红车轴草异黄酮调控RAW264.7细胞焦亡作用研究

为评估红车轴草异黄酮提取物对RAW264.7细胞焦亡作用的影响,采用CCK-8法测定红车轴草异黄酮提取物对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出安全浓度范围;不同浓度红车轴草异黄酮提取物预处理细胞后,采用LPS和ATP作用RAW264.7细胞,并测定细胞活力、细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放水平和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)细胞焦亡相关酶活性和Caspase-1基因表达等指标。结果表明,2~8 mg/mL为红车轴草异黄酮提取物对RAW264.7细胞的安全浓度范围;与细胞对照组相比,LPS+ATP组细胞LDH释放水平、白细胞介素(IL-1β)分泌水平、Caspase-1活性和Caspase-1 mRNA表达极显著升高;2~8 mg/mL红车轴草异黄酮提取物预处理RAW264.7细胞后,细胞LDH释放水平、IL-1β分泌水平、细胞Caspase-1活性和Caspase-1 mRNA表达显著或极显著降低。本研究表明,红车轴草异黄酮提取物有调控LPS+ATP诱导的RAW264.7细胞焦亡作用。

红车轴草提取物中异黄酮定量方法的研究

目的 :对红车轴草提取物中异黄酮含量测定方法进行研究。方法 :反向高效液相色谱法进行含量测定 ,C18反相柱 ,MeOH CH3CN 0 .1%H3PO4 为流动相 ,检测波长 2 60nm。结果 :红车轴草提取物水解后的 4种苷元组分获良好分离 ,进样量 0 .0 2 4～ 0 .3 3 6μg与峰面积均成线性关系 ,异黄酮总含量测定结果重现性RSD =1.1%。结论 :为红车轴草提取物及制品提供一种简便、可靠。

红车轴草提取物中异黄酮成分的分析

目的:以高效液相色谱法对红车轴草中四种主要异黄酮物质(大豆黄素、染料木素、鹰嘴豆芽素B和鹰嘴豆芽素A)的含量进行测定。方法:高效液相色谱法的条件:反相C18柱(250mm×4.6mm),MeOH-CH3CN-H2O(3.7:1.3:5,V:V:V)为流动相,流速1.0ml/min,进样量20μl,柱温为室温,检测波长为260nm。样品前处理方法:称取一定量的红车轴草提取物样品加盐酸甲醇溶液(42:500,V:V)40ml,于85℃水浴中回流水解2h,冷却后用甲醇定容到50ml,匀后用0.45μm滤膜过滤,取滤液。结果:经高效液相色谱法测定,以保留时间定性,以峰面积定量,得出红车轴草(1#)中四种主要异黄酮物质的含量分别为:大豆黄素(0.43%)、染料木素(0.35%)、鹰嘴豆芽素B(4.79%)和鹰嘴豆芽素A(1.32%);而红车轴草(2#)中四种主要异黄酮物质的含量分别为:大豆黄素(0.60%)、染料木素(0.64%)、鹰嘴豆芽素B(9.29%)和鹰嘴豆芽素A(2.63%)。

红三叶草提取物中四种异黄酮的HPLC检测方法

本文旨在建立一种能同时检测红三叶草提取物中,采用HPLC法测定大豆苷元,染料木素,刺芒柄花素,鹰嘴豆素 A。使用BridgeC18 (250mm乘4.6mm,5μm)层析柱,将甲醇(A)和10mL的磷酸氢二钠(B)作为流动相,以1 mL/min的速度和10μL的进样速率,测定了四种异黄酮的含量,分别采用了洗脱梯度、波长和柱温。选择了40℃的柱温度、270 nm的检测波长、0~5min的洗脱梯度、20%~40%的 A洗脱工艺;5-20min,40%-75% A;20-23min,75%-100% A;23-26min,100% A;26-26.5min, A值为100%~20%;26.5-35min,20% A.研究发现,4种异黄酮含量在1~50μ g/mL时呈较好的线性关系(R2>0.999),保持时间稳定,相对标准偏差(R2>0.999)和相对标准偏差(RSD)在2%以下,加标回收率在96%~100.10%之间。所建立的测定方法满足了测定方法的需要,可以同时测定四种异黄酮,如鹰嘴豆素 A。

红车轴草提取物中异黄酮含量的高效液相色谱分析法的研究

建立了一种红车轴草提取物中异黄酮含量的高效液相色谱分析方法。采用日本岛津公司LC - 6AHPLC系统 ,Shim -packVP -DOS柱 (1 5 0mm× 4 6mmID ,5 μm) ,流动相MeOH -CH3 CN -H2 O(体积比 3 7∶1 3∶5 ) ,流速0 9mL·min-1 ,检测波长 2 6 0nm ,柱温 30℃ ,进样量 1 0 μL ;样品制备方法以 1 0mol L-1 HCI甲醇溶液在 85℃条件下水解 1 6h ,HPLC法测定异黄酮的含量 ;该法的RSD为 1 31 % (n =5 ) ,平均回收率为 96 5 %。

反相高效液相色谱法测定红车轴草提取物中异黄酮含量的研究

建立了二极管阵列检测器(DAD)测定红车轴草提取物中大豆黄素、染料木素、刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的反相高效液相色谱分析方法,结果表明:大豆黄素、染料木素、刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A分别在0.0068～0.027、0.0145～0.058、0.021～0.084、0.008～0.032mg/ml与峰面积呈良好线性关系,加样回收率分别为96.3%、99.2%、100.1%、102.9%,RSD分别为3.7%、4.8%、4.3%、1.6%。该方法准确、快速、稳定、重现性好。

微波辅助提取红车轴草异黄酮的工艺研究

采用密闭微波提取装置对红车轴草异黄酮成分进行提取工艺的研究。通过单因素和正交试验对红车轴草异黄酮提取工艺中乙醇浓度、微波功率、料液比、提取时间和提取次数等影响异黄酮提取率的因素进行探讨。红车轴草异黄酮的最佳提取工艺参数为:乙醇浓度70%,微波功率高火(750W),料液比1:15,提取时间1min,提取三次,异黄酮提取率可达到98.91%。与超声波提取、乙醇回流提取和索氏提取相比,微波提取具有提取速度快,选择性好及操作方便等特点。

红车轴草异黄酮化合物的分离鉴定

对国产红车轴草 (TrifoliumpratenseL .)乙醇提取物的乙酸乙酯部分进行化学成分研究。采用溶剂处理和各种色谱方法从中分离得到了 8个异黄酮化合物 ,并利用波谱技术鉴定了结构。这 8个化合物分别为樱黄素、德鸢尾素、鹰嘴豆芽素A、芒柄花素、红车轴草素、染料木素。

红车轴草异黄酮提取工艺的研究

通过单因素实验和正交实验对红车轴草异黄酮提取工艺中乙醇浓度、温度、料液比、提取时间、提取次数等影响异黄酮提取率的因素进行探讨,确定红车轴草异黄酮最佳提取工艺参数为:乙醇浓度80%,温度80℃,料液比1:15,提取3次,每次1h,异黄酮提取率可达91.90%。

红车轴草总异黄酮正交提取工艺和大孔树脂吸附分离性能的研究

目的以红车轴草总异黄酮为目的物,筛选最佳提取条件和吸附树脂。方法采用单因素和正交实验法筛选最佳提取工艺,采用静态吸附脱附法筛选最佳树脂。结果红车轴草总异黄酮最佳提取工艺为:提取温度为80℃,提取时间为1h,料液比为1∶12,碱水pH为11,提取2次,树脂D103是有较好的吸附脱附效果。结论采用此法可较好地提取、富集、纯化红车轴草总黄酮。

大孔吸附树脂对红车轴草中总异黄酮的提取纯化工艺研究

目的:筛选红车轴草中异黄酮的最佳提取条件,研究大孔树脂富集、纯化总异黄酮的工艺条件与参数。方法:以总异黄酮的含量和重量为指标,采用正交试验筛选红车轴草的最佳提取方法和吸附条件。结果:红车轴草的最佳提取工艺为20倍量的70%乙醇,提取2次,每次1.5h,洗脱条件为以4倍量柱体的水和30%乙醇洗去杂质,再以4倍量的90%乙醇洗脱,收集总异黄酮的含量和得率最高;最佳上柱条件为药液浓度1∶4,径高比1∶20,药液洗脱流速20mL·min-1。结论:采用此法可较好地富集、纯化红车轴草中的总异黄酮。

红车轴草中总异黄酮提取精制工艺研究

红车轴草Trifolium pratense L.为豆科车轴草属多年生草本植物,又名红三叶、红花苜蓿,三叶草.全国大部分地区均产.有抗肿瘤(胃癌、乳腺癌)和治疗骨质疏松、更年期综合症等作用[1],红车轴草中异黄酮具有双向调节作用[2].因此开发红车轴草中异黄酮作为临床用药具有广阔的市场前景.为了找到红车轴草的最佳提取工艺,本实验采用HPLC法、正交试验及大孔树脂精制制备红车轴草中总异黄酮.

红车轴草异黄酮对维甲酸致小鼠骨质疏松的预防作用

目的研究红车轴草异黄酮对维甲酸致小鼠骨质疏松的预防作用,并探讨其主要作用机制。方法维甲酸(90mg.kg-1)致小鼠骨质疏松模型,红车轴草异黄酮(50、100、200mg·kg-1)灌胃给药,实验过程监测体重,2周后以比色法测定血清钙、磷含量和碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性,竞争放射免疫法测定血清中骨钙素(BGP)和雌二醇(E2)含量,取股骨进行骨组织形态学观察。结果维甲酸可引起高转换型骨质疏松,红车轴草异黄酮可升高E2值,降低P、ALP、TRAP、BGP水平。结论红车轴草异黄酮对维甲酸致小鼠骨质疏松有一定的预防作用,其机制可能与其减缓雌激素水平降低,抑制骨高转换有关。

红车轴草中异黄酮的指纹图谱研究

目的 :建立红车轴草中异黄酮类的指纹图谱及定性定量分析方法。方法 :反相高效液相法。结果 :不同产地的红车轴草中异黄酮类的峰高相同或相近 ,但主成分峰高的比值不同。结论 :可利用主成分的峰高或峰面积比值及峰高峰面积值控制红车轴草及其制剂的质量。

红车轴草异黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松防治作用的实验研究

目的探讨红车轴草异黄酮对去卵巢大鼠引起的大鼠骨质疏松症的防治作用。方法采用切除大鼠双侧卵巢方法建立大鼠骨质疏松模型,以尼尔雌醇作阳性对照,采用放射免疫法检测实验大鼠血清雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、骨钙素(BGP)、白细胞介素6(IL6),用生物化学法检测大鼠血浆抗酒石酸盐酸磷酸酶(TRAP)。同时用定量超声检测大鼠股骨近端超声振幅衰减(BUA)及大鼠股骨骨干重和骨灰重。结果红车轴草总异黄酮可显著提高E2水平,降低LH及BGP、TRAP和IL6活性,显著提高实验大鼠股骨干重、灰重。同时大鼠股骨近端BUA明显升高。结论红车轴草异黄酮具有提高雌激素作用,可有效抑制骨吸收,降低骨转化率,加强成骨细胞活性,增加骨密度。对去卵巢引起的大鼠骨质疏松症具有明显的防治作用。

红车轴草异黄酮对肉鸡生产性能及肉品质的影响

为了研究红车轴草(Trifolium pratense)异黄酮对肉鸡生长、屠宰性能及肉品质的影响,将180羽1日龄AA肉仔鸡分成3组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组,分别饲喂基础日粮、基础日粮+红车轴草异黄酮(10mg/kg)、基础日粮+红车轴草异黄酮(20mg/kg)。结果显示,红车轴草异黄酮可以提高肉鸡的日增体质量(P<0.05)和屠宰性能(P>0.05),降低血清中甘油三酯、总胆固醇和腹脂率(P<0.05),减少了储存第6天肉中丙二醛含量(P<0.05),降低了肉品滴水损失和剪切力(P>0.05)。表明红车轴草异黄酮能够提高肉鸡生长性能和屠宰性能,改善肉品品质,添加20mg/kg时肉鸡日增长速度最快。

红三叶草提取物中四种异黄酮的HPLC检测方法

本研究的目的是建立一种可以同时测定红三叶草提取物中大豆苷元、染料木素、刺芒柄花素和鹰嘴豆素A含量的高效液相色谱检测方法。采用χBridge C18(250 mm×4.6 mm,5μm,Waters)色谱柱,以甲醇(A)和10 mmoL磷酸氢二钠溶液(B)为流动相,流速为1 mL/min,进样量为10μL,在不同的洗脱梯度、检测波长和柱温下检测四种异黄酮的含量。确定了最佳色谱条件:柱温为40℃,检测波长为270 nm,洗脱梯度为:0~5 min,20%~40%A;5~20 min,40%~75%A;20~23 min,75%~100%A;23~26 min,100%A;26~26.5 min,100%~20%A;26.5~35 min,20%A。结果表明:四种异黄酮在浓度为1~50μg/mL时具有良好的线性关系(R2>0.999),保留时间稳定,精密度和稳定性的相对标准偏差(RSD)均小于2%,加标回收率为96%~100.10%。建立的检测方法符合分析方法学评价的要求,可用于同时检测红三叶草提取物中的鹰嘴豆素A等四种异黄酮。

红车轴草异黄酮对去势大鼠骨质疏松影响的实验研究

目的:观察红车轴草异黄酮对绝经后骨质疏松症(PMO)的影响。方法:将雌性大鼠去势复制成PMO动物模型,并随机分为6组:即大、中、小剂量红车轴草异黄酮组、阴性对照组、尼尔雌醇组和假手术组。灌胃给药后,用放射免疫法测定大鼠血清雌三醇(E3)、雌二醇(E2)及骨钙素(BGP)水平,用定量超声法测定股骨超声振幅衰减(BUA),并测定大鼠股骨重量以计算股骨干重指数及灰重/干重。结果:红车轴草异黄酮能使去势大鼠血清E3水平升高,血清BGP水平降低,并提高股骨重量和超声振幅衰减。结论:红车轴草异黄酮通过提高血清雌激素水平,增加成骨细胞活性,降低骨高转换率以及减少骨量丢失等多种途径,能有效防治绝经后骨质疏松症。

红车轴草异黄酮抑制小胶质细胞活化保护多巴胺能神经元的研究

目的探讨从红车轴草分离的5种异黄酮芒柄花素(formononetin)、大豆黄素(daidzein)、毛蕊异黄酮(calycosin)、红车轴草素(pratensein)、德鸢尾素(irilone)对脂多糖(LPS)诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用。方法利用LPS建立多巴胺能神经元损伤的细胞模型,利用液闪测定法检测[3H]DA摄取力以评价多巴胺能神经元的功能,利用免疫细胞化学技术进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)染色观测多巴胺能神经元的形态和数目,利用免疫细胞化学技术进行OX-42染色观测小胶质细胞的形态和数目。NO测定依据Griess反应,TNF-α测定采用酶联免疫法,超氧自由基测定采用细胞色素C还原法。结果从红车轴草分离的5种异黄酮均以剂量依赖方式减轻大鼠中脑原代混合培养体系中LPS诱导的多巴胺摄取力的下降和多巴胺能神经元数目的下降。而且,这5种异黄酮还抑制中脑混合培养体系和小胶质细胞纯化体系中LPS诱导的小胶质细胞的活化和TNF-α、NO和超氧自由基的生成。并且,这5种异黄酮作用强弱的顺序依次为:pratensein>daidzein>calycosin>formononetin>irilone。结论从红车轴草分离的5种异黄酮对LPS诱导的多巴胺能神经元的损伤均具有不同程度的保护作用,且保护作用强弱的顺序依次为:pratensein>daidzein>calycosin>formononetin>irilone,抑制小胶质细胞的活化是其作用机制之一。