红花提取物通过调节PI3K/Akt/FoxO信号通路改善酒精性肝病

目的探讨红花提取物(Carthamus tinctorius L.extract,CTLE)对酒精诱导的肝损伤小鼠氧化应激、脂质代谢和凋亡水平的影响及其作用机制。方法采用慢性酒精喂养加急性酒精灌胃的酒精性肝病小鼠模型造模。小鼠被随机分为4组,造模期间每天观察小鼠状态变化并记录体质量。造模结束后,收集各组小鼠血液和肝脏组织。对小鼠血液进行生化分析。HE染色和油红O染色进一步评价小鼠肝脏病理损伤程度。应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blot法检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、p-FoxO1、FoxO1、p-FoxO3a、FoxO3a、p-FoxO4、FoxO4、BCL-2和BAX因子的mRNA和蛋白表达水平。结果与模型组相比,CTLE给药组小鼠肝脏病理损伤程度和脂质沉积有所改善;小鼠血清及肝脏中的生化相关指标,如ALT、AST、TG、TC、MDA水平有所降低,GSH、SOD水平有所升高。并且通过调控PI3K/Akt/FoxO通路产生了更多的SOD,减少了活性氧(reactive oxygen species,ROS)对机体的损伤和细胞凋亡。结论CTLE可以通过PI3K/Akt/FoxO通路发挥抗氧化应激和抗凋亡作用,减轻小鼠的酒精性肝损伤,为治疗酒精性肝病和开发相关药物提供新的思路。

藏红花水提取物通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响人卵巢癌细胞HO-8910增殖

目的:探讨藏红花水提取物调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达对人卵巢癌细胞HO-8910增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:以人卵巢癌细胞HO-8910为研究对象,给予不同浓度(0、0.4、0.8、1.0 mg/L)藏红花水提取物进行培养,MTT法检测细胞HO-8910的增殖活力;流式细胞术观察细胞HO-8910的凋亡率;划痕法检测细胞HO-8910的迁移情况;Transwell法检测细胞HO-8910的侵袭情况;Western blot法检测细胞HO-8910的ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力受藏红花水提取物的影响,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力减弱;而人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率则相反,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率逐渐增加;受藏红花水提取物影响,人卵巢癌细胞HO-8910中ERK、Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加,且藏红花水提取物剂量越高,ERK、Bcl-2蛋白表达越低,Bax蛋白表达越高。结论:藏红花水提取物能够降低卵巢癌细胞的增殖活力、迁移能力及侵袭能力,并诱导卵巢癌细胞凋亡,这可能是通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达来实现的。

阿替普酶联合红花提取物调节TLR4-NLRP3信号通路对大鼠急性脑梗塞的影响

目的:研究阿替普酶静脉溶栓联合红花提取物对急性脑梗塞的改善作用及潜在机制。方法:30只SD大鼠,随机选取6只作为假手术组,其余大鼠均构建急性脑梗塞模型。模型构建成功后,随机将造模大鼠分为模型组、阿替普酶组(尾静脉注射阿替普酶5mg/kg)、红花提取物组(尾静脉注射4g/kg)、阿替普酶联合红花提取物组,每组6只。各给药组大鼠给予相应干预,假手术组和模型组大鼠注射等体积的无菌0.9%氯化钠溶液,连续7d。通过Zea Longa进行神经功能缺损评分;TTC染色评价梗死面积;HE染色观察组织病理变化;伊文思蓝(Evans blue)含量测定;TUNEL法检测各组细胞凋亡;qRT-PCR检测脑组织TLR4、NF-κB p65、NLRP3 mRNA表达;Western blotting分析脑组织MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NLRP3、caspase1、pro-IL-1β蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组Zea Longa评分显著升高,梗死面积显著增加,EB含量、细胞凋亡率、MMP-2、MMP-9、Bax、TLR4、NF-κB p65、NLRP3、p-NF-κB p65、caspase1、pro-IL-1β蛋白表达及TLR4、NF-κB p65、NLRP3 mRNA表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,阿替普酶联合红花提取物组能显著降低Zea Longa评分及梗死面积,EB含量、细胞凋亡率、MMP-2、MMP-9、Bax、TLR4、NF-κB p65、NLRP3、p-NF-κB p65、caspase1、pro-IL-1β蛋白表达及TLR4、NF-κB p65、NLRP3 mRNA表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:阿替普酶静脉溶栓联合红花提取物对急性脑梗塞大鼠具有保护作用,其通过抑制TLR4-NLRP3信号通路及减少细胞凋亡,从而改善急性脑梗塞受损的神经功能,是潜在疗法。

红花提取物对柯萨奇病毒感染心肌微血管内皮细胞的保护作用

目的探讨柯萨奇病毒B3(coxsackie virus B3,CVB3)对心肌微血管内皮细胞(cardiac myocardial mi-crovascular endothelial cell,CMEC)的感染途径及红花提取物(主要有效成分为红花黄色素B,Safflower Yellow B,SYB)是否通过该途径对感染过程起到保护作用。方法将CMEC分为四组,分别为CVB3组、SYB组、CVB3+SYB组、对照组,采用TCID50浓度为10^(-6.285)/mL的病毒液对CVB3组及CVB3+SYB组的细胞进行干预,采用100 nmol/L的SYB对SYB组及CVB3+SYB组的细胞进行干预,分别在0 min、20 min、40 min、60 min提取细胞总蛋白和RNA,采用WB及RT-PCR方法测定每组细胞中Toll-样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)及核转录因子-B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达,进行统计学分析。结果与对照组相比,CVB3组细胞中TLR4、MyD88及NF-κB的蛋白表达量在40 min、60 min存在差异,mRNA的表达量在20 min、40 min、60 min时存在差异;与对照组相比,SYB组细胞中TLR4、MyD88及NF-κB在各时间段的蛋白表达量以及mRNA表达量均无差异;与CVB3组对比,SYB+CVB3组细胞中TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达量在40 min与60 min时存在差异,mRNA表达量在20 min、40 min、60 min时存在差异。结论CVB3通过TLR4/NF-κB通路损伤CMEC,TLR4/NF-κB通路是CVB3导致VMC的信号通路,而SYB可通过该通路对CVB3感染后CMEC起到一定的保护作用。

人参和红花提取物配伍对心肌缺血犬心脏血流动力学的影响

目的:探讨人参和红花标准提取物配伍对心肌缺血犬心脏血流动力学的影响,为益气活血中药理论的诠释提供实验依据。方法:犬冠状动脉结扎造成急性心肌缺血模型,十二指肠分别给予质量标化的人参、红花提取物和二者配伍的混合物,观察心肌缺血犬心脏血流动力学的改变。结果:人参与红花提取物配伍可明显增加模型动物的冠脉血流量和心输出量,增加左室内压最大上升速率,降低左室舒张末压、冠脉阻力和总外周阻力。结论:益气药和活血药配对应用具有一定的协同增效作用,但有必要开展进一步的研究。

栀子提取物京尼平苷和西红花苷利胆作用的研究

采用测定大鼠胆汁分泌量的实验方法，观察栀子提取物京尼平苷和西红花苷十二指肠给药后的利胆作用。结果显示西红花苷５０和 １００ ｍｇ／ｋｇ剂量均不增加大鼠的胆汁流量，而京尼平苷５０和 １００ ｍｇ／ｋｇ剂量均可显著增加大鼠胆汁流量，降低胆汁内胆固醇含量，增加胆汁内 ＨＣＯ_３~－浓度．但对胆汁酸，胆红素，［Ｃａ^(２＋)］含量无显著影响。表明西红花苷没有利胆作用，而京尼平苷是栀子利胆的有效成分，它能改变胆汁成分，可能对阻止胆固醇结石的形成有一定的作用。

杜仲叶绿原酸提取物联合西红花苷对肝癌细胞胆固醇代谢的影响

目的观察杜仲叶绿原酸提取物(CAEF)联合西红花苷对人肝癌细胞Hep G2胆固醇代谢的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将人肝癌细胞Hep G2随机分为空白对照组、油酸诱导组、辛伐他汀组、CAEF组、联合用药组。油酸诱导组、辛伐他汀组、CAEF组、联合用药组分别加入油酸诱导脂肪变性模型;同时,辛伐他汀组加入10μmol/L的辛伐他汀10μL,CAEF组加入25 mg/L的CAEF 10μL,联合用药组加入含1μmol/L西红花苷、30μmol/L绿原酸、10μmol/L京尼平苷、10μmol/L槲皮素的混合液10μL;空白对照组仅加入等体积培养基。取各组干预48 h细胞,行油红O染色,检测细胞内中性脂滴含量。取干预24、48 h细胞上清液,检测TC、TG含量。采用RT-PCR法检测胆固醇代谢相关基因(ABCA1、SREBP2、CYP7A1、LXRα、AMPK2α、HMGCR)表达,免疫细胞化学法和Western blotting法检测HMGCR蛋白表达。结果辛伐他汀组、CAEF组、联合用药组干预48 h,细胞内中性脂滴含量明显降低,其作用强度依次为联合用药组>CAEF组>辛伐他汀组(P均<0.05);与对照组比较,CAEF组、联合用药组干预24、48 h时细胞外液TC、TG含量明显增加,细胞外液TC、TG含量依次为联合用药组>CAEF组>辛伐他汀组(P均<0.05)。CAEF组、联合用药组ABCA1、CYP7A1、AMPK2αmRNA表达明显升高,SREBP2、HMGCR mRNA表达明显降低(P均<0.05);此外,联合用药组LXRαmRNA表达明显降低(P<0.05)。辛伐他汀组、CAEF组、联合用药组HMGCR蛋白表达明显降低,以联合用药组降低最明显(P均<0.05)。结论 CAEF联合西红花苷可协同抑制肝癌细胞脂质积聚,其作用机制可能与调控肝癌细胞胆固醇代谢相关基因和蛋白的表达有关。

黄芪提取物与红花总黄酮配伍对急性血瘀大鼠血液流变学的改善作用

目的观察黄芪提取物(EAM)与红花总黄酮(ECT)配伍对急性血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响。方法大鼠随机分为正常对照、急性血瘀模型、阳性对照阿司匹林100 mg·kg-1,EAM400 mg·kg-1,ECT 200 mg·kg-1,EAM 400 mg·kg-1+ECT 200 mg·kg-1组。每天早晚各给药1次,共7次。第5次给药后,大鼠sc给予肾上腺素加冰浴制备急性血瘀模型。锥板法测定全血黏度和血浆黏度;微量毛细管法测定血细胞比容(Hct);光电比浊法测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集;光电电磁法测定凝血参数。结果与正常对照组相比,模型组大鼠全血黏度和血浆黏度升高,红细胞聚集指数和血小板最大聚集率显著增加,Hct显著升高,纤维蛋白原(Fib)含量显著增加,凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)均显著缩短(P<0.01)。与模型组相比,单独应用EAM和ECT均能显著降低全血黏度及血浆黏度,明显降低Hct、红细胞聚集指数和血小板最大聚集率,其中EAM还能显著降低Fib含量,延长APTT和TT;ECT还能显著延长PT。与单独应用EAM或ECT相比,EAM与ECT配伍能进一步改善血液流变学指标,在延长TT上优于单用ECT(P<0.05),对血小板最大聚集率的抑制作用优于单用EAM或ECT(P<0.05)。与阿司匹林相比,单用EAM或ECT抑制血小板聚集的作用不及阿司匹林,但EAM降低Fib的作用较好,ECT延长PT的作用较好;EAM与ECT配伍对血液流变学的改善作用与阿司匹林相似。结论 EAM和ECT单用能显著改善血瘀模型大鼠血液流变学指数,且二者配伍后能增强对血瘀模型大鼠血液流变学的改善作用。

红花水提取物的安全性研究

目的 研究红花水提取物的毒性大小。方法 用红花水煎液进行了急性毒性、小鼠骨髓微核、TK基因突变、体外细胞毒性和Ames试验。结果 红花的LD50 >88 8g/kgBW ,属无毒物 ,对CHO和CHL的IC50 分别为 6 0 7mg/ml和 6 6 5mg/ml(生药终浓度 ) ,遗传毒性试验结果均为阴性 ,2 2 2 0mg/皿剂量的红花对TA98、TA10 0和TA10 2均有明显抑制细菌生长的作用。结论 红花水提取物对正常细胞有一定的毒性 ,但有抑制细菌生长的作用 。

丹参红花提取物对鼠心脏成纤维细胞胶原合成的影响

目的:探讨丹参红花提取物(DCE)对血管升压素(AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞(CF)胶原合成作用的影响,为应用中成药防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法:运用3H-脯氨酸掺入法分别观察不同浓度和不同时间DCE对AVP诱导CF胶原合成的影响。结果:CF的3H-脯氨酸掺入率随着DCE干预浓度的增加而降低,其中100mg/L和200mg/LDCE组的3H-脯氨酸掺入率明显低于空白对照组,并具有统计学意义(P<0.01);随着DCE作用时间的延长,CF的3H-脯氨酸掺入率呈递减趋势,CF胶原合成功能与DCE作用时间呈明显的负相关。结论:DCE能够呈浓度和时间依赖性抑制AVP诱导的CF胶原合成功能,防治高血压心肌纤维化。

红花提取物预处理对缺血再灌注心肌的影响

目的:观察红花提取物预处理对心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:采用离体心脏Langendorff装置,观测经红花提取物预处理后心功能指标和冠脉流量的改变;同时采用在体心脏结扎左冠状动脉前降支制备心肌缺血再灌注模型,在心肌缺血前各组心脏分别用红花提取物或维拉帕米治疗,并贯穿于实验全过程中。缺血再灌注组实施20分钟缺血和40分钟再灌注。分别检测心肌组织中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和心肌激酶(CK)活性、心率等变化。结果:红花提取物能减少缺血再灌注心肌中的MDA含量,降低SOD和CK活性,减慢心率,改善心功能指标。结论:红花提取物能改善心功能,保护缺血心肌,其机制可能与其清除自由基,抑制自由基的释放有关。

丹参红花提取物干预对急性心肌梗死后心室重构的影响

目的探讨丹参红花提取物干预对急性心肌梗死后心室重构的影响。方法选择ST段抬高型急性心肌梗死患者90例,随机分为丹参红花提取物组和对照组各45例,两组均在发病后6小时内行急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI),两组在手术前、后给予抗血小板聚集、抗凝、调脂、β受体阻断剂及血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)等常规药物治疗;丹参红花提取物组在常规药物治疗的基础上,于PCI术当天加用丹参红花提取物治疗。结果治疗24周末,丹参红花提取物组左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)较对照组相比明显降低(P<0.01),左心室射血分数(LVEF)较对照组明显升高(P<0.01),未发生严重不良事件。结论丹参红花提取物可以干预心肌梗死后的心室重构,其机制可能是通过一种复杂的多因素参与的调节机制综合获得。

基于聚类和主成分分析的红花抗肝纤维化提取物特征图谱研究

目的利用高效液相色谱技术和数理统计分析方法建立一种红花药材的鉴别和质量控制方法。方法采用高效液相色谱法,用安捷伦C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为梯度洗脱相;流速为1 m L/min,柱温为30℃,检测波长为280 nm。检测了16批不同来源的红花样品具有抗肝纤维化作用的提取物,通过相似度分析建立了红花提取物的高效液相色谱特征图谱。对不同产地的红花提取物特征图谱进行聚类分析和主成分分析,并用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》对其质量进行评价。结果本研究建立了16批红花药材提取物的指纹图谱共有模式,确定了32个共有色谱峰。结论本方法稳定性、重现性好,所建立的红花抗肝纤维化提取物的特征图谱特征性和专属性强,可以用于高质量红花药材的鉴别和质量控制。

红花寄生叶3种溶剂提取物清除自由基活性

采用4种方法测定了红花寄生(寄主桑树)叶的水、80%甲醇和80%丙酮提取物对自由基的清除活性,以芦丁和BHT为对照品。结果表明,3种提取物均具有较强的自由基清除能力,且表现出不同程度的量效依赖关系;在3种溶剂提取物中,80%甲醇提取物清除.OH和O2-.活性最强,半清除率浓度ρ(SC50)分别为0.212、0.139 mg/mL,而80%丙酮提取物则清除DPPH.和ABTS.+活性最强,ρ(SC50)分别为0.198、0.580 mg/mL。此外,3种溶剂提取物经酸水解后,HPLC均检出槲皮素和山奈酚等2种黄酮醇苷元,其含量范围分别为39.90～73.03 mg/g、4.82～9.19 mg/g间。可见,槲皮素及其苷类衍生物是红花寄生清除自由基活性的主要作用成分。

红花提取物对急性心肌梗死犬血清微量元素和心肌形态学的影响

目的观察红花提取物对急性心肌梗死犬血清微量元素和形态学的影响。方法取杂种犬24只,随机分为4组,每组6只,分别为模型组、阳性药物对照组(地奥心血康胶囊,52.0 mg/kg)、及红花提取物低剂量组(5.5 mg/kg)、红花提取物高剂量组(11.0 mg/kg)。结扎犬左冠状动脉前降支,制备急性心肌梗死模型,观察红花提取物对血清微量元素(Cu2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+)含量的影响;通过HE染色,观察心肌细胞形态学的变化。结果与模型组比较,红花提取物各剂量组血清微量元素Cu2+含量降低(P<0.05),Zn2+、Ca2+、Mg2+含量增加(P<0.05,P<0.01),缺血心肌细胞的病理形态学损伤程度减轻。结论红花提取物对实验性心肌梗死犬的心肌具有明显的保护作用。

红花提取物对高糖处理的小鼠足细胞损伤的影响

目的:探讨红花提取物对高糖处理的小鼠足细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响及分子机制。方法:将小鼠足细胞MPC5分为对照(NC)组、高糖(HG)组、不同浓度红花提取物组、红花提取物+HG组、miR-NC+HG组、miR-516a-5p+HG组、anti-miR-NC+HG组、anti-miR-516a-5p+HG组、红花提取物+miR-NC+HG组、红花提取物+miR-516a-5p+HG组。MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-516a-5p表达水平;ELISA检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:红花提取物处理后,高糖处理的小鼠足细胞中细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低,miR-516a-5p表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-516a-5p促进高糖处理的小鼠足细胞炎症因子表达和细胞凋亡,抑制细胞增殖;抑制miR-516a-5p表达与其作用相反。miR-516a-5p过表达可以逆转红花提取物对高糖处理的MPC5细胞增殖、凋亡,炎症因子表达的影响。结论:红花提取物可能通过下调miR-516a-5p表达抑制高糖处理的小鼠足细胞炎症因子表达和细胞凋亡,促进细胞增殖。

番红花小球茎乙醇提取物抗真菌活性分析

[目的]番红花富含多种天然活性成分,有关番红花的研究目前大多集中在药用部位柱头上,对非药用部位包括不能当作种栽的小球茎的研究鲜有报道。本实验以番红花小球茎(<8 g)为研究对象,开展番红花球茎乙醇提取物抗真菌活性研究,以提升番红花非药用部位资源的综合利用水平。[方法]以6种常见的食源性真菌(酿酒酵母、黑曲霉、桔青霉、黑根霉、米曲霉和绿色木霉)为供试菌种,测定其最小抑菌浓度和最低杀菌浓度,明确小球茎乙醇提取物的抑菌效果,并利用液液萃取和硅胶柱层析分离法对抑菌有效组分进行初步分离。[结果]番红花小球茎乙醇提取物对黑根霉和黑曲霉具有显著抑制作用,其EC_(50)分别为0.3513和0.4412 mg·mL^(-1),且随着提取物浓度的增高,其抑菌作用增强;此乙醇粗提物经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取分离,发现乙酸乙酯萃取组分对黑曲霉和黑根霉的抑制效果最好,其抑菌率分别达到了89.13%和74.36%,且该萃取组分经硅胶柱层析分离可得到9个分级产物,其中F6对黑曲霉和黑根霉的抑制效果最好,分别达到了90.95%和93.83%,说明F6为番红花小球茎乙醇提取物的最佳有效抑菌组分。[结论]番红花小球茎乙醇提取物抗真菌活性分析及有效抑菌组分的分离,为番红花小球茎抑菌活性成分的纯化研究奠定基础,也为番红花全资源利用及其在食品天然防腐剂领域的应用提供科学指导和借鉴作用。

红花提取物的诱变性研究

近年来,国内外研究发现,某些中草药有诱变、致畸作用,对人类健康有潜在危害。红花(Flos Carthami)是常用的理血药,有报道红花对E.Coli ND-160菌株有致突变性。为进一步探讨红花的诱变性,本文采用微核试验法对红花水提取物及乙醚提取物进行了研究。

红花桑寄生叶提取物的抗氧化活性及酚类物质分析

采用DPPH法、TEAC法、FRAP法对红花桑寄生叶不同溶剂提取物的抗氧化活性进行体外评价,并测定其总酚、总黄酮含量。结果表明,溶剂种类对红花桑寄生叶提取物的得率、总酚、总黄酮及抗氧化活性影响显著。在3种评价方法中,不同溶剂提取物的抗氧化活性均表现出不同程度的量效依赖关系。3种溶剂提取物的抗氧化活性强弱依次为丙酮提取物>甲醇提取物>水提取物,其中80%丙酮提取物(总酚含量最高,达276.83mg/g)抗氧化活性最强,清除DPPH自由基能力EC50值为0.247,FRAP值(FeSO4mmol/100g)为115.81,浓度为1.0mg/ml时,TEAC值为2.04。