红花龙胆枯萎病病原菌鉴定及培养特性研究

枯萎病是红花龙胆栽培中发生最普遍,危害最严重的病害之一。为明确引起红花龙胆枯萎病的病原种类及其侵染特性,本研究采用组织分离法获得2个菌株,结合形态学特征以及ITS和Mcm7序列鉴定,2个菌株被鉴定为Clarireedia jacksonii,这是该菌在龙胆科植物上引起枯萎病的首次报道。致病性测定表明,该菌在15~35℃可侵染红花龙胆健康叶片,最佳侵染温度为25℃。生长特性研究表明,该菌最适生长温度为25℃,最适pH为5,菌丝致死温度为50℃处理10 min。

黔西南州红花龙胆的生长环境及性状分析

红花龙胆为多年生草本植物,黔西南州野生红花龙胆主要生长在海拔900~1900 m的高山草丛、草坡、灌木林,在兴义、兴仁、贞丰、安龙、册亨、望谟、晴隆、普安等地均有分布。黔西南州地处亚热带季风湿润气候区和低纬度中海拔区,年平均气温16℃,空气湿度在48%~74%,为喀斯特地形,岩溶面积分布广,土壤呈微酸性、中性或微碱性,适宜红花龙胆的生长。本次调查根据不同的地形地貌进行选点,选取兴义乌沙、万峰林、丰都、普子、白碗窑以及兴仁大山、晴隆大厂7个区域作为调查采样点。在兴义乌沙、丰都、白碗窑及兴仁大山4个区域发现野生红花龙胆,选择12个采样点,调查采样点的地形地貌、空气湿度、年平均气温、土壤水分含量及酸碱性,并分析不同生长环境下红花龙胆的生长情况,为红花龙胆的人工繁育提供参考数据。

红花龙胆药材的UPLC指纹图谱研究与芒果苷含量测定

目的为红花龙胆药材的质量控制提供参考依据。方法以52批红花龙胆药材为研究对象,采用超高效液相色谱(UPLC)法,以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》对52批药材样品进行相似度评价,并测定药材中芒果苷含量,再进行化学计量学分析[聚类分析、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)]。结果建立了52批红花龙胆药材样品的UPLC指纹图谱,标定了17个共有峰,指认了其中6个,分别为马钱苷酸(1号峰)、新芒果苷(3号峰)、獐牙菜苦苷(5号峰)、当药苷(6号峰)、芒果苷(7号峰)与异荭草苷(9号峰)。52批药材样品的相似度均大于0.9;聚类分析结果显示,S1~S46、S48~S52聚为一类,S47单独为一类;PCA结果显示,前6个主成分的累计方差贡献率为82.928%;OPLS-DA结果显示,獐牙菜苦苷、芒果苷以及4、14、15、16号峰所代表的化学成分是影响红花龙胆药材质量差异的主要标志性成分。52批药材样品中芒果苷的含量在18.2~101.0 mg/g之间,大多符合2020年版《中国药典》规定。结论所建立的UPLC指纹图谱和化学计量学分析方法结合芒果苷含量测定方法,能较为全面地评价红花龙胆药材的质量。

基于因子分析和聚类分析的红花龙胆种子质量评价

采用相关分析、因子分析、聚类分析等方法,对30个种源的红花龙胆种子进行综合评价,为筛选适宜红花龙胆人工种植的优质种子提供参考依据。结果表明,以种荚长径、种荚宽径、种子长径、种子宽径、千粒重、发芽率评价种子质量,C4(黔西县钟山镇)最好;以发芽势、发芽指数评价种子质量,C5(观山湖区百花湖镇)最好;以发芽天数评价种子质量,C2(七星关区流沧桥)最好。相关性分析表明,红花龙胆种子特性指标和发芽特性指标之间相关性弱,种荚长径与其他指标相关性弱。因子分析表明,可以将发芽率、发芽势、千粒重等8个指标转化为彼此不相关的2个主因子(种子特性因子和发芽特性因子),累积贡献率达79.63%,以种子特性因子评价种子质量,C4(黔西县钟山镇)最好,以发芽特性因子评价种子质量C5(观山湖区百花湖镇)最好,综合评价C4(黔西县钟山镇)最好。系统聚类分析可以将实验材料分为四大类,以C4(黔西县钟山镇)为代表的第一类种子质量最好。基于因子分析和聚类分析的综合评价更适合评价红花龙胆种子质量。

不同炒制温度对栀子中环烯醚萜苷类和西红花苷类成分的影响

目的建立HPLC法,比较栀子炒制过程中6种成分随炒制温度的含量变化规律。方法先用DCCZ3-4型电磁炒货机对江西新余、宜春、萍乡、丰城和湖南湘潭、长沙、衡阳七个不同产地栀子分别在上料温度160℃、200℃、250℃条件下,以10℃为一间隔作为炮制终点进行炮制,再采用HPLC法对炮制品中京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、京尼平苷酸、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和藏红花酸6种成分进行含量测定。结果京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量分别平均下降了5.52 mg/g、45.63 mg/g、3.48 mg/g和0.42 mg/g。其中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ在上料温度200℃、出料温度225℃时含量降至最低;京尼平苷酸和藏红花酸分别在上料温度250℃、出料温度280℃和上料温度200℃、出料温度225℃出现拐点,其含量先升后降。结论炒制温度对栀子中环烯醚萜苷类和西红花苷类成分含量均有较大影响,不同产区栀子炮制品中京尼平苷酸、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、藏红花酸的含量差异较大,为建立栀子饮片炮制品质量标准提供可靠依据。

红花龙胆花色素的提取及性质

以红花龙胆花瓣为材料,对其花色素进行提取及理化性质研究。结果表明:红花龙胆花色素液在可见光区的最大吸收波长为531nm;以体积分数70%乙醇溶液提取花色素的效果较好;该花色素对紫外线、高温、VC,以及H2O2和Na2SO3的耐受性较差,但葡萄糖、蔗糖和柠檬酸对色素溶液几乎无影响;Na+、Ca2+、A13+等金属盐离子对花色素的影响很小,但Fe2+对花色素具有显著增色作用;花色素在pH值小于等于3时保持红色色泽,但中性和碱性环境下其红色色泽被完全破坏。根据研究结果初步推断该花色素为含有酚羟基的花青素。

火焰原子吸收法测定红花龙胆中重金属元素含量

为了解贵州少数民族药红花龙胆中重金属（Mn,Zn,Pb,Cu,Cr,Cd,Ni）的含量,采用HNO3HClO4（5∶1）体系消解样品,火焰原子吸收光谱法测定红花龙胆中7种重金属元素含量.结果表明：红花龙胆中Zn、Cu、Cd、Mn、Ni、Cr、Pb重金属含量分别为51.45 μg/g,9.64 μg/g,0.28 μg/g,62.79 μg/g,6.39 μg/g,5.60 μg/g,12.26 μg/g,7种重金属元素的含量大小依次为Mn＞Zn＞Pb＞Cu＞Ni＞Cr＞Cd.加标回收率在96.7％～105.2％,RSD为0.46％～2.26％,该法快速、简便、灵敏、准确,可用于红花龙胆中重金属元素的分析.

RP-HPLC法同时测定蒙药复方协日嘎-4中栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、西红花苷-1、西红花苷-3的含量

建立同时测定蒙药复方协日嘎-4药材中栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、西红花苷-1、西红花苷-3的高效液相色谱含量测定方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Elite C18(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长分别为238nm、238nm、380nm、380nm,柱温20℃,进样量20μL.本方法可使京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-1、西红花苷-3有效分离,在检测范围内线性良好,精密度、稳定性和重复性良好,平均加样回收率分别为100.16%(RSD=0.69%),99.19%(RSD=1.29%),100.59%(RSD=0.80%),99.06%(RSD=1.02%),(n=6).经方法学验证,该方法可同时准确、简便、快速的测定蒙药复方协日嘎-4中栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、西红花苷-1、西红花苷-3的含量,可以作为蒙药复方协日嘎-4的质量控制方法.

瓜蒌红花甘草汤合龙胆泻肝汤治疗带状疱疹神经痛30例临床观察

笔者于2011年至2012年期间,采用全国名老中医李发枝教授经验方瓜蒌红花甘草汤合龙胆泻肝汤治疗带状疱疹神经痛,取得了良好的疗效,现报道如下。

红花龙胆的药用民族植物学及质量评价

采用药用民族植物学的文献研究和调查编目等方法对涉及红花龙胆的文献进行系统梳理,对采集和收集的样品进行鉴定;运用高效液相色谱法对采集和收集样品中的芒果苷进行含量测定.结果显示,红花龙胆分布区内的苗族、土家族及汉族等民族均将红花龙胆用作清热、消炎、止咳之草药,用于治疗肺及肝胆疾病;12批样品中的芒果苷含量平均2.8%,传统应用全草的样品含量均超过2.0%,地区之间的含量没有显著差异.研究表明,芒果苷可视为红花龙胆的药效物质基础;芒果苷限量标准的制订可为以红花龙胆为原料的新药和成药标准的提升提供参考.

红花龙胆血清药物化学初步研究

目的研究红花龙胆血清药物化学,探讨红花龙胆药效作用的物质基础。方法采用血清药物化学研究方法,在建立红花龙胆高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的基础上,比较红花龙胆提取物、红花龙胆含药血清、空白血清HPLC指纹图谱差异,确认红花龙胆提取液灌胃后大鼠含药血清的移行成分。结果在红花龙胆含药血清中发现20个入血成分,4个为原型成分,其余16个可能为原型成分代谢产物。结论 20个入血成分可能是红花龙胆的体内直接作用物质,对其进行深入研究可能有助于阐明红花龙胆的药效物质基础及药效机制。

红花龙胆及其炮制品中芒果苷的含量测定比较

目的通过比较红花龙胆和清炒红花龙胆的芒果苷含量,考察红花龙胆药材清炒的目的。方法以芒果苷为化学指标,采用Hypersil-BDS C1(8250×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈:0.02%磷酸溶液(12︰88),流速1 ml/min,检测波长:255 nm,柱温:25℃。结果红花龙胆药材芒果苷含量为2.28%,红花龙胆炒制时间8 min为2.17%,炒制时间15 min为1.77%,炒制时间20 min为1.00%。结论不同炒制时间红花龙胆的芒果苷含量均有降低,其含量降低可能为缓和苦寒之性作用,以保证虚热痨咳病患者的用药安全。

贵州红花龙胆资源调查及主要形态性状分析

为了更好地保护和合理利用野生红花龙胆资源，通过野外考察、标本采集、分类学鉴定及资料考证，对贵州省红花龙胆资源进行了调查，并对其29个性状进行了描述与测量。结果显示，贵州九个地州市均有红花龙胆分布，分布范围较广，但资源储量较小；红花龙胆茎分枝变异系数最大（61.08%），千粒重变异系数最小（1.38%），大部分性状的变异系数为10～20%。随着旅游业的发展及原药材的收购，野生红花龙胆资源越来越少，建议在就地保护的基础上开展迁地保护及驯化栽培。此外，红花龙胆冬季开花，花较大，红紫色，可以培育成冬季观赏花卉。

红花龙胆的药学研究进展

红花龙胆(Gentiana rhodantha Franch.)为2015版《中国药典》的新增中药品种,全草入药,常用于治疗胆囊炎和肺结核等症。红花龙胆主要分布于我国西南地区,长期作为地方用药及民族药。研究表明红花龙胆中主要含口山酮类化合物。经过系统的文献研究,本文将从本草考证、化学成分、药理活性、质量评价以及常见易混伪品种等方面对红花龙胆的研究现状进行整理,为进一步开发利用提供依据。

红花龙胆的生药学鉴定

通过显微鉴定发现,红花龙胆根的内皮层以外组织已全部脱落,每一内皮层母细胞内有数个至十数个子细胞;茎为双韧型维管束;叶上表皮细胞表面观有明显的角质层细密纹理,中央有一短小的乳头状突起。

超微粉碎-微波双水相萃取红花龙胆中环烯醚萜苷类

以红花龙胆全草为原料,采用超微粉碎和微波控温辅助双水相法提取了其中的环烯醚萜苷类。通过单因素实验和正交实验确定了最佳提取工艺;考察了所得环烯醚萜苷类的总抗氧化作用及其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的能力。结果表明,最佳提取工艺为:在30.0 g〔无水乙醇7.8 g(质量分数26%),磷酸氢二钾(K2HPO4)3.0 g (质量分数10%)〕乙醇/K2HPO4双水相体系中,红花龙胆干粉粒度为400目,微波温度(70±1)℃,微波时间110 s,红花龙胆干粉加入量3.5 g,得率为5.48%,相比传统提取工艺热回流得率(3.61%)显著提高。此法能抑制试材内源性水解酶活性且中和植酸(红花龙胆中的酸性物质)来降低溶出环烯醚萜苷类发生聚合反应的几率,有效解决了红花龙胆中环烯醚萜苷类需富集才能检测到的问题;总环烯醚萜苷类的抗氧化能力在0.2~0.6 g/L内强于2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT),对DPPH·的清除能力在0.2~1.0 g/L内强于BHT。

红花龙胆组培快繁体系研究

为建立红花龙胆组培快繁体系,对红花龙胆合适外植体、消毒方法、最佳增殖培养基、生根培养基及移栽驯化方法进行了研究。结果表明,带节茎段为红花龙胆组织培养的最佳外植体;5%的次氯酸钠消毒10 min,污染率为0,成活率达80%;芽诱导增殖最佳培养基为:MS+0.1 mg·L^(-1)IBA+2.5 mg·L^(-1)ZT,增殖系数为8.94;最佳生根培养基为:1/2MS+0.3 mg·L^(-1)IBA,生根率为100%;1∶1的珍珠岩∶草炭为最佳移栽基质,其移栽成活率达100%。为红花龙胆快速育苗与规模化种植提供技术参考。

不同移栽方式对红花龙胆幼苗生长的影响

为探索红花龙胆(Gentiana rhodantha)幼苗移栽的适宜方法,幼苗移栽时采用覆草、移栽14d后覆膜、搭建遮阳网、移栽前覆膜种4种处理,分析移栽后幼苗的生长情况。结果表明,移栽前覆膜处理的存活率最高,为(89±9.42)%,其次是移栽搭遮阳网处理,存活率为(88±3.74)%,最低的是覆草处理,存活率为(45±4.92)%。遮阳网、移栽前覆膜比覆草、移栽14d后覆膜的幼苗高,分枝数多,长势好,但遮阳网杂草较多,幼苗纤细,且存活率、长势均略低于移栽前覆膜。因此,移栽前覆膜是红花龙胆移栽的较好方法,二级分支与叶片数最多,与其他3种移栽方法差异显著。

Box-Behnken响应面法优化苗药红花龙胆总黄酮的提取工艺及其含量测定研究

目的探讨红花龙胆中总黄酮的提取工艺及其含量测定的方法,并采用比色法测定贵州不同产地红花龙胆药材中总黄酮的含量差异。方法通过单因素试验研究甲醇浓度、溶剂用量、回流时间对红花龙胆中总黄酮提取率影响;以此为基础,采用Box-Bohnken Design试验设计原理进行三因素三水平试验设计和响应面分析法优化提取工艺;采用比色法,于410 nm处测定药材中以芒果苷计总黄酮的含有量。结果红花龙胆药材中总黄酮的最佳提取工艺为甲醇浓度78%、溶剂用量20.2 mL、回流时间140 min,应用优化后的提取工艺总黄酮得率为10.48%,与理论值10.52%的相对标准偏差为0.74%;不同产地红花龙胆药材中总黄酮的含量差异显著,含量范围为9.57%~20.91%。结论Box-Behnken响应面优化红花龙胆中总黄酮的提取工艺稳定、准确可靠,建立的总黄酮含量测定方法操作简便、重复性好、结果准确,可为红花龙胆药材的质量评价及相关研究提供参考。

红花龙胆总多酚提取工艺优化及抗氧化活性检测

以红花龙胆全草为原料,采用超声辅助提取其多酚类化合物,通过单因素试验和响应曲面试验确定提取的最佳工艺,并进一步考察所得提取物的羟自由基清除能力和超氧阴离子自由基清除能力。结果表明,最佳提取工艺为:在提取时间30 min,乙醇体积分数49%,料液比1∶59(g/mL)的条件下,红花龙胆多酚得率为4.61%。其对羟自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率的IC50分别为0.324 mg/mL和0.315 mg/mL。