基于脂噬介导的mTOR/TFEB信号通路探讨当归红芪超滤物干预糖尿病肾病作用机制

目的以当归红芪超滤物干预糖尿病肾病模型大鼠,探讨其对糖尿病肾病脂噬的效应机制。方法50只SPF级雄性Wistar大鼠随机选取7只为空白组,其余43只采用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素联合高脂高糖饲料喂养制备糖尿病肾病模型。将成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(17.9 mg/kg)和中药低、中、高剂量组(1.5、3、6g/kg),分别灌胃相应溶液,连续12周。检测大鼠随机血糖、体质量及24h尿蛋白含量,生化检测糖化血清蛋白(GSP)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)含量,HE染色观察肾组织形态变化,Masson染色观察肾组织纤维化情况,透射电镜观察肾组织超微结构,RT-qPCR检测肾组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3(LC3B)mRNA表达,Westernblot检测肾组织mTOR、转录因子EB(TFEB)、p-TFEB、LC3B蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠随机血糖显著升高(P<0.01),体质量显著减少(P<0.01),24h尿蛋白含量显著升高(P<0.01),GSP、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C、FFA含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);肾小管上皮细胞空泡变性、胞质空泡化、有大量炎性细胞浸润,胶原纤维增多且分布杂乱,脂滴数量增加,自噬体数量减少;肾组织mTORmRNA表达显著升高(P<0.01),LC3BmRNA表达显著降低(P<0.01),mTOR、p-TFEB蛋白表达显著升高(P<0.01),TFEB、LC3BⅡ蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠给药12周随机血糖、24h尿蛋白含量降低,体质量增加,GSP、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C、FFA含量降低,HDL-C含量升高;肾组织炎性细胞浸润、纤维化、脂滴沉积有不同程度缓解,肾组织mTORmRNA表达降低,LC3BmRNA表达升高,mTOR、p-TFEB蛋白表达降低,TFEB、LC3BⅡ蛋白表达升高,其中厄贝沙坦组和中药高剂量组差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论当归红芪超滤物能改善糖尿病肾病模型大鼠糖脂代谢紊乱、拮抗肾脏异位脂质沉积、促进脂噬、延缓糖尿病肾病进程,其机制可能与mTOR/TFEB信号通路有关。

当归红芪超滤物对电离辐射引起HUVECs氧化应激和炎症损伤的影响及其机制

目的探讨当归红芪超滤物(Radix Angelica sinensis and Radix Hedysari ultrafiltration,RAS-RH)对电离辐射致人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激和炎症损伤的影响。方法6 Gy X射线构建辐射HUVECs损伤模型,用不同浓度(100、200、400μg·L^(-1))RAS-RH作用于HUVECs,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,透射电镜观察细胞线粒体的结构变化,DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平,JC-1试剂盒检测细胞内线粒体膜电位变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA法检测细胞内IL-6和TNF-α含量,生化试剂盒检测MDA、CAT、SOD及GSH-PX活性,qRT-PCR检测细胞内Nrf2、HO-1、NF-κB、eNOS、IL-6基因表达水平,Western blot法检测细胞内Nrf2、HO-1、eNOS、NF-κB、p-NF-κB和IL-6蛋白的表达水平。结果与模型组相比,给药组HUVECs活性更高,细胞凋亡率下降,细胞内ROS水平降低,细胞内线粒体结构更加完整,线粒体膜电位水平更高,细胞内Nrf2、HO-1和eNOS的表达增加,p-NF-κB、IL-6的表达降低。结论RAS-RH具有抗辐射、抗氧化及抗炎作用,可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路活性,降低电离辐射导致的HUVECs氧化应激及炎症损伤,从而促进细胞增殖活性。

基于网络药理学和实验验证探讨当归红芪超滤物对放射性心脏病的作用机制

目的 基于网络药理学和动物实验探讨当归红芪超滤物(RAS-RH)防治放射性心脏病(RIHD)的潜在机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库遴选“当归-红芪”的活性成分及预测干预靶点。在GeneCards、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索RIHD靶点蛋白,采用R软件整合共同靶点,利用STRING数据库构建药物成分-疾病交集靶点蛋白互作网络(PPI),并R软件对PPI结果进行可视化分析;运用R软件与Bioconductor平台对将成分-疾病交集靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。将Wistar雄性大鼠40只,随机分为空白组、模型组、中药组、西药组,除空白组外其余各组采用X线(10Gy)单次辐射诱导构建RIHD大鼠模型,饲养30 d后持续给药4周,采用ELISA法检测给药4周后各组大鼠血清中肌钙蛋白I、脑钠肽水平,Western Blot检测预测的核心靶标半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、白介素(IL)-6、人表皮生长因子受体(EGFR)在各组大鼠心肌组织中的表达。结果 网络药理学分析:RAS-RH的主要活性成分16个、对应靶标210个,药物与疾病交集靶标58个;GO富集1792个条目(P<0.05),其中生物过程(BP)1559个条目、细胞组分(CC)38个条目、分子功能(MF)95个条目;KEGG通路富集分析共筛选出135条信号通路(P<0.05),主要涉及致癌-受体激活信号通路、脂质和动脉粥样硬化信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、癌症中的蛋白聚糖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)、肿瘤坏死因子(TNF)、缺氧诱导因子(HIF)-1等信号通路。动物实验:ELISA检测结果提示模型组大鼠血清cTnI、BNP显著升高,与模型组相比药物组cTnI、BNP显著降低(P<0.05);Western Blot检测结果提示:模型组大鼠心肌组织Caspase-3、IL-6蛋白表达升高、EGFR蛋白表达降低,与模型组相比药物组Caspase-3、IL-6降低、EGFR蛋白表达升高(P<0.05)。结论 当归红芪超滤物的有效成分主要通过作用HIF-1α、MYC、Caspase-3、EGFR、IL-6、CCND1、VEGFA等核心靶点调节PI3K/Akt、TNF、HIF-1等信号通路从而发挥防护RIHD的作用,为中药抗辐射研究提供一定的参考。

当归红芪超滤物通过抑制心脏CILP1过表达对放射性心肌纤维化的干预效应

目的明确当归红芪超滤物(RAS-RH)通过抑制心脏CILP1过表达对放射性心肌纤维化的干预效应。方法将40只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸贝那普利组、RAS-RH组、盐酸贝那普利+RAS-RH组,采用X-ray诱导心肌细胞损伤制备心肌纤维化大鼠模型,盐酸贝那普利组给予盐酸贝那普利1.0 mg·kg^(-1)灌胃;RAS-RH组给予RAS-RH 0.6 g·kg^(-1)灌胃;盐酸贝那普利+RAS-RH组给予盐酸贝那普利1.0 mg·kg^(-1)与RAS-RH 0.6 g·kg^(-1)灌胃;模型组及正常组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,药物干预4周后,采用ELISA法检测各组大鼠血清NT-ProBNP、CTnⅠ、CTnT的含量;HE染色评价各组大鼠心肌组织病理变化;Masson染色评价各组大鼠心肌胶原沉积情况并计算胶原容积分数(CVF);免疫组化检测各组大鼠心肌组中α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白的表达水平;Western blot法检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1、smad3、CILP1蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠血清中NT-ProBNP、CTnⅠ、CTnT的含量明显增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,胞间存在大量纤维组织及炎性细胞浸润,心肌组织中蓝染纤维组织明显增多,心肌CVF显著增加,心肌组织α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、CILP1蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,盐酸贝那普利组、RAS-RH组、盐酸贝那普利+RAS-RH组大鼠血清中NT-ProBNP、cTnⅠ、CTnT含量明显降低(P<0.01),心肌细胞排列稍整齐,纤维组织及炎性细胞浸润有所改善,心肌CVF显著降低(P<0.01),心肌组织中α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、CILP1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论当归红芪超滤物可通过抑制心脏CILP1的过表达减轻X线辐射诱导的大鼠心肌纤维化。

当归红芪超滤物对自然衰老大鼠抗氧化作用机制的研究

目的探讨当归红芪超滤物的抗衰老作用及其机制并比较不同分子量超滤物的作用效果。方法将42只Wistar老年雄性大鼠随机分为衰老对照组和当归红芪超滤膜提取物20万、10万、5万分子量组,给药组连续灌胃10周后,按试剂盒说明书测定血清及心肌组织中SOD、GSH-Px的活力及MDA含量水平。结果与衰老对照组相比,当归红芪超滤膜提取物20万、10万、5万分子量组的血清及心肌组织中SOD、GSH-Px活力水平不同程度提高(P<0.05),MDA水平不同程度降低(P<0.05);不同分子量组间比较,10万分子量组的SOD、GSH-Px的活性水平提高最显著(P<0.05),且MDA含量水平降低最显著(P<0.05)。结论当归红芪超滤物抗衰老的作用机制可能与提高心肌组织中的SOD、GSH-Px活力和降低MDA含量从而发挥抗氧化作用相关,其抗氧化的有效成分可能在10万分子量上下。

当归红芪超滤物对急性心肌梗死大鼠的保护作用及对热休克蛋白70表达的影响

目的探讨当归红芪超滤物对急性心肌梗死大鼠乳酸脱氢酶(actate dehydrogenase,LDH)、乳酸脱氢酶同工酶(lactate dehydrogenase,LDH1)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70 mRNA)表达的影响,阐明当归红芪超滤物对梗死心肌的保护作用。方法结扎左前降支建立大鼠心梗模型。将80只雄性Wistar大鼠随机分成5组,每组16只,分别为造模组(myocardial infarction,MI)、假手术组(sham-operation,SH)、低剂量组(low-dose drug,LD)、中剂量组(middle dose group,MD)、大剂量组(high-dose drug HD),各组动物分别于治疗后(36 h、14 d)断头处死,分别检测外周血LDH、LDH1和采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测大鼠心肌组织HSP70 mRNA的表达。结果与MI相比,显著降低了ST段抬高、LDH、LDH1水平(P<0.05,P<0.01)和增强了HSP70的表达(P<0.05,P<0.01)。结论当归红芪超滤物可通过抗氧化作用、降低LDH、LDH1、增加HSP70的表达发挥抗心肌缺血损伤,对大鼠心肌有明显的保护作用。

红芪超滤物对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响

目的观察红芪超滤物(UEMHP)对人肝癌HepG2细胞辐射增敏的作用,并探讨其可能机制。方法用CCK-8法检测UEMHP对HepG2细胞生长抑制的影响;克隆形成实验检测UEMHP对HepG2的辐射增敏作用;通过流式细胞仪检测HepG2细胞周期分布的变化和凋亡率;采用RT-PCR法检测Survivin mRNA表达。结果在5～50mg/L浓度范围内,UEMHP对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05);加药辐射组与单纯辐射组比较,克隆存活曲线显示加药辐射组各剂量点的存活分数均低于单纯辐射组(P<0.05),UEMHP能抑制HepG2细胞克隆形成,对HepG2有辐射增敏作用;流式细胞仪检测显示UEMHP具有去G2/M周期阻滞效应,加药辐射组细胞凋亡率(21.42%±3.74%)高于对照组(5.35%±0.41%)、单纯药物组(10.36%±1.75%)和单纯辐射组(10.58%±2.01%,P<0.01);RT-PCR显示加药辐射组Survivin mRNA(0.31±0.02)表达低于对照组(0.82±0.06)和单纯辐射组(0.58±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 UEMHP对人肝癌HepG2细胞具有辐射增敏作用,其辐射增敏机制可能通过下调SurvivinmRNA的表达与促进细胞凋亡有关。

当归红芪超滤物对过氧化氢致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70及内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨当归红芪超滤物对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70(HSP70)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 H2O2诱导ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡制备模型,实验分为正常对照组、模型组、单纯药物组、药物干预组,并给予相应药物干预,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度,RT-PCR法检测HSP70、eNOS的基因表达,蛋白印迹法检测HSP70的蛋白表达,硝酸还原酶法及分光光度法检测一氧化氮(NO)的含量。结果与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率明显增加、细胞内Ca2+浓度明显上升(P<0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达下调及NO含量降低(P<0.05);与模型组比较,药物干预组细胞凋亡率、细胞内Ca2+浓度明显降低(P<0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达上调及NO含量升高(P<0.05)。结论当归红芪超滤物通过上调HSP70、eNOS的表达及NO含量,降低细胞内钙超载,发挥抗H2O2致ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。

当归红芪超滤物对心肌细胞Hsp70表达的影响

目的:探讨当归红芪超滤物对凋亡心肌细胞热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响,阐明当归红芪超滤物对心肌细胞的抗氧化作用。方法:原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞用高浓度的H2O2(400μmol.L-1)建立细胞凋亡模型,用不同浓度(3.75、7.50和15.00g.L-1)的当归红芪超滤物进行干预,倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞搏动频率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,分别用RT-PCR技术和Western blotting技术检测心肌细胞中Hsp70基因及蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,H2O2损伤组心肌细胞搏动频率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Hsp70mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01);与H2O2损伤组比较,当归红芪超滤物高、中、低剂量组心肌细胞搏动频率显著增加,但低于对照组(P<0.01),凋亡率显著降低(P<0.01),Hsp70mRNA及蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:当归红芪超滤物具有抗氧化损伤心肌细胞凋亡的作用,且可上调心肌细胞Hsp70的表达。

当归红芪超滤物对衰老大鼠脑组织氧化损伤及线粒体DNA缺失的影响

目的探讨当归红芪超滤物延缓老龄大鼠脑衰老的作用及其机制。方法选用3月龄大鼠12只作为青年组,选用24月龄大鼠36只随机分为老年组、当归红芪超滤物组、维生素E组。给予相应处理后检测各组学习记忆功能、脑指数测定,组织形态学观察,脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量测定及脑组织线粒体DNA(mt-DNA)缺失的表达。结果与青年组大鼠相比:老年组大鼠学习能力下降,脑组织形态学存在差异,脑指数存在差异(P<0.05),脑组织SOD活力明显降低,MDA含量明显升高,脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例明显增高(P<0.05);与老年组相比:用药组大鼠学习能力明显增加,脑组织形态学存在差异,脑指数无明显差异,脑组织中SOD活力显著增高,脑组织中MDA含量显著降低,脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例降低(P<0.05)。与维生素E组相比,用药组大鼠学习能力、脑指数、脑组织SOD活力、MDA含量、脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例均无显著差异(P>0.05)。结论当归红芪超滤物可能通过清除自由基,防止mt-DNA片段丢失发挥延缓老龄大鼠脑组织衰老的作用,其功效与维生素E相当。

当归红芪超滤物对重离子12C6+辐射肝癌细胞DNA损伤修复的影响

将人肝癌H22细胞分成4组,分别为对照组、药物组(100 mg/L)、辐射组(2 Gy)及联合组(100 mg/L药物+2 Gy照射),采用CCK-8法、单细胞凝胶电泳、γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术以及Western Blotting印迹法,研究当归红芪超滤物(Radix Angelicae Sinensis and Radix Hedysari, RAS-RH)对重离子12C6+辐射引起人肝癌H22细胞DNA损伤修复的影响和其可能的机制。结果表明,在0~72 h和给药剂量为5~200 mg/L范围内,RAS-RH对人肝癌H22细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其20%抑制浓度IC20为(117.6±2.15)mg/L;单细胞凝胶电泳显示联合组头部DNA含量低于辐射组,而尾部DNA含量、尾距TM、Olive尾距OTM均高于辐射组;γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术发现RAS-RH不增加重离子12C6+辐射引起的DNA损伤,但在2-12 h,DNA双链断裂的γ-H2AX foci修复作用被RAS-RH抑制,DNA损伤持续存在;Western Blotting显示RAS-RH通过下调Ku70/80及Rad51的蛋白表达,抑制γ-H2AX的聚集。以上结果说明RAS-RH对人肝癌H22细胞的辐射增敏作用可能是下调DNA损伤修复相关因子Ku70/80及Rad51的表达。

当归红芪超滤物抗辐射致心肌细胞损伤的作用及机制

目的探讨当归红芪超滤物抗辐射致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制。方法用X线照射Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立辐射损伤模型,用不同浓度的当归红芪超滤物进行干预,实验分正常对照组、辐射损伤模型组、当归红芪超滤物不同浓度(3、6、9 mg·mL-1)干预组(UFE-AH)。MTT法检测各组心肌细胞的存活率,2,4二硝基苯肼显色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性,免疫组化法观测各组细胞Bax的表达,蛋白印迹半定量测定各组细胞Bax蛋白的表达。结果与辐射损伤模型组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞存活率明显升高,LDH含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),Bax表达显著降低(P<0.05)。结论当归红芪超滤物具有拮抗辐射致心肌细胞损伤的作用,其机制与清除自由基有关。

当归红芪超滤物对放射性H9C2细胞损伤TNF-α/CTRP9信号通路相关因子表达的影响

目的观察当归红芪超滤物对放射性H9C2细胞损伤的影响,探讨其对心肌损伤的保护作用机制。方法采用大鼠灌胃方法制备药物血清。将H9C2细胞随机分为空白组、阴性对照组、模型组、盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组。药物血清干预及X线照射H9C2细胞后,ELISA检测肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)及C-反应蛋白(CRP)含量,Western blot和RT-PCR检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)的表达,免疫荧光检测转化生长因子-β(TGF-β)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与空白组比较,模型组H9C2细胞c Tn T、c TnⅠ、CRP含量明显增加,TNF-α、CTRP9蛋白和基因表达明显升高,α-SMA和TGF-β蛋白表达明显升高;与模型组比较,盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组cTnT、c TnⅠ、CRP含量明显减少,TNF-α、CTRP9蛋白和基因表达明显降低,α-SMA和TGF-β蛋白表达明显降低。结论当归红芪超滤物可通过下调TNF-α/CTRP9信号通路相关因子的表达,达到保护放射性H9C2细胞损伤的目的。

当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的:探讨当归红芪超滤物(UFE-AH)对X射线引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs损伤的保护作用,阐明其可能的机制。方法:体外培养HUVECs,采用不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy) X射线辐射,筛选出最佳辐射剂量(6 Gy);用不同浓度(0、 50、100、200、400、600、800和1 000μg·L^(-1)) UFE-AH干预HUVECs,筛选出最佳促增殖浓度(100、200和400μg·L^(-1)^(-1))。实验分为空白组、模型组(6 Gy X射线)、低剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+100μg·L^(-1)UFE-AH)、中剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+200μg·L^(-1)UFE-AH)和高剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+400μg·L^(-1)UFE-AH)。CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)、 B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (caspase-3)蛋白表达水平。结结果果:CCK-8法检测,与0 Gy比较,当辐射剂量大于2 Gy时,辐射后48和72 h X射线对HUVECs的抑制率随辐射剂量增加而升高(P<0.05或P<0.01),6 Gy及6 Gy以上辐射剂量细胞抑制率升高更明显(P<0.01)。与0μg·L^(-1)UFE-AH比较,100、200、400和600μg·L^(-1)UFE-AH作用时细胞存活率升高(P<0.05或P<0.01),且100、200和400μg·L^(-1)UFE-AH作用24、48和72 h时细胞存活率明显升高(P<0.01)。与空白组比较,模型组细胞存活率明显降低(P<0.01);与模型组比较,中和高剂量UFE-AH组细胞存活率明显升高(P<0.01)。流式细胞术检测,与空白组比较,模型组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与模型组比较,低、中和高剂量UFE-AH组细胞凋亡率均明显降低(P<0.01)。透射电子显微镜观察,空白组细胞膜完整,胞质较均匀,线粒体呈卵圆形,未见明显肿胀,胞内可见少量溶酶体;与空白组比较,模型组细胞重度肿胀,细胞膜多处破损,胞质稀松且出现多个空泡区,细胞核呈轻度不规则形,线粒体数量明显减少,呈轻度或中度肿胀,基质变浅且不均,线粒体少部分嵴局部断裂、变短,胞内可见较大量自噬溶酶体(ASS);与模型组比较,低、中和高剂量UFE-AH组细胞肿胀减轻,胞内细胞器空泡逐渐减少,线粒体肿胀减轻,数量增多,胞内可见一定量ASS,但仍未恢复正常。Western blotting法检测,与空白组比较,模型组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.01);与模型组比较,中和高剂量UFE-AH组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.01), Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显降低(P<0.01)。结论:一定剂量的UFE-AH对X射线引起的HUVECs损伤具有保护作用,其机制可能与UFE-AH影响HUVECs中PI3K、Akt、p-Akt、VEGF、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达有关。

当归红芪超滤物对miR-21-5P靶向调控TGF-β1介导放射性心肌纤维化的干预效应

目的:揭示miR-21-5P靶向调控TGF-β1是介导心肌成纤维细胞活化的关键机制,明确当归红芪超滤物对miR-21-5P靶向调控TGF-β1机制的干预效应。方法:(1)将细胞随机分为正常组、辐照组,辐照组接受6Gry单次照射,后采用RT-PCR检测miR-21-5P,Western Blot检测α-SMA、TGF-β1的表达;(2)细胞随机分为正常组、辐照组、miR-21-5P _(NC)+辐照组、miR-21-5P _(inhibitor)+辐照组,后采用RT-PCR检测miR-21-5P,Western Blot检测TGF-β1、Smad3、Smad7的表达,免疫荧光染色检测MMP-9、TIMP1表达,EDU染色检测细胞凋亡;(3)将细胞随机分为正常组、辐照组、RAS-RH+辐照组,后采用RT-PCR检测miR-21-5P,Western Blot检测TGF-β1、Smad3、Smad7的表达,免疫荧光染色检测MMP-9、TIMP1表达,EDU染色检测细胞增殖。结果:(1)辐照组miR-21-5P、α-SMA、TGF-β1的表达明显高于正常组(P<0.01),表明X线辐射可诱导心肌成纤维细胞活化,同时miR-21-5P、TGF-β1与心肌纤维化的发生密切相关;(2)miR-21-5P _(inhibitor)+辐照组中miR-21-5P、TGF-β1、Smad3、TIMP1表达明显低于辐照组、miR-21-5P_( NC)+辐照组,MMP-9、Smad7表达明显高于辐照组,EDU染色阳性率降低、细胞数目减少,表明miR-21-5P靶向调控TGF-β1是介导心肌纤维化的关键机制;(3)RAS-RH+辐照组miR-21-5P、α-SMA、TGF-β1、Smad3、TIMP1表达明显低于辐照组,MMP-9、Smad7表达明显高于辐照组,EDU染色阳性率、细胞数目略有降低,表明RAS-RH可通过抑制miR-21-5P靶向调控TGF-β1机制干预放射性心肌纤维化的发生。结论:RAS-RH可通过抑制miR-21-5P靶向调控TGF-β1的机制干预心肌纤维化的发生。

当归红芪超滤物对冠心病大鼠心肌纤维化及HIF-1α、OPN蛋白的影响

目的探讨当归红芪超滤物对高脂饮食诱导的冠心病大鼠心肌纤维化及HIF-1α、OPN蛋白的干预效应。方法将36只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、瑞舒伐他汀钙片组(0.1mg·kg^(-1)·d^(-1))、当归红芪超滤物低剂量组(0.1g·kg^(-1)·d^(-1))、当归红芪超滤物中剂量组(0.3g·kg^(-1)·d^(-1))、当归红芪超滤物高剂量组(0.5g·kg^(-1)·d^(-1))。药物干预4周后ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnI的表达水平,Masson染色法观察心肌组织纤维化变化,免疫组化法检测心肌组织TNF-α、MMP-9、TGF-β1蛋白的表达,免疫荧光检测心肌组织中HIF-1α、OPN蛋白的表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠纤维化面积及程度显著,与模型组相比,当归红芪超滤物组纤维化面积及程度减轻;与空白组相比,模型组TNF-α、MMP-9、TGF-β1蛋白表达升高,与模型组相比,当归红芪超滤物组TNF-α、MMP-9、TGF-β1蛋白表达降低;与空白组相比,模型组HIF-1α表达显著降低(P<0.01)、OPN表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,当归红芪超滤物中、高剂量组HIF-1α表达升高(P<0.05)、OPN表达降低(P<0.05)。结论当归红芪超滤物对高脂饮食诱导的冠心病大鼠心肌纤维化及HIF-1α、OPN蛋白的表达具有改善作用。

当归红芪超滤物通过调控P53表达对H9C2细胞凋亡的干预效应研究

目的:阐明P53高表达能否介导H_(9)C_(2)细胞凋亡及当归红芪超滤物(RAS-RH)能否通过调控P53表达干预H_(9)C_(2)细胞凋亡。方法:将H_(9)C_(2)细胞随机分为正常组,阴性组,模型组和RAS-RH低、中、高剂量组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖率,EDU染色检测各组H_(9)C_(2)心肌细胞的凋亡,免疫荧光检测Bax、Bcl-2的表达,鬼笔环肽染色观察细胞骨架结构,Western Blot检测P53、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达。结果:与阴性组比较,模型组H_(9)C_(2)细胞存活率显著降低(P<0.05);EDU标记的阳性细胞明显减少;Bax表达上调,Bcl-2表达下调;H_(9)C_(2)细胞微丝微管变短,排列紊乱;P53、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达均显著上调(P<0.05)。与模型组比较,RAS-RH低、中、高剂量组H_(9)C_(2)细胞存活率显著增加(P<0.05);EDU标记的阳性细胞增多;Bax表达下调,Bcl-2表达上调;H_(9)C_(2)细胞微丝微管结构排列规则,扭曲、断裂减少;P53、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:RAS-RH可通过下调P53表达抑制X线辐射诱导的H_(9)C_(2)细胞凋亡。

黄芪、红芪超滤物对高血压大鼠抗氧化及血管形态学的影响

目的:从抗氧化方向对比研究黄芪超滤物与红芪超滤物对高血压大鼠的降压作用。方法:复制盐性高血压大鼠模型,通过观测大鼠血压、血管形态学、抗氧化酶及氧化产物等指标,对比研究黄芪、红芪超滤物降压作用及作用机制。结果:1.32 g·kg-1黄芪超滤物与1.68 g·kg-1红芪超滤物能明显缓解盐性高血压大鼠胸主动脉血管壁异常增厚,抑制大鼠血压的异常上升与体重的异常下降,提高血清超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶的活性,降低丙二醛的含量(P<0.05,0.01)。结论:黄芪超滤物与红芪超滤物具有一定的降血压作用且二者的作用无明显差异,提高抗氧化能力、缓解血管壁重构是其降压机制之一。

黄芪与红芪超滤物对血瘀合并短暂性脑缺血大鼠血液流变性及相关调节因子的作用

目的对比研究黄芪与红芪超滤物对血瘀合并短暂性脑缺血大鼠脑组织病理学、血液流变学及相关调节因子的作用。方法采用注射地塞米松12 d后结扎双侧颈总动脉来复制血瘀性脑缺血大鼠模型,通过观测血液黏度、血管活性物质的含量及脑组织病理学,对比研究黄芪与红芪超滤物抗脑缺血作用及其作用机制。结果 1.32 g·kg-1黄芪超滤物、1.68 g·kg-1红芪超滤物可明显降低血瘀性脑缺血大鼠的全血黏度、血清一氧化氮、一氧化氮合成酶及内皮素的含量,能显著提高降钙素基因相关肽的含量,改善缺血脑组织病理学(P<0.05或0.01)。结论黄芪与红芪超滤物具有明显的抗脑缺血作用,二者的作用未见明显差异,改善血液流变性与血流动力学相关调节因子可能是其抗脑缺血机制。

当归红芪超滤物对氧化损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的探讨当归红芪超滤物对H2O2致乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法用高浓度的H2O2(400μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立氧化损伤模型,用不同质量浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15mg/mL)进行干预。在倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞的搏动频率,用MTT法检测心肌细胞的存活率,用试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的量。RT-PCR技术检测caspase-3、hsp70基因在心肌细胞中的表达情况。结果当归红芪超滤物显著提高氧化损伤心肌细胞的细胞活力;与损伤组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞LDH、CK、MPO、MDA量显著降低(P<0.01),SOD活性显著提高(P<0.01),caspase-3基因表达显著降低(P<0.05),hsp70基因表达显著提高(P<0.05),差异具有统计学意义;并且当归红芪超滤物的抗氧化损伤作用呈剂量依赖性。结论当归红芪超滤物具有良好的抗氧化损伤作用,其机制可能与清除自由基、上调hsp70表达、抑制caspase-3活性有关。