自然诱变品种红金银花中木犀草苷含量初探

目的应用HPLC对自然突变品种红金银花中化学成分进行初步分析,建立了其中木犀草苷的分析方法并测定其含量。方法选用Venusil XBP-Cl8柱,以乙腈-磷酸-水为流动相进行梯度洗脱,采用Agilent DAD检测器(238 nm)对自然诱变品种红金银花中木犀草苷进行了初步分析测定。结果木犀草苷的保留时间为39.50 min,定量线性范围0.035 5～ 0.284 0μg(r=0.999 9),精密度和稳定性实验RSD均小于3%,加样回收率达98.85%。结论 建立的红金银花中有效成分木犀草苷检测方法灵敏度高、稳定性和重现性好;红金银花中木犀草苷平均含量为0.54 mg/g。

外植体类型和植物生长调节剂浓度对红金银花愈伤组织诱导的影响

以红金银花(Lonicera japonica var.chinensis)顶芽、当年生幼茎和叶片为试验材料,利用仿自然气候的培养条件,采用L9(34)正交试验设计,考察了外植体类型和培养基中添加植物生长调节剂的浓度对愈伤组织诱导的影响。结果表明,外植体类型对红金银花组织培养的污染率及愈伤组织的诱导率均有影响,以顶芽为外植体时污染率低,愈伤组织诱导率高,为最佳外植体。优化后的愈伤组织诱导培养基中KT、6-BA、α-NAA浓度分别为1.5、1.5、0.5 mg/L。

正交试验法优选红金银花中绿原酸提取工艺的研究

为优化红金银花中绿原酸的提取工艺,本研究采用正交试验法设计对红金银花中绿原酸的提取工艺进行优化,考察了不同的提取工艺对金银花中绿原酸提取率的影响。结果显示,正交试验优选出红金银花中绿原酸的提取工艺的最佳条件,即提取时乙醇的用量为药材的10倍,乙醇浓度为75%,提取次数为2次,提取时间为2h。表明研究试验结果可靠,以优化的工艺所得金银花中绿原酸提取率高,有利于大生产。

红金银花组培快繁技术研究

以红金银花顶芽为试材,利用仿自然气候的培养条件,通过诱导生芽、增殖培养、诱导生根对红金银花进行离体培养,研究了红金银花组培快繁技术体系。结果表明:红金银花适宜的诱导生芽培养基为MS+KT 1.0mg/L+6-BA 2.0mg/L+α-NAA 0.1mg/L,适宜的增殖培养基为MS+KT 1.5mg/L+6-BA 1.5mg/L+α-NAA 0.3mg/L,适宜的生根培养基为1/2MS+α-NAA 2.0mg/L+IAA 0.15mg/L和1/2MS+α-NAA 2.0mg/L+IAA 0.20mg/L。

红金银花不同外植体组织培养直接成苗培养基筛选

以红金银花顶芽、当年生幼茎、叶片为试验材料,利用仿自然气候的培养条件,通过对培养苗形态指标的综合分析,对3种红金银花外植体组织培养一次性成苗的培养基进行筛选。结果表明:顶芽为最佳外植体,其次是叶片和幼茎。最适合顶芽的培养基为MS+1.0 mg/LKT+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L-αNAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂粉+0.3%活性碳,pH 6.0;最适合幼茎的培养基为MS+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L-αNAA+30 g/L蔗糖+8g/L琼脂粉+0.3%活性碳,pH 6.0;最适合叶片的培养基为MS+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L6-BA+0.3 mg/L-αNAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂粉+0.3%活性碳,pH 6.0。

多效唑预处理对红金银花直接培养成壮苗的影响

用浓度为0(CK)、200、500mg/kg的多效唑分别对盆栽的红金银花提前1个月灌根处理,其后将经过多效唑处理的红金银花顶芽、带侧芽的茎段灭菌后,接在最适合顶芽、带侧芽的茎段诱导的培养基上进行培养,以期研究不同浓度的多效唑对盆栽红金银花壮苗的影响。结果表明:10～15d后,各处理的外植体均萌动,愈伤组织逐渐出现;35～45d后,叶、茎抽生;60～70d后,用多效唑预处理抽生的枝条比对照多,节间较短,叶色浓绿,叶面积较对照小,各处理的组培苗长势差异显著,以200mg/kg处理所成苗茎叶粗壮、500mg/kg次之,对照最差。

红金银花组织培养外植体灭菌的研究

在单因素预试验的基础上,采用正交试验设计,筛选出了植物组织培养中红金银花外植体最佳灭菌方法,总结出外植体的类型、酒精浸泡时间、升汞质量分数、升汞浸泡时间等对红金银花外植体的污染程度及成活率均有显著影响。采用L8(4×24)正交试验表明,对红金银花外植体先用75%的酒精消毒30 s,再配合0.2%的升汞溶液处理5 m in,能达到理想的灭菌效果。

红金银花茎段愈伤组织的诱导

以红金银花当年生幼嫩茎段为试材,采用正交实验设计,研究了红金银花愈伤组织诱导和增殖培养的影响因素。结果表明:6-BA、KT促进了愈伤组织的诱导,提高了出愈率;当NAA、KT分别为0.4、1.0mg·L^(-1)时最有利于愈伤组织的增殖培养。不同季节外植体愈伤组织诱导效果不同,春季采集的当年生的幼嫩茎段更有利于愈伤组织的诱导;MS培养基中添加6.5mg·L^(-1)琼脂比较适宜;红金银花愈伤组织诱导最适宜的培养基为MS+KT 1.0mg·L^(-1)+NAA 0.2mg·L^(-1)+6-BA 1.5mg·L^(-1);愈伤组织增殖培养最适宜的培养基为MS+6-BA 1.5mg·L^(-1)+NAA 0.4mg·L^(-1)+KT 0.1mg·L^(-1)。

红金银花组织培养中防褐化技术实验

在红金银花的组织培养中,防止组织褐变是培养成功与否的关键技术之一.本实验研究表明：红金银花的未木质化茎段和顶芽较适宜作组织培养的外植体;外植体木质化和半木质化茎段以4~6 mm为宜,未木质化和顶芽茎段的大小以操作方便为宜;0.1%Vc和0.3%的活性炭在红金银花的组织培养中可有效地防止外植体组织褐化;2 mg/L 6-BA易引发褐变,2 mg/L KT和2 mg/Lα-NAA对组织褐变影响与对照相比差异不大;采用仿自然气候（20℃-1500 Lx-4 h-85%→25℃-2000 Lx-8 h-85%→20℃-1500 Lx-4 h-85%→18℃-0 Lx-8 h-85%）培养可有效抑制褐变的发生.

红金银花组织培养试验研究

以红金银花的顶芽为外植体,采用正交试验设计,对红金银花顶芽的初代培养、继代培养、生根培养进行了研究。结果表明：初代培养的最适培养基为：MS＋6-BA（1.0 mg/L）＋NAA（0.1~0.2 mg/L）,最适蔗糖浓度为20.0 g/L;继代培养的最适培养基为MS＋6-BA（1.5 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）＋GA3（0.5 mg/L）;生根培养以1/2MS＋6-BA 0.25 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋活性炭1.0 g/L,即可得到理想的生根苗。

诱导红金银花愈伤组织的影响因素研究

以红金银花顶芽和叶片为实验材料，采用L16（4^4×2^3）混合水平的正交试验设计，对红金银花诱导愈伤组织进行了研究，结果表明红金银花外植体类型、培养基类型、6-BA浓度、NAA浓度以及蔗糖浓度和培养温度对愈伤组织的产生均有影响；顶芽诱导率高于叶片诱导率，MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L为最佳培养基；最适蔗糖浓度为30．0g／L，最适温度为23℃～25℃。

红金银花离体快繁技术

采用不同诱导、增殖和生根等培养基进行的红金银花离体快繁技术的研究结果表明:丛生芽诱导以MS+6-BA2.0～3.0mg/L+NAA0.2 mg/L培养基为好;以MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L +CW10%为增殖培养基可以获得理想的效果,增殖倍数达4.9倍;在不含任何激素的1/2MS+0.15%活性炭培养基上即可形成较发达的根系,生根率达100%;试管苗移栽对基质要求不严,移栽到疏松透气的蛭石+珍珠岩+园土(1∶1∶1)混合基质中,成活率可达92%.

HPLC测定不同品种金银花及叶中木犀草苷含量

目的：比较不同品种之间金银花及叶中黄酮类成分木犀草苷含量的差异.方法：采用Diamonsil-C18色谱柱（150 mm ×4.6 mm,5μm）,乙腈-0.5％冰醋酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长350 nm.结果：木犀草苷在0.0156～0.5 g·L-1呈良好线性关系,平均回收率为96.88％.结论：1～10号金银花样品中木犀草苷的含量在0.08％ ～0.22％之间,均高于《中国药典》规定的0.050％,其中亚特良种金银花（意大利种质）及九丰一号含量较高.红金银花中木犀草苷含量为0.11％,符合《中国药典》该指标要求.金银花叶中木犀草苷的含量分别为0.75％,0.76％,明显高于花中木犀草苷的含量.