污水中红霉素抗性菌的特性

针对抗生素过度使用对生态环境和人类健康造成潜在威胁的问题,采用微生物的分离培养方法和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,对北方某污水处理厂中各个处理单元中红霉素残留浓度、抗性菌、抗性基因的特性进行了翔实的研究。研究结果显示,在污水中检测到红霉素浓度7.5~86.9μg/L,去除率为81.4%~89.3%。进水、出水中残留的红霉素抗性菌(erythromycin antibiotic resistance bacteria,EARB)的浓度分别在6.9×10^(5)~8.4×10^(5)CFU/mL和1.8×10^(5)~3.5×10^(5)CFU/mL。单一红霉素抗性菌比例为45.0%,双重抗生素抗性菌株的比例为40.84%,三重抗生素抗性菌株的比例为14.16%。抗性菌对6种抗生素抗性也表现出不同的抗性,多重抗性菌表现出。抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)中浓度在1.3~9.5 lg(copies/L)。1株单一抗性菌未检测到ereA、ereB、mefA/mefE和ermB的基因。在26株磺胺+红霉的抗性菌中,2株未检测到int2,各有1株未检测到int1、ereB。三重抗性菌中,4株未能检测到tetQ,各有2株未能检测到tetX和int2;各有1株未能检测到int1、mefA/mefE、ereB。研究结果表明污水中红霉素残留量高,EARB具有多重抗生素抗性,多重抗性菌未检测到对应的目的ARGs,推测环境中长期残留多种抗生素,游离多重ARGs对抗性菌的演变产生具有重要影响,与抗性菌抗性存在相应的关系。

红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定

将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在含红霉素的平板上各筛选约 2 0 0个转化子 ,其中有 3个在抗性板上生长良好 ,分别命名为 p LP42、p LP1 b和 p LP44。对其中的 p LP42酶切分析表明 ,其含有约 3.0 kb的红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)染色体 DNA片段 ,它的载体部分发生了缺失。以 p UC1 8为载体 ,将 p LP42的 1 .7kb- Kpn I片断克隆、测序、经与 Genebank的erm E基因顺序比较 ,证实已克隆了 Saccharopolyspora

转基因抗草甘膦油菜籽中FMV 35S启动子的检测研究

对 FMV3 5 S和 FMV3 4S、Ca MV3 5 S启动子的 DNA序列进行了同源性分析 ,并设计引物对转基因抗草甘膦油菜籽中转入的 FMV3 5 S启动子进行了检测 .从 7船进口加拿大油菜籽检出 FMV3 5 S启动子基因 .

波氏假丝酵母启动子的克隆及新霉素基因的表达

报道了波氏假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）启动子的克隆，将克隆的启动子与 Ｎｅｏ基因重组构建了 含Ｎｅｏｒ基因的表达载体ＹｅｐＮＰ１８１，转化波氏假丝酵母，实现了Ｎｅｏｒ基因在波氏假丝酵母中的表达，使波氏 假丝酵母转化子能在含Ｇ４１８的抗性培养基上生长从而建立了Ｎｅｏｒ基因──Ｇ４１８选择系统，为外源基因在 波氏假丝酵母中表达创造了条件．

电离辐照降解抗生素菌渣中红霉素的研究

在pH为3的酸性溶液下,提出了一种高效、环保的降解红霉素菌渣中抗生素残留的方法。红霉素A是红霉素菌渣中的主要药物残留成分,在酸性溶液中不稳定。在2 kgy辐射的γ /酸体系中,红霉素A可在1.5小时内基本完全降解。同样,红霉素菌渣在γ /酸体系中以40 kgy辐照,利用HPLC-IT-TOF分析中间产物,同时测定抑菌活性和抗性基因去除率。结果表明,γ辐射能有效地降解和灭活红霉素菌渣中的药物残留。此外,该方法可使红霉素菌渣的抗菌活性降低一半,抗性基因的去除率在76.0%~92.6%之间,可为红霉素菌渣的无害化研究提供技术支持。

粗毛栓菌(Trametes gallic)基因启动子的分离与鉴定

粗毛栓菌 (Trametesgallic)总DNA经Sau3AI酶切后插入到启动子探针型载体pSUPV8的BamHI位点 ,在含氨苄青霉素与潮霉素双抗平板上筛选到 8个潮霉素抗性(Hygr)重组子 (命名为 pTP1～ 8) ,其插入片段大小为 0 .5～ 1.7kb ,抗性水平为 0 .15× 10 - 3 ～0 .35× 10 - 3 g/mL .对 pTP6进行酶切分析表明 ,插入片段中含有KpnI ,XbaI和SacI位点各一个 ,用限制酶SacI和XbaI去掉其 5’端 0 .7kb和 1.2kb片段后 ,其潮霉素抗性由 0 .2 5×10 - 3 g/mL均降为 0 .15× 10 - 3 g/mL .将TP5片段与粗毛栓菌总DNA进行Southern杂交 ,结果证明 ,TP5片段来源于粗毛栓菌总DNA .对片段TP5的 3’端进行序列分析 。

病程相关基因启动子片段与GUS的融合基因在拟南芥中的表达

PRI是拟南芥(Arabidopsis thaliana L．)系统获得抗性的一个标志基因。利用PCR技术，从拟南芥中扩增并克隆了PRJ基因的启动子片段。将该启动子片段与GUS报告基因拼接，构建成含有PRJ-GUS融合基因的重组表达质粒。经根癌农杆菌介导转化，得到了转基因的拟南芥植株。用已知的系统获得抗性激活剂处理转基因植物，检测到GUS活性。因此，这一转基因体系可以作为一种简便、灵敏的实验体系以筛选激活植物系统获得抗性的化合物。

过表达内质网小分子热激蛋白提高拟南芥的衣霉素抗性

内质网小分子热激蛋白是热激蛋白家族成员,具有分子伴侣活性.当植物受到内质网胁迫(ER-stress)时,内质网小分子热激蛋白具有缓解内质网胁迫的功能.我们将CaMV35S启动子驱动的内质网小分子热激蛋白基因AtHSP22.0导入拟南芥,Northern-blotting印迹分析表明,内质网小分子热激蛋白在转基因拟南芥中呈现组成型表达.转基因株系衣霉素抗性强于对照,说明AtHSP22.0的过量表达增强了拟南芥的衣霉素抗性,缓解了ER-stress.

高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究

利用农杆菌介导的转化方法对1个籼稻品种和3个粳稻品种进行了转化。所用质粒为pCAMBI1300,其上带有马铃薯蛋白酶抑制剂基因PinⅡ和高效启动子ACTⅠ以及调节子Intron。通过添加有利于转化的物质乙酰丁香酮及影响转化的各因素(农杆菌的培养方法、共培养天数、愈伤组织诱导方法及继代次数)进行综合优化后,建立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。将成熟胚用pCAMBI1300/LBA4404浸染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生率最高达51 8%(粳稻)和31 5%(籼稻),转化植株再生率最高达67 6%(粳稻)和47 5%(籼稻)。初筛苗中PCR阳性苗得率最高达33 3%(粳稻)和27 4%(籼稻)。PCR结果初步表明PinⅡ基因已整合到水稻基因组中。田间抗虫试验初步表明,阳性苗虫害率低于其受体亲本虫害率。本研究还在转基因水稻中发现了性状明显变异的植株,是进行水稻遗传背景分析和优良性状利用的宝贵材料。

红霉素生物合成的分子生物学

近年来 ,国外对大环内酯类抗生素生物合成和基因工程的研究非常迅速 ,不仅认识了许多抗生素生物合成的过程 ,而且利用基因工程技术改造抗生素生物合成基因 ,合成了 10 0多种非天然的“天然”抗生素。抗生素生物合成的分子生物学是抗生素基因工程的基础。本文全面介绍了大环内酯类抗生素的代表———红霉素生物合成分子生物学的历史、现状及发展趋势。

转P_(SAG12)-ipt基因结缕草的获得及其衰老特性分析

将拟南芥中衰老特异启动子PSAG12控制下的ipt基因导入结缕草胚性愈伤组织,经抗性筛选、PCR扩增和Southern杂交,共获得37株转ipt基因植株.其中有6个转基因株系衰老延缓, 绿色期延长,生育后期其体内细胞分裂素、可溶性糖、可溶性蛋白等含量明显高于野生型,而脱落酸的含量明显下降.通过测定离体叶片培养过程中光合速率的变化,也证实了转基因植株叶片衰老速度明显减慢.其中T-1和T-12两个转基因株系能延长绿色期达25d以上.

大豆抗病相关基因SR1正反义植物表达载体的构建及遗传转化研究

实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分析,证明抗性植株中整和了SR1基因,RT-PCR分析进一步表明正义和反义基因皆能转录为完整的mRNA,经疫霉根腐接种及抗病性鉴定表明,转反义基因株系和未转基因株系均轻微感病,而转正义基因株系始终没有出现感病症状。

新疆转基因抗虫棉研究现状与建议

针对目前转基因抗虫棉抗性的强度、持久性、时空性等问题,提出了筛选广谱性抗虫基因、培育转多基因抗虫棉、采用特异启动子调控外源抗虫基因在棉株体内的高效表达、培育多种类型的单抗品种轮换种植或混系种植、加强抗性预防与治理等措施以提高转基因抗虫棉抗虫性和持久性的建议,从而为转基因抗虫棉在新疆的推广应用提供理论指导。

顶头孢霉pcbAB-pcbC双向启动子区域的克隆与应用

用PCR方法从丝状真菌顶头孢霉中克隆出全长 1 3kb的pcbAB_pcbC双向启动子DNA片段 ,通过转化子对博莱霉素的抗性证明了该启动子在顶头孢霉中的双向启动功能。另外 ,利用所克隆的pcbAB_pcbC双向启动子构建了一个用于顶头孢霉转化的质粒pYG13,并成功地将该质粒转化入顶头孢霉。pYG13含有博莱霉素抗性基因和透明颤菌血红蛋白基因 (vgb) ,Southern杂交和CO结合实验分析显示vgb整合到顶头孢霉的基因组DNA中并表达了有活性的透明颤菌血红蛋白。

细菌中优化冷激启动子的高通量筛选方法的建立

为了优化冷激启动子,分别利用卡那霉素抗性基因kan和荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因建立了两种高通量筛选方法。抗性筛选方法是通过观察菌落形态变化判断启动子强弱,适用于筛选强启动子。荧光筛选方法中,对转化子进行平板诱导,使用荧光显微镜拍摄菌落荧光,Matlab软件计算每一个菌落的亮度,实现高通量筛选,操作简单,精确度较好。

瘦素基因启动子区-2548G/A功能多态性与抗精神病药源性肥胖的相关分析

目的 探讨瘦素基因启动子区 - 2 5 4 8G/A功能多态性是否与首次治疗精神分裂症患者的抗精神病药物 (APS)急性期治疗导致的体重增加相关。方法 采用聚合酶链反应 限制片段长度多态性 (PCR RFLP)技术分析 12 8例患者 (男 6 1例 ,女 6 7例 ) - 2 5 4 8G/A等位基因和基因型分布频率 ,APS(利培酮或氯丙嗪 )单药治疗 10周 ,治疗前后每周测体重和体重指数 (BMI) ,采用MRI测治疗前后腹部脂肪分布 (30例 ) ,分析等位基因和基因型与基础体重指标和其变化值的相关性 ;同时分析 38名性别、年龄和BMI相匹配的健康对照者 ,其中 2 2例进行MRI扫描。结果 治疗后患者体重增加是基础体重的 (6 .2± 5 .7) % ,腹部脂肪增加是基础腹部皮下脂肪 (SUB)的 (38.5± 4 2 ) %、腹内脂肪的 (4 0 .0± 4 1.2 ) % ;- 2 5 4 8G/A等位基因和基因型在患者组和对照组分布频率差异无显著意义 ;在体重增加≤ 7%和 >7%患者组等位基因和基因型分布频率差异有非常显著意义 (χ2 =7 5 2 9,df =1,P =0 .0 0 6 ;OR =1.94 1;95 %CI:1.175～ 3.2 0 7) ;基因型对患者组或对照组的基础体重指标无显著影响 ;与携带G等位基因患者相比 ,AA基因型携带者治疗后BMI(P =0 .0 0 3)和SUB(P =0 .0 0 9)明显增加。结论 瘦素基因启动子区 - 2 5 4

导入昆虫抗菌肽基因的烟草的开发

农林水产省农业生物资源研究所计划调整部主任研究官大岛正弘、该研究所抗性基因研究室主任大桥祐子,东京大学药学部教授名取俊二等成功地开发出导入了昆虫抗菌肽基因的重组烟草,并用重组体确认了对2种病害细菌的抗性。期望它对减轻出于细菌感染等而发生的软腐病害方面起作用。 大岛等导入烟草的杀菌肽称为IA,是名取等从苍蝇蛹中分离克隆出来的。由39个氨基酸构成,在改变细菌细胞膜透性基础上显示杀菌效果。

水稻穗萌抗性与OsVP1基因启动子序列及其表达水平的关系

以易穗萌的冈46B、穗萌抗性好的桂R106和深97B3个品种为材料,比较研究了穗萌抗性不同的水稻品种新鲜种子胚中OsVP1基因的表达水平及OsVP1基因的启动子序列差异。结果表明,在开花受粉后不同时间的新鲜种子胚中,桂R106和深97B中OsVP1及受其调控的下游基因OsEM的表达水平均高于冈46B;且与冈46B相比,桂R106和深97B中OsVP1基因的表达对ABA更敏感。比较3个品种的OsVP1基因启动子序列,发现易穗萌的冈46B仅有一种启动子序列,而抗穗萌的桂R106和深97B有2种类型启动子序列,其中一种与冈46B的一样,另一种与冈46B中OsVP1启动子序列相比有3处碱基差异,推断桂R106和深97B中可能存在至少2个OsVP1基因拷贝。这可能是桂R106和深97B中OsVP1基因表达水平高于冈46B,进而导致其对穗萌的抗性强于冈46B的主要原因。