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嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究
被引量:
1
1
作者
简思杰
晁嘉
+4 位作者
孙薇
陈春琳
陆娟
刘勇
刘祥
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2023年第4期876-884,共9页
【目的】评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;...
【目的】评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫;Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价;ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能;组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性,不同菌株间亲缘关系较近,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近;AHA2991的最佳诱导条件为:菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度0.1 mmol/L,在28℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性,其效价为1∶800;体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用,滴度可达1∶3200;ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫;组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性,有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。
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关键词
嗜水气单胞菌
外膜蛋白AHA2991
红鲫血浆
组织病理学
主动免疫
下载PDF
职称材料
嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的原核表达、纯化与免疫原性研究
被引量:
3
2
作者
简思杰
晁嘉
+4 位作者
孙薇
陈锐
丁锐
陈琛
刘祥
《河南农业科学》
北大核心
2022年第11期135-144,共10页
为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性,依据AHA1182氨基酸序列,采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系;构建AHA1182原核表...
为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性,依据AHA1182氨基酸序列,采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系;构建AHA1182原核表达菌株并确定最佳诱导表达条件;采用包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化方法获得AHA1182蛋白并免疫红鲫;利用Western blot检测红鲫抗AHA1182蛋白血清的特异性与效价;采用酶联免疫吸附(ELISA)法模拟红鲫抗AHA1182蛋白抗体血清与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;通过测定酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性与细胞吞噬作用,评价非特异性免疫;利用组织病理学切片探究AHA1182蛋白免疫对红鲫内脏的影响。结果显示,AHA1182蛋白家族在不同菌株间均具有亲缘性,尤其在气单胞菌间亲缘关系较近,由此推测,AHA1182蛋白抗血清具有交叉免疫保护作用;成功克隆、表达、纯化AHA1182,最佳诱导条件:菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG终浓度为0.5 mmol/L,在28℃条件下诱导8 h;红鲫AHA1182蛋白抗血清具有良好的特异性,AHA1182蛋白抗体与嗜水气单胞菌特异性结合(滴度可达1∶3200);AKP、ACP、细胞吞噬作用均显示,AHA1182蛋白可激活红鲫非特异性免疫。从组织病理学切片可以看出,AHA1182蛋白对红鲫内脏结构无影响。综上,嗜水气单胞菌AHA1182蛋白具有良好的免疫原性。
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关键词
嗜水气单胞菌
外膜蛋白AHA1182
原核表达
免疫原性
红鲫血浆
组织病理学切片
主动免疫
下载PDF
职称材料
题名
嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究
被引量:
1
1
作者
简思杰
晁嘉
孙薇
陈春琳
陆娟
刘勇
刘祥
机构
阜阳师范大学生物与食品工程学院
陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所
出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2023年第4期876-884,共9页
基金
国家外国专家局项目(GDT20186100426)
安徽省教育厅科学研究重点项目(2022AH051330)
+1 种基金
陕西省科技厅面上项目(2022JM-120)
阜阳师范大学人才项目(2022KYQD0003)。
文摘
【目的】评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫;Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价;ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能;组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性,不同菌株间亲缘关系较近,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近;AHA2991的最佳诱导条件为:菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度0.1 mmol/L,在28℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性,其效价为1∶800;体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用,滴度可达1∶3200;ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫;组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性,有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。
关键词
嗜水气单胞菌
外膜蛋白AHA2991
红鲫血浆
组织病理学
主动免疫
Keywords
Aeromonas hydrophila
Outer membrane protein AHA2991
Carassius auratus plasma
Histopathology
Active immunity
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的原核表达、纯化与免疫原性研究
被引量:
3
2
作者
简思杰
晁嘉
孙薇
陈锐
丁锐
陈琛
刘祥
机构
陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所
阜阳师范大学生物与食品工程学院
陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心
陕西理工大学秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育)
陕西省资源生物重点实验室
出处
《河南农业科学》
北大核心
2022年第11期135-144,共10页
基金
陕西省科技厅面上项目(2022JM-120)
国家外国专家局项目(GDT20186100426)。
文摘
为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性,依据AHA1182氨基酸序列,采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系;构建AHA1182原核表达菌株并确定最佳诱导表达条件;采用包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化方法获得AHA1182蛋白并免疫红鲫;利用Western blot检测红鲫抗AHA1182蛋白血清的特异性与效价;采用酶联免疫吸附(ELISA)法模拟红鲫抗AHA1182蛋白抗体血清与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;通过测定酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性与细胞吞噬作用,评价非特异性免疫;利用组织病理学切片探究AHA1182蛋白免疫对红鲫内脏的影响。结果显示,AHA1182蛋白家族在不同菌株间均具有亲缘性,尤其在气单胞菌间亲缘关系较近,由此推测,AHA1182蛋白抗血清具有交叉免疫保护作用;成功克隆、表达、纯化AHA1182,最佳诱导条件:菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG终浓度为0.5 mmol/L,在28℃条件下诱导8 h;红鲫AHA1182蛋白抗血清具有良好的特异性,AHA1182蛋白抗体与嗜水气单胞菌特异性结合(滴度可达1∶3200);AKP、ACP、细胞吞噬作用均显示,AHA1182蛋白可激活红鲫非特异性免疫。从组织病理学切片可以看出,AHA1182蛋白对红鲫内脏结构无影响。综上,嗜水气单胞菌AHA1182蛋白具有良好的免疫原性。
关键词
嗜水气单胞菌
外膜蛋白AHA1182
原核表达
免疫原性
红鲫血浆
组织病理学切片
主动免疫
Keywords
Aeromonas hydrophila
Outer membrane protein AHA1182
Prokaryotic expression
Immunogenicity
C.auratus plasma
Histopathological section
Active immunity
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
Q71 [生物学—分子生物学]
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嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究
简思杰
晁嘉
孙薇
陈春琳
陆娟
刘勇
刘祥
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2023
1
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职称材料
2
嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的原核表达、纯化与免疫原性研究
简思杰
晁嘉
孙薇
陈锐
丁锐
陈琛
刘祥
《河南农业科学》
北大核心
2022
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