当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞凋亡的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法 H2O2诱导PC12细胞凋亡,构建氧化损伤神经细胞凋亡模型。实验分为正常对照组、模型组及中药低、中、高剂量组,中药各组给予不同剂量当归红芪超滤膜提取物。流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,中药各剂量组细胞凋亡率明显降低,线粒体膜电位升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达均减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物具有抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡的作用。

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞氧化损伤的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞氧化损伤的影响。方法 H2O2诱导PC12细胞构建氧化应激损伤模型;不同剂量当归红芪超滤膜提取物(0.38、0.75、1.5 g/L)干预;MTT法测定细胞存活率;生化法检测细胞内MDA、LDH、SOD含量;双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色,检测细胞内ROS含量。结果 200μmol/L H2O2作用6 h成功诱导PC12细胞氧化应激损伤;与空白对照组比较,H2O2模型组细胞存活率下降,细胞内LDH、MDA、ROS含量增多,SOD含量下降(P<0.05);与H2O2模型组相比,当归红芪超滤膜提取物各剂量组细胞存活率明显上升,细胞内LDH、MDA、ROS含量降低,SOD含量增加(P<0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物可修复H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤。

当归红芪超滤膜提取物抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达

目的探讨当归红芪超滤膜提取物对心肌细胞凋亡相关基因bc l-2、bax蛋白表达的影响。方法用高浓度的过氧化氢(400μmol/L)在W istar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立细胞凋亡模型,用不同浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 g/L)进行治疗。光镜下观察细胞形态;逆转录-多聚酶链反应和蛋白印迹法检测bc l-2、bax蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果与正常对照组相比,高浓度过氧化氢损伤组bc l-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);bax mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);bc l-2/bax比值显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义。与损伤组比较,高浓度和中浓度药物治疗组bc l-2 mRNA及其蛋白表达显著增加(P<0.05);bax mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05);bc l-2/bax比值显著增加(P<0.01),差异具有统计学意义。低浓度药物治疗组则对bc l-2、bax表达无显著改变。结论当归红芪超滤膜提取物可通过上调bc l-2/bax的比值抑制心肌细胞的凋亡,对心肌细胞具有抗凋亡的保护作用。

当归、红芪超滤膜提取物联合医用直线加速器抑制SMMC-7721细胞生长实验研究

目的:探讨当归、红芪超滤膜提取物联合直线加速器抑制SMMC-7721细胞生长的作用。方法:通过检测Caspase-3活性,观察当归、红芪超滤膜提取物联合直线加速器对SMMC-7721细胞凋亡的影响。利用透射电子显微镜观察SMMC-7721细胞的凋亡形态。结果:通过吸光度检测Caspase-3活性发现,在加药组(6mg/mL)和单纯照射组与正常SMMC-7721细胞中表达的caspase-3蛋白浓度分别为38.07μg/μL、35.24μg/μL和33.25μg/μL,之间无明显差异(P>0.05)。而照射+药组(2mg/mL)、照射+药组(4mg/mL)、照射+药组(8mg/mL)中的表达的caspase-3蛋白浓度分别为39.74μg/μL、40.67μg/μL、40.95μg/μL,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),而他们之间比较没有统计学意义。照射+药组(6mg/mL)中的表达的caspase-3蛋白浓度为60.01μg/μL,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01),具有剂量依赖性。透射电子显微镜观察细胞凋亡形态也支持以上结果。结论:当归、红芪超滤膜提取物联合直线加速器均能抑制SMMC-7721细胞的增殖和诱导细胞凋亡,两种方法联合后作用加强,提示当归、红芪超滤膜提取物联合直线加速器应用治疗肝癌可能会起到协同增效的作用。

当归红芪超滤膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的观察并评价当归红芪超滤膜提取物(简称中药合剂)诱导小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived stroma cells,BMSCs)分化为神经样细胞的效果。方法体外培养小鼠BMSCs后加入药物并分为5组:空白组、6g/L中药合剂组(简称低剂量组)、12g/L中药合剂组(简称高剂量组)及3g/L中药合剂联合0.5mmol/Lβ-巯基乙醇用药组(简称联合组)、β-巯基乙醇阳性对照组(简称对照组)。通过甲苯胺蓝染色观察各组诱导分化为神经样细胞的效果,应用免疫组织化学及免疫荧光技术检测分化后细胞所表达的神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)、微管结合蛋白2(microtubule-associated protein-2,MAP2)及神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)5种神经特异性蛋白的差异,并应用流式细胞分析技术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞生长周期的变化。结果诱导后细胞形态发生神经样细胞改变,两个中药合剂组的形态特征性均弱于联合组和对照组;除空白组外,上述5种蛋白在各组的表达为阳性,表达程度均为对照组最高(P<0.05),联合组次之(P<0.05);经流式细胞术检测细胞增殖率比较:对照组最低(P<0.05),高、低剂量组较高(P<0.05),联合组次之(P<0.05)。结论中药合剂可较为有效地诱导小鼠BMSCs分化为神经样细胞,诱导能力虽弱于对照组,但对于分化后细胞的增殖作用明显。联合组可有效诱导BMSCs分化为神经样细胞并使细胞有较高的增殖能力,可能是用于临床研究目前较为理想的用药途径。

当归红芪超滤膜提取物调控肾脏缺氧介导的HIF⁃1α信号通路改善DKD大鼠肾脏纤维化的机制

通过当归红芪超滤膜提取物干预糖尿病肾病(diabetic kidneydisease,DKD)模型大鼠,观察DKD大鼠肾脏缺氧介导的缺氧诱导因子⁃1α(hypoxia inducible factor⁃1α,HIF⁃1α)/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和HIF⁃1α/血小板源性生长因子(platelet⁃derived growth factor,PDGF)/血小板源性生长因子受体(platelet derived growth factor receptor,PDGFR)信号通路的表达,探讨当归红芪超滤膜提取物改善DKD大鼠肾脏纤维化的作用机制。将50只SPF级雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后,随机分为空白组7只及造模组,造模组禁食24 h后一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)联合高糖高脂饲料喂养制备DKD模型,造模成功后,将造模组随机分为模型组,当归红芪超滤膜提取物低、中剂量组,各7只,厄贝沙坦组和当归红芪超滤膜提取物高剂量组各8只。给予药物干预12周,观察大鼠一般情况,每周检测大鼠的体质量及血糖,于灌胃第6、12周检测大鼠24 h尿蛋白(urinary protein,UP);末次给药后,检测大鼠肾功能相关指标;Masson染色观察肾组织病理变化;免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测肾组织脯胺酰羟化酶2(prolyl hydroxylase domain 2,PHD2)、HIF⁃1α蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real⁃time qPCR)检测肾组织PHD2、VEGF、PDGF、PDGFR mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织HIF⁃1α、VEGF、PDGF、PDGFR蛋白的表达。结果显示,与模型组比较,各给药组大鼠血清中糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平不同程度降低(P<0.05或P<0.01),呈剂量相关性;大鼠肾脏病理明显改善;大鼠肾脏中PHD2 mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01),VEGF、PDGF、PDGFR mRNA表达显著下调(P<0.05或P<0.01);大鼠肾脏中HIF⁃1α、VEGF、PDGF、PDGFR蛋白表达水平显著降低(P<0.01);PHD2阳性细胞率表达上升(P<0.01)。综上,当归红芪超滤膜提取物能改善DKD大鼠肾脏纤维化,其机制与抑制肾脏缺氧介导的HIF⁃1α信号通路上关键蛋白的表达并减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积有关。

当归红芪超滤膜提取物对阿霉素致心肌细胞凋亡的影响

目的:研究当归红芪超滤膜提取物(UFE-AH)对阿霉素所致心肌细胞凋亡的影响。方法:取新生1～2 d的Wistar乳鼠,用差速贴壁法原代提取心肌细胞,调整细胞密度1×106/mL,于37℃5%CO2培养箱中密闭培养48 h。用2.5 mg.L-1阿霉素作用于心肌细胞24 h成功建立心肌细胞凋亡模型。实验分5组:正常对照组、阿霉素组(2.5 mg.L-1)、UFE-AH低、中、高剂量干预组(阿霉素造模前2 h预先分别给予3.75,7.5,15 g.L-1当归红芪超滤膜提取物)。四氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞生长抑制率,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,Western blot(蛋白印迹法)检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与正常组相比,阿霉素组心肌细胞生长抑制率明显增加,且头部DNA含量占总含量的百分数(HDNA%),尾部DNA含量占总含量的百分数(TDNA%),尾长(TL),尾短(TM),尾距(OTM)均明显升高,Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax表达水平升高,均有统计学意义(P<0.01);UFE-AH干预组的心肌细胞生长抑制率明显降低,且HDNA%,TDNA%,TL,TM,OTM数值均降低,Bcl-2蛋白表达水平上调,Bax表达水平下调,有显著性差异(P<0.01)。结论:UFE-AH可减轻阿霉素对心肌细胞DNA的损伤,上调Bcl-2/Bax而抑制心肌细胞的凋亡,具有抗心肌细胞凋亡的保护作用。