不同炒制温度对栀子中环烯醚萜苷类和西红花苷类成分的影响

目的建立HPLC法,比较栀子炒制过程中6种成分随炒制温度的含量变化规律。方法先用DCCZ3-4型电磁炒货机对江西新余、宜春、萍乡、丰城和湖南湘潭、长沙、衡阳七个不同产地栀子分别在上料温度160℃、200℃、250℃条件下,以10℃为一间隔作为炮制终点进行炮制,再采用HPLC法对炮制品中京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、京尼平苷酸、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和藏红花酸6种成分进行含量测定。结果京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量分别平均下降了5.52 mg/g、45.63 mg/g、3.48 mg/g和0.42 mg/g。其中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ在上料温度200℃、出料温度225℃时含量降至最低;京尼平苷酸和藏红花酸分别在上料温度250℃、出料温度280℃和上料温度200℃、出料温度225℃出现拐点,其含量先升后降。结论炒制温度对栀子中环烯醚萜苷类和西红花苷类成分含量均有较大影响,不同产区栀子炮制品中京尼平苷酸、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、藏红花酸的含量差异较大,为建立栀子饮片炮制品质量标准提供可靠依据。

不同保存条件对藏红花中西红花苷Ⅰ含量的影响

在日常生活中,对于珍稀且易受损的藏红花而言,采用科学、规范的保存方法尤为重要。为研究不同保存条件下藏红花中西红花苷-I的含量变化,寻找藏红花有效且便捷的保存方法,开展精密度、稳定性、重复性、加样回收率实验,并将藏红花在不同温度、不同光照强度、不同氧气条件下保存,间隔时间取出,检测其中西红花苷-I的含量。结果表明,-18 ℃冷冻,配合黑暗和真空环境,是藏红花的理想保存条件。

西红花苷通过调控SIRT1/Nrf2通路对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用

目的探讨西红花苷通过调控沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的保护作用。方法大鼠结扎冠脉前降支40 min再灌注4 h建立I/R模型,造模成功后分为模型组、地尔硫[艹卓]组(10 mg/kg)和西红花苷低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg),另取8只正常大鼠为假手术组,连续给予相应药物15 d,ELISA法检测血清LDH、CK-MB、SOD活性和MDA水平,HE染色观察心肌组织病理改变,TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测心肌组织SOD活性和MDA水平,RT-qPCR和Western blot法检测心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清LDH和CK-MB活性、血清和心肌组织MDA水平、心肌细胞凋亡率均升高(P<0.01),血清和心肌组织SOD活性及心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01),大鼠心肌纤维排列紊乱,有大片炎性浸润,多数心肌细胞破裂且核有消融现象,心肌结构模糊不清;与模型组比较,地尔硫[艹卓]组和西红花苷各剂量组血清LDH和CK-MB活性、血清和心肌组织MDA水平、心肌细胞凋亡率均降低(P<0.01),血清和心肌组织SOD活性及心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.01),大鼠心肌组织病理损伤均得到改善。结论西红花苷可减轻I/R大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与激活SIRT1/Nrf2通路,减轻氧化应激反应有关。

西红花苷通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路改善糖尿病大鼠视网膜病变机制研究

目的:探讨西红花苷对糖尿病大鼠视网膜病变的影响,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探索其机制。方法:采用高糖高脂饲料喂养+腹腔注射(IP)链脲佐菌素的方法制备糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型,设模型组、西红花苷组、瑞沙托维(TLR4抑制剂)组和西红花苷+瑞沙托维组,每组20只。另取20只大鼠设为正常组。西红花苷组IP给药30 mg/kg,瑞沙托维组IP给药3 mg/kg,西红花苷+瑞沙托维组IP给药30 mg/kg+3 mg/kg, 1次/d。12周后,通过光学相干断层扫描检测视网膜厚度,伊文思蓝渗透实验检测视网膜血管通透性,HE染色行视网膜病理学检查,透射电子显微镜观察视网膜细胞超微结构改变,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测视网膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-8、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)含量,Western blot法检测TLR4、MyD88、总NF-κB p65、胞核NF-κB p65、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达。结果:与模型组比较,西红花苷组、瑞沙托维组和西红花苷+瑞沙托维组视网膜厚度升高、血管通透性降低(均P<0.05);视网膜组织病变明显减轻,视网膜感受器内外节层及内外核层细胞超微结构病变明显改善;视网膜TNF-α、IL-1β、IL-8、sICAM-1含量显著降低,TLR4、MyD88、胞核NF-κB p65、HMGB1相对表达量和胞核NF-κB p65/总NF-κB p65比值降低(均P<0.05)。西红花苷+瑞沙托维组对DR大鼠各指标的影响明显优于西红花苷组和瑞沙托维组(均P<0.05)。结论:西红花苷可降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜组织病变和细胞超微结构病变,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路和NF-κB核转位,减少促炎因子释放有关。

西红花苷调节TLR4/NF- κ B p65通路抑制大鼠糖尿病肾病的研究

目的观察西红花苷对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠的作用,并探讨相关机制。方法将30只DN大鼠随机分为DN组、西红花苷组、西红花苷联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)[Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)/核转录因子κB(nuclear transcription factorκB,NF-κB)p65通路激活剂]组,各10只;另取10只大鼠,设为对照组。西红花苷联合LPS组灌胃西红花苷(40 mg·kg^(-1)),尾静脉注射LPS(0.4 mg·kg^(-1));西红花苷组灌胃西红花苷(40 mg·kg^(-1)),尾静脉注射等量生理盐水;对照组、DN组分别灌胃、尾静脉注射等量生理盐水。每日1次,干预2周。检测糖脂指标及肾功能指标;检测血清炎症因子水平;Western blotting检测肾组织TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白的表达量。结果与DN组比较,西红花苷组血液空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(fasting serum lisulin,FINS)、三酰甘油(triglycerides,TG)和总胆固醇(triglycerides,TC)水平、24 h尿蛋白、微量白蛋白与尿肌酐比值(albumin/creatinine ratio,UACR)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平及肾组织TLR4、MyD88蛋白表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);与西红花苷组比较,西红花苷联合LPS组上述指标均升高(P<0.05)。结论西红花苷可改善糖脂代谢及肾功能,减轻炎症反应,从而抑制DN进展,推测其作用机制与抑制TLR4/NF-κB p65信号通路有关。

西红花苷在动物抗氧化作用中的研究进展

西红花苷(crocin)作为西红花的主要生物活性化合物,有清除自由基、缓解氧化应激的能力,具备成为绿色安全抗氧化剂的潜力。西红花苷主要在肠道中分解代谢,通过血液运输至机体各部位。心脏、脾脏、肾脏和肺脏的西红花苷代谢产物较高,即在这些部位发挥其生物学作用。西红花苷为低毒物质,可用于缓解机体发生的氧化损伤。目前,西红花苷抗氧化功能多应用于缓解神经退行性疾病、抑制肿瘤生长、保护生殖系统和心脏系统。缓解氧化应激是西红花苷调控机体适应异常环境的主要方式之一,降低氧化产物产生和提高抗氧化酶活性是其主要调节手段。西红花苷可作用于多条信号通路(TLR2/NF-κB、JAK2-STAT3-ERK、Nrf2等通路),以缓解外界物质刺激所引起的机体内促氧化剂和抗氧化剂之间的失衡。作者综述了西红花苷抗氧化作用在调控动物健康中的应用以及在不同调控系统中的作用机制,为进一步深入研究西红花苷抗氧化作用机制及其调控动物健康提供理论依据;为开发新型天然抗氧化剂在疾病或机体异常中的治疗应用提供指导。

西红花苷通过LKB1/AMPK/mTOR通路抑制食管癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的探讨西红花苷对食管癌细胞细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其可能机制。方法以人食管癌Eca-109细胞为受试对象,采用CCK-8法检测不同浓度西红花苷对细胞的抑制作用,筛选最佳浓度和干预时间。将食管癌Eca-109细胞分为对照组、西红花低、中、高剂量组,分别按照0μmol/L、17μmol/L、34μmol/L、68μmol/L给予西红花苷干预,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot及RT-qPCR法分别检测各组细胞LKB1、AMPK、m TOR mRNA和蛋白表达水平。结果Transwell侵袭和细胞凋亡实验结果表明,与空白对照组比较,低、中、高剂量西红花苷组细胞穿过基膜的数量减少,凋亡率增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Western blot和RT-qPCR结果显示,与空白对照组比较,低、中、高剂量西红花苷组细胞LKB1、AMPK m RNA和蛋白表达水平升高,mTOR mRNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论西红花苷对食管癌可能有抑制作用,其机制可能与调控LKB1/AMPK/mTOR信号通路相关。

西红花中西红花苷-1和西红花苷-2含量测定方法的建立

目的:建立西红花中西红花苷-1和西红花苷-2的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,使用Zorbax C_(18)色谱柱,乙腈和水为流动相梯度洗脱,检测波长440nm,流速1.0mL·min^(-1);同时采用单因素分析的方法,对影响含量测定结果的主要因素如提取溶剂、超声处理时间、提取温度及是否避光等进行考察。结果:西红花苷-1在5.2～165μg·mL^(-1),西红花苷-2在2.7～85μg·mL^(-1)范围均呈良好线性关系,相关系数分别为0.9999和0.9998,平均回收率分别为102.5%和98.2%。西红花样品溶液的制备应在避光、室温条件下,以50%乙醇超声处理30min为宜。结论:按照本法进行西红花供试品溶液的制备和含量测定,结果稳定,重现性好,可用于西红花中西红花苷-1和西红花苷-2的含量测定。

HPLC法测定不同产地西红花中西红花苷-Ⅰ和西红苷-Ⅱ的含量

利用高效液相色谱法,同时测定不同产地西红花中的西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量;采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(45∶55,V/V)洗脱,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为440 nm,柱温为25℃。方法学考察表明:在上述色谱条件下,西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ能与杂质完全分离;标准曲线线性关系良好(R2>0.999 0),精密度和稳定性符合分析要求,平均加样回收率分别为99.42%、99.36%,RSD分别为1.48%、1.28%,表明所建立的方法重复性、耐用性、准确度良好。对10批不同产地的西红花药材进行分析,结果显示产自河南南阳、河南许昌、浙江湖州和河北定州的西红花的总苷含量高于其他产地,为西红花药材的质量评价和控制提供了一定的科学依据。

高效液相色谱梯度洗脱法测定不同中国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量

目的建立高效液相色谱梯度洗脱法测定国产西红花中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量。方法采用反相高效液相色谱法,以Agilent ZORBAX StableBond SB-Aq(4.6 mm×250 mm,5μm)柱为色谱柱;流动相为0.01%甲酸(A)-乙腈(B),进行梯度洗脱,0～8 min(75%～70%A),8～10 min(70%～60%A),10～25 min(60%～30%A);流速:1.0 mL.min-1;进样量:5μL;测定波长:440 nm;柱温:30℃。结果西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的保留时间大约分别为5.71 min和8.83 min。以峰面积对进样浓度线性回归,西红花苷Ⅰ回归方程:Y=24.93X-0.254 3,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1,西红花苷Ⅱ回归方程:Y=36.11X+8.370,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的回收率分别为101.1%和100.2%,RSD分别为1.7%和1.4%。结论本方法可用于测定不同国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量,本方法操作简便,结果准确。

RP-HPLC法同时测定蒙药复方协日嘎-4中栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、西红花苷-1、西红花苷-3的含量

建立同时测定蒙药复方协日嘎-4药材中栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、西红花苷-1、西红花苷-3的高效液相色谱含量测定方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Elite C18(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长分别为238nm、238nm、380nm、380nm,柱温20℃,进样量20μL.本方法可使京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-1、西红花苷-3有效分离,在检测范围内线性良好,精密度、稳定性和重复性良好,平均加样回收率分别为100.16%(RSD=0.69%),99.19%(RSD=1.29%),100.59%(RSD=0.80%),99.06%(RSD=1.02%),(n=6).经方法学验证,该方法可同时准确、简便、快速的测定蒙药复方协日嘎-4中栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、西红花苷-1、西红花苷-3的含量,可以作为蒙药复方协日嘎-4的质量控制方法.

反相高效液相色谱法对不同来源西红花药材中西红花苷-1、苷-2的定量分析

目的 :测定西红花药材中西红花苷 1、苷 2的含量。方法 :采用反相高效液相色谱 ,以Nova PakC18( 4 μm ,150mm×3 .9mm)柱为色谱柱 ,甲醇 水 ( 55∶45)为流动相 ,测定波长为 ( 4 4 0± 1)nm。结果 :西红花苷 1的平均回收率为 99.53 % ,日内、日间RSD分别为 1.0 % ,1.6 % ;西红花苷 2的平均回收率为 99.43 % ,日内、日间RSD分别为 1.3 % ,1.8%。进口西红花商品药材中有 2种未测出或只有痕量 ,3种含量较低 (西红花苷 1为 80 .9～ 10 2 .0mg·g- 1生药 ,西红花苷 2为 44.5～ 62 .3mg·g- 1生药 ) ,而国产西红花商品药材中含量最高 (西红花苷 1为 176 .2mg·g- 1生药 ,西红花苷 2为 10 8.5mg·g- 1生药 )。结论 :建立的RP HPLC法测定不同来源西红花药材中西红花苷 1、苷 -2的含量 ,操作简便 ,结果准确。

栀子中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的高效液相色谱法测定

目的建立了HPLC同时测定西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的方法。方法采用C8(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇水冰醋酸(75∶24.5∶0.5),流速为0.6 ml·min-1,检测波长为440 nm。结果在该色谱条件下,西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ得到较好的分离,西红花苷Ⅰ浓度在0.312μg·ml-1到10.000μg·ml-1范围内、西红花苷Ⅱ浓度在0.156μg·ml-1到5.000μg·ml-1范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,方法平均回收率为102.13%。结论该方法具有重复性好、准确、快速等优点,适用于西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的同时测定。

HPLC法测定红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量

目的建立HPLC法测定红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量。方法色谱柱：Hypersil ODS2C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：甲醇-水（48∶52）,检测波长：440 nm;流速：1.0 ml·min-1;柱温：室温。结果西红花苷-Ⅰ在12~45μg·ml-1的浓度范围内线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为99.44%,RSD为1.19%（n=6）;西红花苷-Ⅱ在6.4~24μg·ml-1的浓度范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为98.79%,RSD为1.38%（n=6）。结论本法简便、快速、准确,可用于红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量测定。

不同采收期水栀子果实中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ和栀子苷含量变化研究

建立水栀子药材中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ超高效液相色谱法(UPLC)含量测定的方法,研究不同采收期的水栀子药材中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ和栀子苷含量的变化趋势。西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ含量测定采用80%甲醇超声提取,通过UPLC-DAD法测定。色谱条件:Aglient Pro120 EC-C18(50 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,以水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,0~5 min,5%~20%B;5~17 min,20%~27%B;柱温15℃,流速0.8m L/min,检测波长440 nm。栀子苷含测采用《中国药典》2015年版一部栀子项下的含量测定方法检测。通过实验,红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ分别在49.5560~955.6000 ng、5.9045~1180.9000 ng线性范围内与各自峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996、r=0.9998),平均回收率分别为98.17%、99.67%(n=9)。表明建立的西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ含量测定方法简便,稳定性、重复性、分离度均好;随着采收期的延长,样本中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量逐步增加,而栀子苷含量先降低后再逐步增加到一个平衡值。本研究为水栀子药材最佳采收期的确定提供了实验依据。

虫草保元胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ含量测定

目的 采用高效液相色谱法测定虫草保元胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量.方法 色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇：水（48：52）,检测波长：440 nm;柱温室温,流速：1.0 mL·min-1.结果 西红花苷-Ⅰ在6～45 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,r＝1.000 0,平均回收率98.73%,RSD为1.24%（n＝6）;西红花苷-Ⅱ在3.2～24.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,r＝1.000 0,平均回收率98.01 %,RSD为1.53 %（n＝6）.结论 该方法操作简便,测定结果准确,重复性好,可用于虫草保元胶囊的质量控制.

HPLC法测定浙江慈溪水稻田栽培的西红花中西红花苷Ⅰ、Ⅱ含量的研究

为了检测栽培于浙江慈溪水稻田中的西红花所含的西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量,采用高效液相色谱法,色谱条件为Intertsil ODS-SP C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(60∶40),检测波长440nm,流速1.0 m L/min,进样量为20μL,柱温为室温。结果表明:西红花花柱中西红花苷I的平均含量为8.85%,西红花苷Ⅱ的平均含量为3.72%;雄蕊中西红花苷I的平均含量为0.094%,西红花苷Ⅱ的平均含量为0.005%;而花瓣中西红花苷I和西红花苷Ⅱ的含量极少,未能检出。因此,栽培于浙江慈溪水稻田中的西红花花柱中西红花苷I和西红花苷Ⅱ两者含量之和为12.57%,符合2010版《中国药典》的质量标准,可以作为药用。

响应面优化西红花中西红花苷提取工艺的研究

建立了西红花药材中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的最优提取工艺。采用乙醇-水体系超声提取西红花苷(超声功率100W),在单因素实验基础上运用响应面法优化西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ提取工艺,最佳提取工艺参数为:乙醇浓度50%、提取时间30min、提取温度45℃。在此优化的提取工艺条件下,西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ得率分别为14.12%和4.98%。该提取工艺可用于西红花中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的提取。

西红花苷和西红花酸在小鼠体内抗氧化活性对比研究

目的对比评价西红花苷和西红花酸在小鼠体内抗氧化活性。方法采用硅胶柱层析从栀子中分离西红花酸和西红花苷纯品,普通昆明小鼠灌胃给药西红花酸和西红花苷,剂量分别是西红花酸6.25、12.5和25.0mg·kg-1和西红花苷18.7、37.5和75.0mg·kg-1.d-1,采用测定普通小鼠体内抗氧化指标(SOD、GSH-Px、TAOC和MDA)的方法对比评价西红花酸和西红花苷-1体内抗氧化活性。结果两种化合物都能明显提高小鼠肾脏和肝脏的SOD,肝脏的GSH-Px,心脏和肾脏的TAOC,降低血浆的MDA。结论西红花酸和西红花苷-1具有相似的体内抗氧化活性,其主要活性部位可能是肝脏和肾脏。

栀子指纹图谱及不同生长期西红花苷和栀子苷含量的研究

目的研究不同产地栀子指纹图谱及不同生长期西红花总苷和栀子苷含量。方法采用高效液相色谱法建立了全国不同产地栀子的指纹图谱,并测定了不同产地及同一产地不同采收期药材西红花苷和栀子苷的含量。结果 各地栀子药材与对照指纹图谱的相似度分别为0.980,0.992,0.978,0.989,0.948,0.991,0.986,0.996,0.993,0.965。不同产地栀子的栀子苷平均含量为4.11%;西红花总苷含量最低为1.41%,最高达3.08%,相差一倍以上。而不同采收期药材测定结果显示,西红花总苷含量从8月中旬的0.009%增加到11月中旬的1.32%,之后趋于下降。而栀子苷含量则在刚结果的8月中旬最高,之后逐渐下降。结论 各产地栀子药材表现较高的相似度,说明栀子药材所含化学成分随产地变化小。西红花苷含量随着栀子的成熟而显著增加,但过度熟透的果实也不利于西红花苷的稳定。而栀子苷主要在果实形成后的短期内生成,此后由于果实的生长,其浓度反而下降。