羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分理化性质进行研究。方法采用有机溶剂去除血红蛋白、热变性、超滤浓缩、丙酮沉淀、DE FF柱色谱的方法 ,对羊红细胞Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果羊红细胞 5 2 0g得Cu ,Zn SOD总活力为 4 6 70 0 0u ,比活为 812 6u/mg·pro,纯化倍数为 2 6 .2 ,活性回收率为 6 1%。理化性质分析表明 :该酶的最大紫外吸收波长为 2 5 8nm ,亚基相对分子量为 16 .1kD ,每个亚基含 1个铜原子和 1个锌原子。pH在 6～ 11范围内该酶稳定性很好 ,在 35℃～ 75℃范围内 ,保温 2 0min ,酶活基本没有损失。 2mmol/L的SDS对Cu ,Zn SOD没有明显的抑制作用 ,而 2mmol/L的H2 O2 对该酶表现出较强的抑制作用。结论采用此方法分离纯化的Cu ,Zn SOD达到电泳纯 ,其理化性质与其它动物血液来源的Cu ,Zn SOD一致。

大肠癌患者红细胞中铜锌超氧化物歧化酶活性研究

目的:监测大肠癌患者外周血中红细胞铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性变化与病程的相关性，以了解其对预后的临床意义。方法：对86例病程明确的大肠癌患者作红细胞CuZn-SOD活性的动态测定，与同期健康人作测定对照，并作统计学分析。结果：实验观察组与正常对照组有非常显著性差异(P<0.01)。且CuZn-SOD活性在病程长、病情重、肿瘤分化程度差者其活性下降更明显。表现有一定规律的变化曲线，而肿瘤所在部位之不同，则与活性变化无关。结论：对大肠癌患者作定期的外周血红细胞CuZn-SOD活性监测，对病程的预后、转归有一定的临床意义。

牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶的循环伏安法研究

应用悬汞电极和金属铂电极测试了牛红细胞Cu2Zn2SOD分别在PH7．0的0．05mol／L硫酸钠溶液及pH7．26的0．1mol／L磷酸缓冲溶液中的氧化还原电位，发现-0．016V（vs．NHE）处有一还原峰，＋0．705V（VS．NHE）处有一氧化峰，并对其进行讨论．

锌、铜对大鼠红细胞超氧化物歧化酶活性的影响

为探讨锌、铜在抗衰老中的作用及观察老龄大鼠的抗氧化能力的变化,我们测定了给予锌、铜的成年与老年大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明,给锌、铜组红细胞SOD活性比对照组明显增高(P<0.01),但给铜组较给锌组高(P<0.01)。老龄大鼠抗氧化能力是降低的。这说明锌、铜可以提高机体的抗氧化能力。

利用废弃人红细胞批量生产铜、锌超氧化物歧化酶

本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,按乙醇-氯仿沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀的操作手续进行了铜、锌超氧化物歧化酶中等规模(300～600毫克)的批量生产。经理化性质鉴定及蛋白纯度分析证实,我们提取的人铜、锌超氧化物歧化酶的比活性和纯度分别可达到2500McCord—Fridovich单位/毫克蛋白和90％以上,聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱等理化性质指标也显示出纯酶的基本特征。

红细胞铜锌超氧化物歧化酶与血清维生素C在糖尿病肾病时的变化

目的：探讨氧化与抗氧化在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法：测定对照（Ｃ）组１５人及糖尿病蛋白尿正常（ＤＭⅠ）组、微量白蛋白尿（ＤＭⅡ）组、临床蛋白尿（ＤＭⅢ）组患者共５６例的红细胞铜，锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及血清维生素（ＶｉｔＣ）。结果：ＳＯＤ与尿白蛋白排泄率（ＵＡＥＲ）呈明显负相关，ＤＭⅡ组明显高于Ｃ、ＤＭⅠ组，低于ＤＭⅢ组（Ｐ＜０．０１）；ＶｉｔＣ与ＵＡＥＲ呈明显负相关（Ｐ＜０．０１），但ＤＭⅠ与Ⅱ组，ＤＭⅡ、Ⅲ组间Ｐ＞０．０５；ＳＯＤ、ＶｉｔＣ与ＨｂＡ１Ｃ间呈负相关，前者Ｐ＜０．０１，后者Ｐ＞０．０５。结论：抗氧化能力下降可能是糖尿病发生肾脏损伤的原因之一，并可反映损伤程度。

水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因的序列和表达分析

以水稻(Oryza sativa)品种Cpslo17幼穗为材料,通过RT-PCR克隆了长度为698bp的编码水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因(OsCu/Zn-SOD)。序列分析表明其覆盖基因完整编码框,编码由152个氨基酸组成的蛋白,它与玉米(Zea maize)Cu/Zn-SOD基因序列的相似率为88%。TargetP和ChloroP预测编码蛋白N端无信号肽序列,且此编码区段有8个外显子和7个内含子。利用Swiss-Model站点预测OsCu/Zn-SOD三维结构,并分析其铜锌离子结合位点的结构。RT-PCR结果表明OsCu/Zn-SOD在水稻不同品种均有表达,但表达量存在差异,OsCu/Zn-SOD在Cpslo17的分裂旺盛的幼嫩组织如幼穗、开花期花序和未成熟种子中表达量较高,而在叶片中表达量相对较低,在愈伤组织中表达微弱。

红细胞铜锌超氧化物歧化酶的连续监测法

采用黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶系统与色原偶联 ,研制了红细胞铜、锌超氧化物歧化酶 (CuZn SOD)测定试剂 ,并在Monarch 2 0 0 0Plus自动生化分析仪上 ,改进SOD活性测定的连续监测法。结果显示 ,该法批内CV 2 5 % ,批间CV 4 0 % ,回收率 90 %～ 1 0 5 % ,平均回收率 98 5 % ;在标准品 0 2 5～ 4 0 0U/ml范围内呈线性 (r≥ 0 990 ) ,方法精密度和准确性均佳。

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶经氯仿－乙醇混合液处理，丙酮沉淀，凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等步骤提取和纯化．纯化酶在聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）图谱上的两条蛋白染色带和活性染色带相互对应，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈现单一区单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．此酶分子量为３４０００，亚基分予量为１７０００，在紫外区最大吸收值为２５８ｎｍ．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２均敏感，在０～７５℃温度范围内对热稳定．纯化酶的比活性为７４６３Ｕ／ｍｇ，纯化１００９倍，酶的回收率为７９％．

北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶电荷异构体的分离和某些性质

等电聚焦表明，北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶由等电点分别为５．０，５．３，５．９，６．１和６．５的五个主要的活性组分（电荷异构体）构成，利用分析型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳进行电荷异构体的制备级分离，采用三氯乙酸沉淀法快速确定蛋白条带的位置，电渗洗脱法回收蛋白，获得其中两个电荷异构体，对比研究结果表明电荷异构体的活性，氨基酸组成，二级结构等性质无明显差异。

儿童红细胞超氧化物歧化酶活性与血清铜锌分析

超氧化物歧化酶(SOD)是生物细胞内天然的自由基清除剂,其生物学意义已受到医学界的广泛关注。人类红细胞SOD有数种,其主要形式是铜锌SOD(CuZn-SOD)。微量元素Cu、Zn对维持CuZn-SOD的结构及其催化活性起着重要作用,且血清中Cu、Zn水平与CuZn-SOD活性亦存在一定的关系。我们对35例4～6岁学龄前儿童血清Cu、Zn、Cu/Zn比值及红细胞活性进行了测定分析,现报告如下。 1 材料与方法 1.1 研究对象

血清铜锌-超氧化物歧化酶对原发性肝细胞癌的诊断价值

随着自由基医学的发展,超氧化物歧化酶(SOD)与肿瘤的关系引起人们的关注。作者采用化学发光免疫分析法和化学发光分析技术,分别对临床确诊的肝癌患者36例和肝硬变患者19例血清铜锌-超氧化物歧化酶含量(CuZn-SOD-C)、免疫学性质改变的CuZn-SOD含量(CuZn-SOD-I。

羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的：从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶(Cu，Zn—SOD)．并对其部分理化性质进行研究．方法：采用有机溶剂去除血红蛋白，热变性，超滤浓缩，丙酮沉淀、DF—FF柱色谱的方法．对羊红细胞Cu．Zn-SOD进行分离纯化。结果：羊红细胞520g得Cu，Zn—SOD总活力为467000IU．比活为8126μ／mg.pro，纯化倍数为26．2，活性回收率为61％，理化性质分析表明，该酶的最大紫外吸收波长为285nm，亚基相对分子量为16．1ku，每个亚基含1个铜原子和1个锌原子，pH在6-11范围内该酶稳定性很好，在35℃-75℃范围内，保温20min，酶活基本没有损失。2mmol／L的SDS对Cu，Zn—SOD没有明显的抑制作用，而2mmol／L的H2O2对该酶表现出较强的抑制作用，结论：采用此方法分离纯化的Cu，Zn—SOD达到电泳纯，其理化性质与其它动物血液来源的Cu，Zn—SOD一致。

用铜盐法纯化牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ），经溶血，ＣｕＣｌ２处理及离子交换柱层析等步骤被纯化到高度均一程度．纯化酶在聚丙烯酰胺梯度凝胶图谱上的活性染色带与蛋白染色带相对应，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现单一区带．元素分析表明该酶含有２个锌原子和多于２个的铜原子．分子量和亚基分子量分别为３３５００和１７８００．在紫外区酶有４个明显吸收峰，分别为２７４．６ｎｍ，２６６．２ｎｍ，２５８．８ｎｍ和２４５．４ｎｍ．该酶对热稳定，纯化后酶比活性为１４５２５ｕ／ｍｇ，活力回收率为４５％．本文对经ＣｕＣｌ２处理与氯仿－乙醇处理纯化的牛血Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ进行比较，结果表明。

人肝细胞癌组织中铜、锌-超氧化物歧化酶含量的变化及其生物学意义

用放射免疫测定法对人肝细胞癌组织中铜、锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn—SOD)含最进行了研究。发现人肝癌组织中Cu,Zn—SOD含量降低,且肝癌组织中该酶的含量与肝癌的分化程度有关。本文还就以上结果的生物学意义进行了探讨。

莲铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆和序列分析

用RT—PCR方法，从中国莲（Nelumbo nucifera）幼叶cDNA中成功扩增出铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）全长序列，并进行测序分析．该cDNA序列全长461bp，包括起始密码子和终止密码子．其中编码区段为456bp，共编码152个氨基酸，其编码蛋白的相对分子质量为1．552×10^4，等电点为4．515．与GenBank中其他物种的CuZnSOD进行同源性比较，发现其核苷酸序列相似性高达80％～86％，氨基酸序列相似性达89％～94％．所有已知的CuZnSOD的关键活性位点在该蛋白中均保守存在．将其与一些典型的单子叶和双子叶植物的该蛋白进行进化树分析，为富有争议的莲的系统学地位的确定，在分子生物学上为莲的系统学地位的确定提供了一个依据．该基因已在GenBank登记，序列号为DQ227345．

人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆、表达、发酵及纯化工艺研究

目的：用基因工程的方法获得人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ）的高产菌，通过发酵培养，最后纯化获得大量廉价的高纯度的ｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ。方法：用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），扩增了人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ）的ｃＤＮＡ，将此正确测定的ｃＤＮＡ重组到分泌型表达载体ｐＥＴ－２２ｂ（＋）中，重组质粒在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中用５Ｌ全自动发酵罐表达ｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ，表达产物用亲和层析一步法进行纯化。结果：ｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ表达产物占菌体总蛋白的３０％，发酵水平酶活力可达９５０ｕ·ｍｌ－１培基，比活为１４００ｕ·ｍｇ－１，经亲和层析后纯度可达８８％，活力回收率大于８０％，比活大于５０００ｕ·ｍｇ－１。结论：我们开展人重组ＳＯＤ的研究不仅大大丰富了应用酶学的内容，而且积极开展应用研究，实现产业化，意义重大。

大鼠组织中铜锌及锰超氧化物歧化酶活性的比较

在真核生物中,CuZn-SOD(铜锌超氧化物歧化酶)分布于细胞的可溶部分(胞浆及线粒体内膜间隙),Mn-SOD(锰超氧化物歧化酶)则局限于线粒体基质。两种 SOD 均可催化超氧阴离子自由基(O_2^(?))歧化为H_2O_2和 O_2,使组织免受过多的 O_2^(?)所致的潜在损伤作用,对机体起重要的保护作用。但二者的氨基酸组成、分子量、亚基数目、特定的吸收光谱等多种理化性质,均有较大的差异。