酶解提取红花中脱水红花黄色素B工艺的优化

目的优化红花中脱水红花黄色素B的酶解提取工艺。方法单因素试验确定响应面分析的自变量,Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,以脱水红花黄色素B提取率为响应值,绘制响应面和等高线图。结果最佳条件为果胶酶用量0.4%,酶解温度49℃,酶解时间40 min,酶解p H 5.2,提取率0.245%。结论该模型合理可靠,可用于工艺优化。

红花黄色素B抗凝作用研究

目的:观察红花黄色素B(SYB)对ADP诱导的大鼠体外血小板聚集的抑制作用及抗凝作用。方法:大鼠腹主动脉取血,制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP),在PRP中加入SYB溶液及ADP,记录血小板聚集曲线,计算血小板聚集抑制率;在PPP中加入SYB和PT试剂,记录大鼠血浆凝血酶原时间(PT);在PPP中加入SYB、APTT试剂和CaCl2,记录部分活化凝血活酶时间(APTT);在PPP中加入SYB、TT试剂,记录凝血酶时间(TT)。结果:SYB可抑制ADP诱导的体外大鼠最大血小板聚集率,可延长大鼠离体血浆PT、APTT和TT,且呈明显的量效关系。结论:SYB可阻断多种途径诱发的血栓形成反应,为红花活血化瘀的主要有效成分之一。

红花黄色素B对冈田酸致SH-SY5Y神经元损伤的保护作用

本研究目的是考察红花黄色素B(SYB)对冈田酸(OA)致SH-SY5Y神经元损伤的保护作用。采用全反式维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5Y细胞分化为成熟神经元,OA诱导神经元损伤,建立Tau蛋白过度磷酸化的神经元突触萎缩模型;Giemsa染色法观察SH-SY5Y细胞形态学变化;Western Blot检测Tau蛋白262位点磷酸化水平;流式细胞术检测细胞总活性氧(ROS)和线粒体源ROS水平,以及线粒体膜电位的变化。结果表明,ATRA可诱导SH-SY5Y细胞分化为成熟神经元;OA可致神经元突触萎缩和Tau蛋白在262位点过度磷酸化;SYB能够改善OA所致成熟神经元损伤,降低Tau蛋白在262位点的磷酸化水平,其保护作用机制可能与减少胞内及线粒体源ROS产生,提高线粒体膜电位有关。

红花黄色素B对肝癌细胞中miR-34a和p53/Caspase凋亡途径的影响

目的:研究就红花黄色素B(Safflower Yellow B,SYB)对肝癌细胞HepG2中miR-34a的表达及p53/半胱氨酸蛋白酶(Caspase,CASP)凋亡途径的影响进行了探讨。方法:通过细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞的存活情况,通过Annexin V检测细胞凋亡情况,通过聚合酶链式反应检测miR-34a表达,通过蛋白质免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤2(BCL2 Apoptosis Regulator,BCL2)、CASP3(剪切后)、CASP8、CASP9、p53的表达情况。结果:在本研究发现SYB可以抑制HepG2细胞生长、增殖活性,诱导肿瘤细胞凋亡,同时促进miR-34a、CASP3(剪切后)、CASP8、CASP9和p53的表达,而对Bcl-2的表达产生抑制作用。结论:miR-34a在对SYB抗HepG2细胞的作用机制中起着很重要的作用。

红花黄色素B对AngⅡ诱导内皮细胞线粒体损伤的保护作用

血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）作为血液与组织之间的屏障,参与多种生理和病理过程,其功能异常与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等有紧密的联系[1？4]。血管紧张素Ⅱ（angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ）可促进内皮细胞内活性氧自由基（reactiveoxygen species,ROS）的生成,

红花水提物中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B在大鼠体内的药代动力学研究

目的:探讨红花水提物中羟基红花黄色素A(HSYA)和脱水红花黄色素B(AHSYB)在大鼠体内的药代动力学特征。方法:红花水提物大鼠灌胃给药后,HPLC测定血浆中HSYA和AHSYB的含量,运用非房室模型经Win Nonlin 5.2软件求取药动学参数。结果:HSYA和AHSYB在大鼠体内的主要药动学参数Cmax、Tmax、t1/2z、AUC0→t和AUC0→∞分别为(4.14±0.42)和(1.87±0.29)μg/m L、30和20min、(96.78±9.32)和(83.46±7.53)min、(512.18±74.15)和(221.95±22.34)μg·min·m L-1、(584.78±86.58)和(242.42±23.27)μg·min·m L-1。结论:Cl、t1/2z等数据比较表明红花水提物中HSYA与AHSYB的药代动力学类似,两者在大鼠体内的吸收均较快,代谢也均较慢。

红花黄色素对氧自由基引起人红细胞膜损伤的保护作用

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)和红花黄色素B(SYB)对超氧阴离子自由基(O2-.)引发的人红细胞膜氧化损伤的保护作用。方法:采用邻苯三酚制备人红细胞膜过氧化损伤模型,研究HSYA和SYB对人红细胞膜氧化损伤的影响。结果:O2-.能引起红细胞膜脂质过氧化,使膜流动性下降。而红细胞膜经过一定量的HSYA和SYB预处理后,膜流动性提高。结论:HSYA和SYB对氧自由基引发的红细胞膜损伤具有一定的保护作用。

食品添加剂红花黄色素化学成分的HPLC-ESI-MS分析

目的:采用HPLC-ESI-MS分析方法,鉴定其化学成分。方法:高效液相色谱采用Phenomenex Gemini-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.01%三氟乙酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长为全波长;质谱使用ESI离子源,正、负离子分别检测。结果:通过质谱分析以及参照相关文献共鉴定出11个成分,其中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B为期主要的有效成分。结论:该方法灵敏度高、分离度好,为红花黄色素物质基础的研究提供一种快速准确的分析方法。对比了现行最新红花黄色素标准,建议现行红花黄色素标准规定的有效成分修改为羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B。

PHPLC法同时分离纯化红花中2种成分

目的建立制备型高效液相色谱(PHPLC)法分离纯化红花Carthamus tinctorius L.中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B。方法红花水提液用大孔吸附树脂初步纯化后,PHPLC法制备。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(9.4 mm×250 mm,5μm);柱温25℃;流动相乙腈-0.02%三氟乙酸,梯度洗脱;体积流量4.2 m L/min;检测波长403 nm,收集相应流份,经真空冷冻干燥得单体。结果羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B的转移率分别为70.08%和70.33%,纯度均大于98%。结论该方法操作简单,高效快速,产物纯度高,适合实验室小规模制备。

基于随机森林模型的超声提取优化红花中两种有效成分工艺研究

目的:采用熵权法结合随机森林数学模型同时优化红花中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B两种有效成分的提取条件。方法:对红花进行超声提取,采用单因素试验选择超声温度、超声时间、液料比和超声功率作为影响提取率的因素,用Box-Benhnken中心组合试验设计确定试验方案,用HPLC测定羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B的含量,通过熵权法计算出羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B的权重值,并将综合评价值作为评价指标,再用随机森林法对提取结果进行优化。结果:随机森林得到的最佳提取工艺为:超声温度72℃、超声时间46 min、液料比为16∶1(mL/g)、超声功率112 W,在此条件下预测综合评价值为1.12,平均验证真实值为1.15,两者相对误差为2.61%。结论:将熵权法和随机森林结合应用于红花中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B提取工艺的优化、分析和预测,预测吻合于验证结果,这为中药有效成分的提取工艺优化研究提供了新的思路与参考。

多指标综合加权评分法优选十一方药酒渗漉提取工艺研究

目的:优选十一方药酒的渗漉提取条件。方法:以龙血素B、羟基红花黄色素A、川续断皂苷Ⅵ、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量和总固体量为考察指标进行综合评价,采用正交试验对影响渗漉工艺的药材浸泡时间、渗漉速度和溶剂用量3个因素进行优选。结果:十一方药酒最佳渗漉提取工艺为:药材润湿1 h,加12倍量白酒浸泡48 h,以流速1.0 mL/min渗漉。在此渗漉条件下,十一方药酒的综合评分为10.6316。龙血素B、羟基红花黄色素A、川续断皂苷Ⅵ、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量分别为0.0019、0.1460、1.9300、3.5900、0.6300 mg/mL,总固体量为46.28 g。结论:优选的渗漉提取工艺简便稳定、重复性好,为十一方药酒的进一步开发与利用提供实验依据。

基于物相形态差异探究煎煮过程对红花-桃仁药对药效物质的传递作用

目的以红花-桃仁药对汤液中相态差异为基础,探究煎煮过程对该药对药效物质的传递作用。方法采用超速离心和透析技术对红花-桃仁药对汤液进行相态拆分,使用马尔文粒径仪、透射电子显微镜对各相态的粒径、ζ电位、微观形态进行表征,选用气相色谱法、紫外分光光度法、HPLC法对各相态的脂肪酸、蛋白、糖类以及红花有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)、脱水红花黄色素B(anhydrosafflor yellow B,AHSYB)的含量进行测定;拆分单煎液、分煎合并液及共煎液的相态,并比较不同药液中同级相态的物质组成或微观形态的差异,考察煎煮方式对相态形成的影响。结果红花-桃仁药对汤液中分离得到了1个亲油型相态②和6个亲水型相态①③④⑤⑥⑧;亲油型相态②由棕榈酸、棕榈油酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生四烯酸、二十烷酸共8种脂肪酸组成;亲水型相态粒径在20~1000 nm,主要为混悬相态与胶体相态,糖类、蛋白是亲水型相态的重要组成物质,HSYA、AHSYB主要分布于亲水型相态③⑥⑧中。共煎煮可形成亲油型相态,其脂肪酸组成与桃仁油相近,单煎液、分煎合并液及共煎液中亲水型相态⑥⑧粒子的形态有一定差异,共煎液中相态⑥⑧粒子的粒径均一性、稳定性最佳。结论物相形态是红花-桃仁药对药效物质传递的重要形式,煎煮过程特别是共煎煮,是该药对有效相态形成的重要步骤。

球面对称设计结合遗传神经网络优选黄芪-红花药对水提工艺

目的采用球面对称设计及遗传神经网络优选黄芪-红花药对的水提工艺。方法将黄芪-红花药对水提液中8种有效成分(羟基红花黄色素A、紫丁香苷、毛蕊异黄酮苷、脱水红花黄色素B、山柰酚-3-O-芸香糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷)的含量进行赋权,以计算得到的综合得分作为水提工艺的评价指标。在单因素实验基础上,选择液料比、提取时间、提取温度3个因素,依据球面对称设计进行实验,并结合遗传神经网络模型进一步优选黄芪-红花药对水提工艺参数。结果球面对称设计得到的最佳提取条件为液料比20∶1、提取时间30 min、提取温度87℃、提取次数2次,其综合评分为4.877;以遗传神经网络得到的最佳提取条件为液料比22.7∶1、提取时间30 min、提取温度87℃、提取次数2次,经验证该条件下的综合得分为5.004。实验结果显示,遗传神经网络能够提高水提工艺条件的综合评分。结论球面对称设计和遗传神经网络能够优化黄芪-红花药对水提工艺参数,可为中药及其制剂中多种有效成分提取的工艺优选提供参考。

Stability and degradation of hydroxysafflor yellow A and anhydrosafflor yellow B in the Safflower injection studied by HPLC-DAD-ESI-MS^n

Safflower is a popular Chinese medicinal plant and Safflower injection is extensively used for the clinical treatment of cerebrovascular and cardiovascular diseases. In this study, HPLC-DAD-ESI-MSn was utilized to study the stability and degradation of the two major but chemically unstable bioactive compounds hydroxysaffior yellow A and anhydrosaffior yellow B, in Safflower injection. The impact of light irradiation, temperature, and pH on the stability of these two compounds were studied. The results showed that hydroxysafflor yellow A and anhydrosafflor yellow B could degrade at high temperature （〉60 ℃） or extreme pHs （pH ≤ 3.0 or 〉7.0）, but not under light irradiation. The common degradation product was p-coumaric acid. Chemical structures of the other degradation products were characterized by LC-MS. Hypothetical degradation pathways were proposed. In addition, ADP-induced platelet aggregation tests showed that the degradation of anhydrosaffior yellow B could reduce the anticoagulation activities of Safflower injection. Our results suggest that temperature and pH are critically important for the preparation and storage of Safflower injection.

HPLC-DAD法同时测定谷红注射液中7个组分的含量

目的：建立HPLC-DAD法同时测定谷红注射液中乙酰谷酰胺、尿苷、腺苷、鸟苷、紫丁香苷、羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B 7个有效成分的含量。方法：采用AlltimaTMC18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.9 m L·min-1,柱温30℃,检测波长为210、260、403 nm。结果：7个组分的峰面积与浓度的线性关系良好（r≥0.999 6）;加样回收率为99.12%-100.7%。10个批次谷红注射液中7个组分的含量分别为27.26-27.89、62.23-84.30、44.38-58.71、40.15-43.18、63.20-69.45、410.69-436.09、0.99-1.78μg·m L-1。结论：所建立的方法用于谷红注射液多组分的含量测定准确、可靠,重复性好,可作为谷红注射液质量控制的参考。