红花水煎液干预硬皮病小鼠的血清代谢组学研究

目的 基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)技术探讨红花水煎液对硬皮病小鼠血清代谢组的影响,旨在寻找血清中的内源性差异代谢物及其相关代谢通路,以阐释红花水煎液治疗硬皮病的作用机制。方法 将雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、红花水煎液组,每组8只。除对照组外,其余2组均皮下注射200μg·mL^(-1)博来霉素0.1 mL,每天1次,连续28 d,复制硬皮病小鼠模型。造模同时进行药物干预,红花水煎液组给予1.5 g·kg^(-1)红花水煎液灌胃,每日1次,连续28 d。观察各组小鼠的一般情况;采用Sirius Red染色法观察皮肤、肺组织病理变化;免疫组化法测定皮肤、肺组织中结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达;ELISA法检测血清及皮肤组织中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平;应用UPLC-Q-TOF/MS技术进行血清样品的分离和数据采集,通过主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法分析红花水煎液对内源性差异代谢物的影响,并通过MetaboAnalyst 3.0数据库分析其代谢通路。结果 (1)与对照组比较,模型组小鼠出现精神状态沉郁纳呆,嗜睡,攻击性弱,背部皮肤变硬增厚、有结痂;小鼠皮肤成纤维细胞及胶原纤维明显增加,肺组织胶原纤维明显增多,出现弥漫性肺纤维化病变;小鼠皮肤及肺组织中CTGF表达量显著升高(P<0.01);皮肤及血清中Ang Ⅱ的表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,红花水煎液组小鼠饮食量增加,动作灵敏且攻击性变强,背毛不同程度生长、有光泽,总体状态好转;小鼠皮肤及肺组织成纤维细胞及胶原纤维减少,纤维束变细,组织形态趋于正常;小鼠皮肤及肺组织中CTGF表达量显著降低(P<0.01);皮肤及血清中的Ang Ⅱ含量显著下降(P<0.01)。(2)在正、负离子模式下共筛选鉴定出13种与硬皮病密切相关的潜在生物标志物。与对照组比较,模型组小鼠血清中胆碱、L-左旋肉碱、白三烯A4、维甲酸含量明显升高(P<0.05,P<0.001),L-缬氨酸、牛磺酸、苯乙酰甘氨酸、柠檬酸、棕榈酰-L-肉碱、亮氨酸、L-苯丙氨酸的含量均明显降低(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,红花水煎液组小鼠血清中牛磺酸、胆碱、丙酰肉碱、棕榈酰-L-肉碱、L-左旋肉碱、L-酪氨酸、白三烯A4、亮氨酸、苯乙酰甘氨酸、柠檬酸含量明显回调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。13个潜在生物标志物共涉及11条代谢通路,其中7条与硬皮病密切相关。结论 红花水煎液对硬皮病小鼠的治疗作用可能与其改善血清中内源性差异代谢物的水平,调节氨基酸代谢、能量代谢等有关通路密切相关。

红花水煎液对博莱霉素诱导的硬皮病小鼠肺组织胶原含量的影响

目的:观察红花水煎液对博莱霉素诱导的硬皮病小鼠肺组织的HE和MASSON染色病理变化及MASSON染色胶原含量分布变化,探讨红花对硬皮病肺纤维化的影响。方法:将32只BALB/C小鼠随机分为4组:空白对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、红花组,每组8只。除空白对照组外,各组建立硬皮病小鼠模型。醋酸泼尼松组予醋酸泼尼松混悬液0.2 m L灌胃,红花组予红花水煎液0.2 m L灌胃,空白对照组和模型对照组予同体积生理盐水灌胃。采用HE和MASSON染色观察各组小鼠肺的病理改变,使用IPP 6.0图像分析软件测定MASSON染色胶原含量分布变化,SPSS 17.0软件进行统计分析。结果:与空白对照组比较,模型对照组小鼠肺组织胶原含量显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,醋酸泼尼松组和红花组小鼠肺组织胶原含量明显降低(P<0.05);醋酸泼尼松组与红花组胶原含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红花能够有效降低博莱霉素诱导的硬皮病小鼠肺组织胶原含量,具有抗硬皮病肺纤维化的作用。

红花对系统性硬化症小鼠皮肤及肺组织IL-33、ST2的影响

目的:观察红花对博来霉素(BLM)诱导的系统性硬化症(SSc)小鼠皮肤和肺组织IL-33、ST2表达水平的影响,探究红花减轻SSc小鼠皮肤及肺组织纤维化的作用机制。方法:将32只BALB/C小鼠随机分为醋酸泼尼松组、红花水煎液组、模型组、对照组,每组8只。除对照组外,其他各组小鼠背部皮下注射BLM诱导建立SSc小鼠模型,0.1 ml/次,1次/d,连续28 d;造模期间,醋酸泼尼松组小鼠灌胃浓度为0.45 g/ml的醋酸泼尼松溶液0.2 ml/次,1次/d,连续28 d;红花水煎液组小鼠灌胃浓度为0.15 g/ml的红花水煎液0.2 ml/次,1次/d,连续28 d;对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水0.2 ml/次,1次/d,连续28 d。给药期间观察各组小鼠一般生存状态及皮肤硬化情况,给药结束后禁食12 h,予腹腔注射2%戊巴比妥钠过量麻醉处死小鼠后取材。小鼠皮肤和肺组织切片脱蜡后行HE、Masson染色,根据皮肤HE玻片白细胞计数评定皮肤炎症水平,根据皮肤Masson染色胶原容积分数(CVF)评估皮肤的纤维化程度;分别采用Szapiel、Ashcroft评分系统评价小鼠肺部炎症水平及纤维化水平;免疫组织化学法(IHC)检测小鼠皮肤和肺组织的IL-33、ST2表达。结果:(1)与模型组小鼠比较,红花水煎液组和醋酸泼尼松组小鼠的精神状态、体质量、反应水平、背部剃毛区域被毛再生情况、皮肤弹性及硬度等有不同程度的改善。(2)对照组小鼠皮肤和肺组织形态结构基本正常,局部可见少量炎症反应;模型组小鼠皮肤和肺组织可见密集炎症细胞浸润和胶原纤维大量沉积;红花水煎液组和醋酸泼尼松组小鼠皮肤和肺组织炎症细胞浸润和胶原纤维沉积较模型组有所减轻。模型组小鼠皮肤炎症评分、CVF及肺组织Ashcroft、Szapiel评分较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);红花水煎液组和醋酸泼尼松组小鼠上述指标较模型组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)与对照组比较,模型组小鼠皮肤和肺组织IL-33和ST2表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,红花水煎液组和醋酸泼尼松组小鼠IL-33和ST2表达水平均有不同程度降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:红花水煎液可以抑制BLM诱导的SSc小鼠皮肤和肺组织的免疫炎症,减轻纤维化程度,其作用机制可能与其明显降低SSc小鼠皮肤和肺组织的IL-33、ST2表达水平有关。