腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤对白血病细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨腺苷脱氨酶抑制剂-红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)对白血病细胞凋亡及细胞周期的影响。方法选取白血病细胞HL60、Jurkat、U937、K562及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),培养至对数生长期,将细胞随机分为对照组、0.10 mmol·L^-1 EHAN处理组和0.25 mmol·L^-1 EHNA处理组。对照组细胞细胞采用正常培养基培养,0.10 mmol·L^-1 EHAN处理组和0.25 mmol·L^-1 EHNA处理组细胞分别应用含0.10、0.25 mmol·L^-1 EHNA的培养基培养,培养48 h后,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率及对照组和0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组细胞周期。结果细胞培养48 h后,0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组和0.25 mmol·L^-1 EHNA处理组HL60、U937、K562、Jurkat细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.05);0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组HL60、K562细胞凋亡率显著高于0.25 mmol·L^-1 EHNA处理组(P<0.05);0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组与0.25 mmol·L^-1 EHNA处理组U937、Jurkat细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组、0.25 mmol·L^-1 EHNA处理组和对照组HUVEC凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组K562细胞和Jurkat细胞的S期细胞比例显著高于对照组(P<0.05),K562细胞和HUVEC细胞的G 2/M期细胞比例显著低于对照组(P<0.05);0.10 mmol·L^-1 EHNA处理组与对照组HUVEC细胞的S期细胞比例及HL60、Jurkat、U937细胞的G 2/M期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论EHNA处理可以在不影响血管内皮细胞的前提下杀伤多种类型的白血病细胞,为白血病治疗药物开发提供了参考。

2-氨基-6-氟-9-(4-羟基-3-羟甲基丁基)嘌呤的合成

报道了2-氨基-6-氟-9-(4-羟基-3-羟甲基丁基)嘌呤(1)的合成,通过对起始原料2-氨基-6-氯-9-(4-乙酰氧基-3-乙酰氧甲基丁基)嘌呤(2)水解脱去乙酰基,得到2-氨基-6-氯-9-(4-羟基-3-羟甲基丁基)嘌呤(3).化合物3与三甲胺乙醇溶液在混合溶剂[V(THF)∶V(DMF)=3∶1]中反应得到相应的氯化铵盐4,然后与KF在DMF溶剂中反应,得到化合物1.产品经UV-vis,IR,1HNMR,19FNMR和MS表征.考察了反应温度、氟化试剂等因素对氟化反应的影响,为6位含氟的嘌呤核苷类化合物的合成提供了一种直接、简易的新方法.

红-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉压力和内源性腺苷的影响

目的观察红-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤(EHNA)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺动脉压力和内源性腺苷水平的影响,了解HPH与内源性腺苷水平的关系。方法 24只SD大鼠随机分为常氧组、低氧组和低氧+EHNA组,每组8只。低氧组和低氧+EHNA组大鼠每天置于含氧体积分数为(100±5)mL.L-1、二氧化碳体积分数<1mL.L-1的大型玻璃箱中,在缺氧3d后分别腹腔注射等量9g.L-1盐水和EHNA(30mg.kg-1.d-1)连续4d。常氧组大鼠在自然空气条件下饲养。于实验第8天将大鼠麻醉,右颈外静脉插管,利用四道生理记录仪测定每只大鼠的平均肺动脉压(mPAP);完成压力测量后,左心室取血,采用高效液相色谱仪检测其血浆中腺苷水平。结果低氧组mPAP水平[(16.50±2.43)mmHg,1mmHg=0.133kPa]及内源性腺苷水平[(24.75±3.08)mg.L-1]均显著高于常氧组[(11.25±1.75)mmHg,(11.50±2.05)mg.L-1](Pa<0.01);低氧+EHNA组内源性腺苷水平[(8.58±1.90)mg.L-1]低于低氧组,而mPAP[(19.64±3.44)mmHg]显著高于低氧组(Pa<0.01)。结论 EHNA导致HPH大鼠肺动脉压力进一步升高,可能与其降低血浆内源性腺苷水平有关。

心复力颗粒诱导缺氧无血清条件下H9C2心肌细胞自噬发挥抗凋亡作用的实验研究

目的探讨中药复方心复力颗粒(XG)诱导缺氧无血清条件下H9C2心肌细胞自噬发挥抗凋亡的作用机制。方法将H9C2心肌细胞随机分为正常组、缺氧无血清组、XG(100~800μg/mL)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(5μmol/L)、XG(400μg/mL)+3-MA(5 mmol/L)组,在缺氧无血清培养条件下处理24 h后,Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察自噬小体形成,Western blotting方法检测凋亡和自噬蛋白表达水平。结果Western blotting结果显示,缺氧无血清条件明显抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,促进凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达。心复力颗粒处理后,可显著抑制细胞凋亡,Bcl-2表达上调,Bax和Caspase-3的表达下调,且呈浓度依赖性,在XG 400组作用最显著,与正常组比较,缺氧无血清组自噬小体明显减少,而在心复力颗粒各处理组中,随着药物浓度增加,自噬小体数量明显增加,在XG 400组最明显。同时LC3Ⅱ/LC3Ⅰ呈剂量依赖性增加,并在XG 400组表达水平达到峰值。用自噬特异性抑制剂3-MA处理细胞后,与缺氧无血清组比较,细胞凋亡明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少,而凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达呈上升趋势。结论缺氧无血清培养条件可以引起明显的细胞凋亡和抑制细胞自噬;心复力颗粒干预后显著减少细胞凋亡同时诱导自噬发生,并呈现一定的浓度依赖性;心复力颗粒通过诱导细胞自噬下调细胞凋亡水平。心复力颗粒通过诱导缺氧无血清条件下的H9C2心肌细胞自噬,从而发挥抗凋亡作用,保护缺血心肌。

韦瑞德合成工艺的优化

对韦瑞德合成工艺进行优化.以腺嘌呤为起始原料,将其与R-碳酸丙烯酯缩合反应制得(R)-9-(2-羟基丙基)腺嘌呤,经醚化、超声辅助三甲基氯硅烷脱磷酸酯得到替诺福韦,再经碘甲基碳酸异丙酯酯化、成盐得到最终产物韦瑞德,总收率为31%(以腺嘌呤计算),HPLC纯度达99.5%.该优化合成工艺成本低廉,收率高,步骤短,适合于工业化生产.