红霉素A制备红肟的研究

研究红霉素肟的合成和鉴定,用红霉素A与盐酸羟胺反应,所得产物用碱中和,重结晶后得红肟,用质谱、核磁共振、元素分析鉴定产物,结构与红肟相符,并且用正交实验法确定最佳方案。实验结果表明:反应温度72℃、pH6.4、反应时间36hr、红碱与盐酸羟胺的摩尔比为1∶6为最佳合成条件。

靛玉红肟甲醚的合成及构效关系的研究

目的：研究靛玉红肟甲醚的合成及构效关系。方法：用靛玉红、NH2OH·HCL、CH3I在乙醇中直接合成靛玉红肟甲酸并得到其晶体；用FT-IR170SX光谱法、JEDL－JNM－FX90Q，HNMR光谱法、CarloErba1106元素分析法、CAD4衍射法是靛玉红肟甲醚分子结构和晶体结构；用美兰试验测抗白血病活性。结果：测定出靛玉红肟甲醚的分子结构和晶体结构，并得出靛玉红肟甲醚的抗白血病活性优于靛玉红。结论：肟甲醚结构＞C＝N－OCH3对靛玉红类药物抗白血病活性有重要作用，对寻找这类新药有重要意义。

复合固定相色谱离析靛玉红肟与合成前体靛玉红的应用

目的:从靛玉红肟合成粗品中离除靛玉红、靛蓝等杂质,探讨靛玉红肟衍生物晶体的获得实验方法,为实验室以靛玉红为前体合成高效、低毒的靛玉红肟衍生物奠定基础。方法:筛选色谱分离系统,从靛玉红肟粗品混合物中分离出靛玉红肟、靛玉红、靛蓝等成分,重结晶得到靛玉红肟、靛玉红晶体。结果:采用氧化铝-硅胶复合固定相色谱,实现对靛玉红肟混合物中目标成分的离析。结论:实验采用氧化铝-硅胶复合固定相色谱离析能够实现靛玉红、靛蓝等的离除,为进一步探讨靛玉红肟衍生物晶体的结构及其构效关系打下了前期的工作基础。

N_（1′）－甲基靛玉红肟的结构和性质研究

报道了Ｎ_１′－甲基靛玉红肟的合成、晶体结构及性质．体外美蓝试验结果表明，它的抗白血病活性明显优于靛玉红，其水溶性和脂溶性都较靛玉红有所增强．用Ｘ射线衍射法测得其晶体结构，组成为Ｃ_（１７）Ｈ_（１３）Ｎ_３Ｏ_２，Ｎ_ｒ＝２９１．２１，空间群Ｐ２_１／ｃ，晶体学数据：ａ＝１．５２２６（４），ｂ＝０．６５２４（３），ｃ＝１．６５６２（５）ｎｍ；β＝１０３．６９（４）°，Ｚ＝４．最终偏离因子为０．０４３．分子近似平面型．

靛玉红肟及其金属配合物靛玉红肟-Cu(Ⅱ)的合成

为了寻找新的抗白血病药物,我们以靛玉红为原料合成了靛玉红肟及其金属配合物靛玉红肟-Cu(Ⅱ),并用重结晶的方法进行了分离提纯。靛玉红肟的分子结构通过红外光谱、元素分析以及晶体结构分析确定。靛玉红肟-Cu(Ⅱ)的分子结构通过红外光谱、元素分析确定。初步抗白血病活性试验表明,靛玉红肟具有抑制作用,靛玉红肟-Cu(Ⅱ)则无效。

靛玉红甲肟对HT-29细胞增殖和凋亡的影响及机制

背景与目的:近年来有报道称靛玉红甲肟(indirubin-3’-monoxime)在体内外实验中对部分实体肿瘤细胞具有明显的抑制作用,但尚未见其对人结肠癌HT-29细胞影响的研究报道,因而本文旨在研究其对HT-29细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:MTT法检测不同浓度靛玉红甲肟处理HT-29细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线。流式细胞仪检测凋亡率,RT-PCR检测细胞凋亡抑制基因survivin和bcl-2及凋亡促进基因BaxmRNA的变化。结果:靛玉红甲肟明显的抑制HT-29的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(F=11.25,P<0.01)。流式细胞仪检测发现:以10μmol/L的靛玉红甲肟处理HT-29细胞后,其凋亡率呈时间依赖性上升(F=195.25,P<0.01)。RT-PCR检测发现HT-29细胞survivin(F=78.75,P<0.01)和Bax(F=87.61,P<0.01)转录上升,而bcl-2转录显著下降(F=95.82,P<0.01)。结论:靛玉红甲肟对人结肠癌HT-29细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与下调bcl-2/Bax比例有关。

靛玉红甲肟对人食管癌细胞株EC-1和Kyse70体外增殖和细胞周期的影响

目的:探讨靛玉红甲肟(indirubin-3'-monoxime)对体外培养的人食管癌细胞株EC-1和Kyse70细胞增殖和细胞周期的影响。方法:不同浓度靛玉红甲肟处理食管癌EC-1和Kyse70细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,FCM法和RT-PCR法检测细胞周期分布及bcl-2和bax mRNA表达的变化。结果:靛玉红甲肟对人食管癌细胞EC-1和Kyse70的生长具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。FCM法检测发现,以5μmol/L的靛玉红甲肟对EC-1细胞处理24、48和72h后,G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期细胞比例未见明显改变,G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05),呈时间依赖性。RT-PCR法检测发现人食管癌细胞bcl-2和bax mRNA比例呈时间依赖性下调。结论:靛玉红甲肟对人食管癌细胞EC-1和Kyse70具有明显的增殖抑制作用。

靛玉红甲肟对奈达铂抗人食管癌EC-1细胞的化疗增效作用

目的探讨靛玉红甲肟(Indirubin-3′-monoxime,IRO)与奈达铂联合应用对人食管癌细胞株EC-1的影响及其作用机制。方法经不同浓度的IRO和(或)奈达铂处理EC-1细胞后,用MTT法测定细胞增殖抑制效应;流式细胞术观察细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达变化。结果与IRO或奈达铂单药作用相比,IRO与奈达铂联合应用可显著增强人食管癌细胞增殖抑制作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例上升,癌细胞Bcl-2基因表达下降,Bax表达增强。结论IRO与奈达铂联合应用具有协同抗食管癌作用,其机制可能与细胞周期调控及凋亡相关基因表达调控有关。

靛玉红甲肟对膀胱癌T24细胞系体外生长抑制的研究

采用MTT法检测人膀胱癌T24细胞系经不同浓度靛玉红甲肟分别作用12、24、48、72 h后,细胞生长抑制率的变化;用半定量RT-PCR方法检测不同浓度的靛玉红甲肟干预T24细胞生长时,对其Oct-4 mRNA表达的影响。发现1、5、10μmol/L靛玉红甲肟均能抑制T24细胞生长,并呈明显的量效关系和时间依赖性,且靛玉红甲肟能够抑制Oct-4 mRNA的表达,并呈剂量依赖性。认为靛玉红甲肟能明显抑制T24细胞增殖,同时抑制其Oct-4mRNA的表达。

靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别用0、1、5和10μmol/L靛玉红甲肟处理EC9706细胞12、24和48h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;用10μmol/L靛玉红甲肟处理EC9706细胞0、24、48和72h后,采用流式细胞术法检测凋亡率;分别用0、1、5和10μmol/L靛玉红甲肟处理EC9706细胞48h后,采用RT-PCR法检测细胞Sox-2mRNA的表达。结果:靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞增殖具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(F剂量=135.237,F时间=96.488,F交互=189.544,P均<0.001)。靛玉红甲肟作用EC9706细胞后,细胞凋亡率呈时间依赖性上升(F=195.350,P<0.001),Sox-2mRNA的表达呈剂量依赖性下调(F=87.552,P<0.001)。结论:靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Sox-2mRNA表达有关。

靛玉红甲肟对HT-29细胞STAT3和Bcl-2/Bax表达的影响

目的检测靛玉红甲肟(Indirubin-3’-monoxime,IRO)作用前后人结肠癌HT-29细胞转录活化因子3(STAT3)和凋亡调节基因Bcl-2/Bax表达变化,探讨IRO抑制HT-29细胞增殖的机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对HT-29细胞增殖活性的影响。RT-PCR法检测10μmol/L的IRO作用不同时间对HT-29细胞STAT3、Bcl-2和BaxmRNA表达的影响。结果IRO对HT-29细胞生长具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。RT-PCR检测发现,以10μmol/L的IRO处理HT-29细胞后,STAT3和Bcl-2表达显著下降,而Bax表达上升,不同时间组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论IRO具有抑制人结肠癌HT-29细胞增殖的作用,其机制与下调STAT3、Bcl-2表达和升高Bax表达有关。

N^1-烃基-3'-肟基靛玉红的简便合成、晶体结构及抗肿瘤活性研究

研究了N1-烃基-3'-肟基靛玉红的合成新方法.以靛玉红为起始原料,经N-烃基化、成肟反应选择性地得到单烃基化的N1-烃基-3'-肟靛玉红衍生物3a～3c.晶体结构测定证明所合成的N1-乙基-3'-肟基靛玉红(3b)以(3Z,3'E)构型存在.体外5种细胞株抗肿瘤活性筛选数据显示,化合物3a～3c都有抗肿瘤作用,其中,N1-乙基-3'-肟基靛玉红(3b)具有较强的抗肿瘤活性和较低的毒性.

3'单肟靛玉红对β淀粉样蛋白致SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)抑制剂3'单肟靛玉红(IMX)对β淀粉样蛋白(Aβ)致SH-SY5Y细胞毒性的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分别加入0.2、0.4、0.8、1.6、3、6、12μmol/L IMX(IMX组);10、20、30、40、50μmol/L Aβ25-35(Aβ组);以及加入0.25、0.5和1.0μmol/L IMX 24 h后,再加入20、40μmol/L Aβ25-35(IMX+Aβ组);同时以未加入IMX及Aβ25-35的SH-SY5Y细胞作为空白对照组,分别孵育48 h、72 h。用细胞计数试剂盒测定细胞的存活率。用原位末端标记法检测细胞凋亡,计算凋亡指数。结果与空白对照组孵育48 h、72 h比较,IMX 0.2～1.6μmol/L亚组的细胞存活率的差异无统计学意义;IMX≥3.0μmol/L亚组的细胞存活率明显降低(P<0.01～0.001)。与空白对照组相比,10～50μmol/L Aβ25-35可使细胞活性逐渐降低(P<0.05～0.001)。0.25、0.5、1.0μmol/L IMX+40μmol/L Aβ亚组的细胞存活率均显著高于40μmol/L Aβ亚组(P<0.05～0.005)。0.5、1.0μmol/L IMX+20、40μmol/L Aβ亚组的细胞凋亡指数分别明显低于20、40μmol/L Aβ亚组(P<0.01～0.001)。结论 IMX能显著提高用Aβ处理的SH-SY5Y细胞的存活率,减少Aβ导致的SH-SY5Y细胞凋亡,有神经保护作用。

靛玉红-3′-单肟对猕猴成纤维细胞增殖和凋亡及周期同步化的影响

【目的】研究靛玉红-3′-单肟(Indirubin-3′-monoxime)对猕猴成纤维细胞增殖、凋亡和周期同步化的影响。【方法】用PI和FITC同时对细胞进行染色,用流式细胞仪检测荧光强度,对细胞内DNA和蛋白质的含量作相对定量,分析细胞在G0,G0+G1,S,G2+M期的分布比例;用BrdU标记法检测靛玉红-3′-单肟处理对细胞增殖的影响,用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的发生情况。【结果】(1)与处于对数增殖期(对照)的细胞相比,10μmol/L靛玉红-3′-单肟处理30 h后,G0与G0+G1期细胞比例分别由7.27%和84.26%增加为14.21%和94.22%,差异达显著水平。(2)与对数增殖期细胞(BrdU阳性率为80%)相比,靛玉红-3′-单肟处理30 h可显著地抑制细胞的增殖,在后续标记培养24 h期间只有8.15%的细胞呈BrdU阳性,如果是在去除药物的正常条件下标记培养24 h,大多数细胞(58.28%)又可进入增殖状态。(3)与正常培养对照组细胞凋亡率(1.12%)相比,靛玉红-3′-单肟处理组凋亡发生率为1.82%,虽有所增加但差异不显著。【结论】靛玉红-3′-单肟是一种可逆的细胞周期抑制剂,对猕猴成纤维细胞增殖的抑制作用是可逆的,对细胞凋亡发生率没有显著影响。

靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的探讨靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞增值和凋亡的影响。方法分别用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24、48、72h,采用MTT法检测细胞抑制率;用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24h后收集样品,采用流式细胞术法检测细胞周期及其凋亡率。结果 MTT法测定靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞的增殖具有抑制作用,且表现出剂量和时间的依赖性,随着浓度升高时间加长,抑制明显(P<0.01)。流式细胞术测定也表明靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞有诱导凋亡的作用,凋亡随着靛玉红甲肟浓度的增大不断地增加。细胞形态学方面也可观察出细胞随着靛玉红甲肟剂量和时间的增大而逐渐出现越来越多的凋亡,细胞核染色质深染,聚集于核膜下呈新月形,细胞膜突起呈小泡样,小泡脱落形成含核小体片段的凋亡小体。结论靛玉红甲肟确实可以诱导HepG2细胞凋亡,但靛玉红甲肟对肝癌细胞作用机制还不明确,需要作进一步的深入研究。

靛玉红对喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制

目的:探讨靛玉红甲肟(IRO)对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制。方法:MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对Hep-2细胞增殖活性的影响。流式细胞仪检测IRO对Hep-2细胞周期的影响。Western法检测IRO对Hep-2细胞CDK4和cyclinD1蛋白表达的影响。结果:MTT结果发现IRO对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性(P<0.01)。流式检测发现,以10μmol/L的IRO处理Hep-2细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,不同浓度组间差异存在显著性(P<0.01)。Western结果发现IRO对Hep-2细胞CDK4和cyc-linD蛋白的表达有抑制作用(P<0.01)。结论:IRO具有抑制人喉癌Hep-2细胞增殖的作用,其机制与阻滞细胞于G0/G1期有关。

靛玉红衍生物结构与抗肿瘤活性关系预测方程的建立

目的:建立一个方程,用于预测靛玉红衍生物(主要为靛玉红-3′-肟类)的体外抗肿瘤活性。方法:采用经典的二维定量构效关系研究方法,对24个靛玉红衍生物进行计算机模拟与统计分析。结果:得到靛玉红衍生物体外抗肿瘤活性的定量构效方程,且发现,该类靛玉红衍生物的活性与脂水分配系数、偶极矩、总电荷绝对值和最大负电荷呈负相关,与分子体积呈正相关。结论:所得方程能有效预测该类靛玉红衍生物的活性,且对其类似物的设计与改造具有指导意义。

多发性骨髓瘤原代细胞斑马鱼模型的建立及其在药物筛选中的应用

目的:应用斑马鱼建立多发性骨髓瘤(MM)患者原代肿瘤细胞来源的人源肿瘤异种移植模型(MMPDX),利用该模型对候选药物靛玉红-3′-单肟(I3MO)的抗骨髓瘤活性进行药效学评价。方法:取受精后2 d的斑马鱼胚胎进行荧光标记的MM患者原代肿瘤细胞移植,细胞注射后0、16和24 h,观察MM患者原代肿瘤细胞在斑马鱼体内生存,将肿瘤细胞移植后的斑马鱼胚胎随机分为对照、BTZ治疗、I3MO治疗共3组,在药物BTZ、I3MO处理前和处理24 h后,通过荧光显微镜观察斑马鱼体内荧光区域面积反映MM患者原代肿瘤细胞存活情况并验证。结果:MM患者原代肿瘤细胞可在斑马鱼体内存活,MM-PDX构建成功。与对照组相比,BTZ和I3MO药物干预后斑马鱼体内荧光区域的面积均显著降低(P<0.05),BTZ、I3MO显著抑制MM细胞在斑马鱼体内的生存。结论:成功建立了原代MM患者肿瘤细胞来源的斑马鱼模型MM-PDX,应用此模型可作为抗MM药物筛选的工具。

壳聚糖/海藻酸钠水凝胶顺序释放BMP/WNT信号通路激活剂促成骨细胞分化的体外实验研究

目的:通过组织工程策略构建顺序释放骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)和WNT信号通路激活剂的双层复合材料,并研究其在体外对成骨细胞分化的作用。方法:用CCK-8法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和茜素红染色法分别检测BMP信号通路激活剂他克莫司(tacrolimus,FK506)和WNT信号通路激活剂6-溴靛玉红-3-肟(6-bromoindirubin-3-oxim,BIO)对前成骨细胞系MC3T3-E1增殖活性和成骨向分化的影响,筛选出最合适的药物浓度;制备壳聚糖/海藻酸钠支架材料,采用称量法测定材料的降解曲线,制备内层壳聚糖载BIO、外层海藻酸钠载FK506的支架材料,采用紫外分光光度计测定药物的释放;制备内外单载不同药物的支架材料,用ALP染色法和茜素红染色法检测载药复合材料对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨向分化的作用,应用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测载药支架材料对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨相关基因表达的影响。结果:在适宜范围内,FK506处理的细胞早期ALP活性较BIO处理的细胞更强,且FK506促进ALP活性最适合的质量浓度为2.0μg/mL;茜素红染色结果表明,BIO在0.1μmol/L时,细胞表现出更强的钙结节形成能力。支架材料缓慢稳定降解至第35天,期间FK506和BIO顺序释放,药物在14 d内基本释放完毕。应用载药材料浸提液ALP染色的支架材料和茜素红染色结果显示,内载BIO外载FK506的实验组相比较于其他组表现出更强的成骨向分化能力;RT-qPCR结果显示,内载BIO外载FK506的支架材料能够显著促进成骨相关基因Runx2和OCN的表达。结论:以壳聚糖/海藻酸钠为支架材料,内层壳聚糖载WNT信号通路激活剂BIO,外层海藻酸钠载BMP信号通路激活剂FK506,两者顺序释放,即先激活BMP信号通路,后激活WNT信号通路,能够在体外促进MC3T3-E1细胞的成骨向分化,为临床治疗骨缺损,促进骨再生提供新思路。

6BIO通过JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖

目的研究（2’Z，3’E）-6-溴靛玉红-3’-肟衍生物（6BIO）对小鼠B16恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响。方法免疫组化法检测6BIO处理不同时间（24、36、48h）后B16细胞增殖指数Ki67的表达；Western blot法检测6BIO处理不同时间（1、6、12、24h）后B16细胞中磷酸化JAK激酶1蛋白（p-JAK1）和磷酸化信号转录子和转录激活子3蛋白（p-STAT3）的表达。结果6BIO处理不同时间后B16细胞增殖指数Ki67的表达均呈时间依赖性降低（P〈0．01）。6BIO能够时间依赖性抑制B16细胞中p-JAK1和p—STAT3蛋白的表达（P〈0．01）。结论6BIO能够通过抑制JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖。