP、MDR1、Topo II、LRP在耐药细胞和非耐药细胞中的表达;蛋白质免疫印迹法检测MDR1蛋白的表达。流式细胞仪检测结直肠癌环磷酰胺耐药细胞和非耐药细胞磷脂酰丝氨酸外翻表达阳性率。结果环磷酰胺耐药患者相对非耐药患者的组织的磷脂酰丝氨酸外翻表达率相对较高,且耐药相关基因的表达增高。筛选出的HCT116、HT-29耐药组细胞与非耐药细胞比较,其细胞活性显著提高(P<0.05)。实时PCR和蛋白质免疫印迹法检测耐药相关MDR1蛋白在HCT116、HT-29耐药细胞株表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测结直肠癌HCT116、HT-29耐药细胞相对非耐药细胞磷脂酰丝氨酸外翻的表达增高。结论结直肠癌耐药组织或耐药细胞中耐药相关基因表达水平高于非耐药组织或非耐药细胞,且磷脂酰丝氨酸外翻的表达与耐药相关基因的表达成正比,对评估CRC环磷酰胺耐药具有一定参考意义。

磷脂酰丝氨酸及其结合配体与尿毒症血液高凝状态的相关性

众所周知,尿毒症患者存在着凝血功能异常,表现为出血倾向和血液高凝两个方面.现尿毒症患者血液高凝即血栓形成的发病率逐渐升高,这主要与凝血系统功能异常、纤溶活性异常、血小板活性异常等多方面因素相关.近年来许多研究证实凝血过程发生时血小板、红细胞膜表面所表达的磷脂酰丝氨酸(PS)参与凝血过程并与尿毒症血液高凝状态、血栓形成有重要关系.现将国内外研究状况综述如下.

固定化IFN-γ和TNF-α对HeLa细胞凋亡的长效诱导活性

采用光化学固定化方法将干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)共固定化在12孔聚苯乙烯培养板(PSt)上.无血清培养子宫颈癌(HeLa)细胞,通过动态细胞计数跟踪、倒置显微镜观察、磷脂酰丝氨酸外翻分析方法,研究细胞因子药物对HeLa细胞凋亡诱导作用的长效活性.结果表明,20 ng/well的共固定化IFN-γ和TNF-α能显著诱导HeLa细胞凋亡,在18 d内,细胞发生了典型的凋亡,最高抑制活性可达94.12%,未见细胞有重新生长的现象.磷脂酰丝氨酸法分析也显示第3天和第6天的凋亡率为76.6%和88.7%.