兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律

目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律。方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成。①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham’sF12为1∶1,并加入以下激素及生长因子:10mg/L胰岛素、5mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4mg/L氢化可的松、7.5mg/L内皮细胞生长支持物、25μg/L表皮生长因子、1mmol/L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50mg/L链霉素)体外培养。②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞。扫描电镜观察细胞表面结构。结果:①气管上皮细胞的分离:低温消化加刷洗法获得的气管上皮细酶胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转。②气管上皮细胞生长状态和形态特征:皿接种细胞24h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂套相。五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200～400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡。③纤毛细胞的电镜观察:见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还可有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出。④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91±3)%。结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,以建立兔气管纤毛可上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值。

人脐血干细胞分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞

背景:鼻黏膜纤毛上皮细胞受损后导致鼻黏膜生物功能严重创伤。相对于其他成体干细胞,人脐血干细胞具有更好的诱导分化潜能。目的:观察人脐血干细胞通过体外培养、诱导分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞的可行性。方法:收集正常健康人脐血,分离人脐血干细胞,通过体外培养,鉴定干细胞表面标记物后进行传代培养;取第3代脐血干细胞,用携带增强型绿色荧光蛋白重组腺相关病毒进行感染,采用气液界面培养法,分别于诱导感染1,2周后对干细胞进行MUC8基因PCR检测。在脐血干细胞培养3周后进行FOXJ1免疫荧光染色。结果与结论:(1)培养鉴定结果:原代人脐血干细胞传代至第3代时,细胞形态较均一,折光性良好,可表达干细胞表面标记物;(2)转染鉴定结果:细胞转染3 h后,可见第3代干细胞呈现出绿色荧光,培养48 h后,流式细胞仪检测细胞阳性率达96.2%,说明干细胞转染效果很好;(3)RT-PCR检测:人脐血干细胞MUC8 m RNA无表达,而鼻黏膜上皮细胞MUC8 m RNA呈现出强表达,培养1周时MUC8mRNA呈现弱表达,培养2周后有一定的增强;(4)免疫荧光染色:在转染的绿色荧光蛋白背景下可观测到FOXJ1红色荧光呈现阳性表达结果;(5)结果说明:人脐血干细胞在适宜培养条件下可分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞。

第二信使对呼吸道纤毛上皮细胞调控

呼吸道纤毛运输系统在呼吸道免疫防御中起着非常重要的作用,纤毛运输能力主要是由纤毛摆动频率决定的,目前研究第二信使对纤毛摆动频率的调节机制已成为热点,本文对钙离子(Ca2+)、环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)对纤毛摆动的调控作用综述如下。

呼吸道感染患者纤毛上皮细胞的超微结构改变

呼吸道感染患者纤毛上皮细胞的超微结构改变陈良标，陈佩兰，李亚非，刘超英，陈杭薇（北京军区总医院电镜室，北京军区总医院内三科，北京１００７００）本研究标本来自６０例急性气管炎、慢性气管炎急性发作和肺炎患者。０．１％地卡因喷雾局麻下，以无菌导管插入鼻咽部...

鼻咽假复层纤毛柱状上皮核的形态定量学研究

作者采用图象分析仪检测88例鼻咽小淋巴细胞及其中21例鼻咽假复层纤毛柱状上皮、8例异型增生柱状上皮胞核的多个形态定量学参数。经分析比较后认为:(1)假复层纤毛柱状上皮胞核的面积较小淋巴细胞胞核增大一倍左右,而核形状较偏离圆形;(2)假复层纤毛柱状上皮中、表层胞核与基层核比较,其核面积、核圆度增大,而核椭圆形状因子、核规则形状因子没有差异,即各层胞核形状基本一致,各层中大多数胞核(80％以上)的长径与基底膜垂直。上述形态定量学特征为研究发生于鼻咽假复层纤毛柱状上皮的癌前病变提供了正常客观指标。

急性气管—支气管炎病人呼吸道脱落纤毛柱状上皮细胞形态观察

目的探讨急性气管—支气管炎病人呼吸道脱落纤毛柱状上皮细胞在临床检验中的意义。方法以形态学方法观察50例急性气管—支气管炎病人呼吸道脱落纤毛柱状上皮细胞的形态变化及运动。结果呼吸道脱落纤毛柱状上皮细胞形态多样。结论呼吸道脱落纤毛柱状上皮细胞在临床检验中常被忽视或误认为致病性原虫,应引起重视。

胎儿输卵管上皮细胞纤毛发育的定量研究

为了明确胎儿输卵管上皮细胞纤毛发育的特征,应用扫描电子显微镜测试系统对孕周16周至36周的33例女性胎儿输卵管上皮细胞进行了定量研究,结果发现:妊娠16周胎儿输卵管上皮细胞已有纤毛发育,峡部纤毛平均高度随孕周增加逐渐增高;壶腹部纤毛平均高度在妊娠20周时出现明显增高;伞部纤毛高度在孕20周及孕32周时出现两次明显增高。表明胎儿输卵管上皮细胞发育过程中纤毛高度变化具有明显的部位异常和阶段性。

鼻咽假复层纤毛柱状上皮核的形态定量学研究

作者采用图象分析仪检测88例鼻咽小淋巴细胞及其中21例鼻咽假复层纤毛柱状上皮胞核的多个形态定量学参数，经分析比较后认为：（1）假复层纤毛柱状上皮胞核的面积较小淋巴细胞核的增大一倍左右，而核形状较偏离圆形；（2）假复层纤毛柱状下皮中，表层胞核与基层核比较，其核面积，核圆度增大，而核椭圆形状因子，核规则子没有差异。即各层胞核基本一致，各层中大多数胞核（80％以上）的长径与基底膜垂直。上述形态定量学特征为研究发生于鼻咽假复层纤毛柱状上皮的部前病变提供了正常客观指标。

呼吸道纤毛运动状况的高速数字化显微成像

目的 通过对呼吸道纤毛摆动的频率和形式进行精确测量,以建立客观评价呼吸道上皮纤毛传输功能的指标。方法 采用高速数字化显微成像技术,对体外培养的兔和鼠气管黏膜以及人鼻腔黏膜的纤毛摆动状况进行观察。结果 ①数字化图像中测量点灰度的变化反映纤毛运动的状况,通过分析图像灰度的变化过程,可评价纤毛运动周期中各个时段的特征变化;②图像采集系统的采样速率为240帧/s时,可清晰显示纤毛运动状况,而当采样速率下降为30帧/s时,则无法获得正确的纤毛摆动频率(ciliary beat frequency,CBF)数据;③30℃时,鼠呼吸道CBF基值(x±sx)为(15.6±0.7)Hz(n=5);兔呼吸道CBF基值为(13.2±0.9)Hz(n=7);人鼻腔CBF基值为(13.4±1.1)Hz(n=5),3者间差异无显著性(P>0.05)。当向培养液中加入ATP后,CBF将在数秒内快速升高。结论 高速数字化显微成像和精确的数据处理技术,能够准确反映呼吸道纤毛运动状况,为客观评价呼吸道黏液纤毛传输功能提供临床实用指标。

ATP对人鼻腔纤毛摆动频率的影响

目的观察不同浓度三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）对体外培养人鼻腔纤毛运动的影响。方法采用组织块培养法，应用高速数字化显微成像系统观察1umol／L、10umol／L和100umol／LATP对人鼻腔纤毛摆动频率（ciliary beat frequency，CBF）的影响。结果①Hanks平衡盐溶液（Hanks balanced salts solution，HBSS）对CBF无明显影响。②1umol／LATP使CBF由（9．2±1．8）Hz升至（10．3±2．0）Hz（n=10）（P〈0．05）。10umol／LATP使CBF由（9．5±1．7）Hz升至（11．5±2．0）Hz（n=10）（P〈0．05）。③100umol／LATP使CBF由（8．7±1．1）Hz升至（11．5±1．4）Hz（n=10）（P〈0．05）。结论ATP可刺激体外培养人鼻腔纤毛摆动频率升高，在1～100umol／L范围内，ATP对CBF的刺激呈浓度依赖性。

小鼠发育不同时期的鼻纤毛长度扫描电镜观察

鼻纤毛在防止呼吸道感染方面具有重要作用,通过规律摆动将进入鼻腔的灰尘、细菌、变应原等通过纤毛黏液系统排出体外,将其控制在安全范围。纤毛运动状况除与纤毛摆动频率（CBF）有关外,亦与纤毛的长度相关。人鼻黏膜纤毛长约6μm,正常纤毛长度维持着鼻黏膜的稳态,长度异常会导致纤毛协同作用降低及纤毛传送速率降低,导致黏液纤毛传输系统功能降低,使得细菌、病毒、变应原及有害物质排出受阻,与黏膜接触时间增加.

用螺旋环术治疗犬气管塌陷症

正常的气管是一个动态的器官,由多个透明软骨环组成,具有纤维弹性组织的环状韧带在侧面连接,被纤毛上皮黏膜覆盖的气管肌组成的气管膜从背侧穿过软骨环的顶端。纠维弹性组织的环状韧带可向任何方向弯曲,而气管丽么许周径的扩张和收缩,并由此气管的直径和可以沿着气道运动的空气量。

细胞角蛋白(CK)13及其基因在术后性上颌囊肿衬里上皮中的表达

目的研究CK13蛋白和CK13-mRNA在术后性上颌囊肿(postoperative maxillary cysts,POMCs)衬里上皮细胞中的表达,进而探讨CK13在纤毛柱状上皮向鳞状上皮化生过程中的意义。方法本研究采用免疫组织化学染色法和RT-PCR法分别检测CK13蛋白和CK13-mRNA在32例POMCs衬里上皮中的表达。结果免疫组织化学染色显示CK13蛋白在鳞状上皮中呈阳性表达,在纤毛柱状上皮中呈阴性;RT-PCR法检测出CK13-mRNA在所有囊肿衬里上皮均呈阳性表达,其中13例纤毛柱状上皮呈弱阳性,14例既有纤毛柱状上皮又有鳞状上皮的混合上皮呈中等强度表达,5例鳞状上皮呈强阳性。结论POMCs衬里的纤毛柱状上皮中存在CK13-mRNA,提示化生的鳞状上皮细胞可能来源于纤毛柱状上皮。在纤毛柱状上皮向鳞状上皮化生时CK13蛋白可能起着重要作用。

细胞角蛋白(CK)13在含牙囊肿衬里上皮的表达

目的研究纤毛柱状上皮向鳞状上皮化生时细胞角蛋白13的表达,探讨其表达在上皮化生方面的意义。方法取54侧含牙囊肿和6例鼻腭管囊肿。分别采用细胞角蛋白13单克隆抗体进行免疫组织化学染色、HE染色和RT-PCR方法研究细胞角蛋白13基因的表达。结果54例含牙囊肿中,46例为复层鳞状上皮细胞衬里。CKl3均呈阳性表达;8例混合性上皮衬里。其中的鳞状上皮细胞部分CKl3也呈阳性表达;纤毛柱状上皮部分和6例鼻腭管囊肿的纤毛柱状上皮细胞均呈阴性表达。RT-PCR结果显示细胞角蛋白13基因在复层鳞状上皮中表达最强。在混合性上皮中表达减弱,在纤毛柱状上皮中表达极弱。结论细胞角蛋白13基因(CKl3-mRNA)在纤毛柱状上皮、混和性上皮和复层鳞状上皮三种不同上皮村里中均有表达,但表达强度不同,呈由弱到强的变化。在鳞状上皮细胞中细胞角蛋白13呈强阳性表达;在纤毛柱状上皮细胞中细胞角蛋白13呈阴性;可是,当纤毛柱状上皮中出现鳞状上皮细胞时,可见细胞角蛋白13呈阳性表达,因而,细胞角蛋白13是纤毛柱状上皮细胞向鳞状上皮细胞化生过程中的标志性产物。但是有待进一步验证。

人胎儿喉黏膜上皮细胞的发育分化特点

【目的】研究中国人胎儿喉黏膜上皮细胞发育分化的特点。【方法】收集9￣40周胎儿喉标本33例。应用连续切片HE染色、细胞角蛋白免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜观察其黏膜上皮。【结果】9周胎喉黏膜由1￣2层低柱状细胞组成,仅表层细胞表达微弱的角蛋白,13周后出现多种类型的上皮细胞,上皮全层均表达细胞角蛋白;会厌舌面、声带被覆鳞状上皮,会厌喉面、室带、喉室及声门下区被覆假复层纤毛柱状上皮,其基底细胞和中间细胞的胞浆内含有丰富的胞浆泡状系统、张力原纤维和桥粒;过渡上皮和纤毛上皮中均散在岛状鳞状上皮但出现时间不一致。【结论】人喉黏膜上皮细胞的分化发生于胎儿9￣13周期间;纤毛上皮的基底细胞和中间细胞具有双向分化的潜能;过渡上皮和纤毛上皮中出现岛状鳞状上皮是生理现象,前者由复层立方上皮分化而来,后者由纤毛上皮分化而来。

猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价

猪肺炎支原体是危害养猪业的重要病原,由于感染后临床症状不明显,多以慢性消耗性感染为主,猪场在进行疾病防控时往往关注度不够。但是由于该病原能够长期破坏猪只呼吸道纤毛上皮细胞,导致其他呼吸道病原体频繁入侵,是最终形成感染情况复杂、经济损失巨大的猪呼吸道疾病综合征(PRDC)的重要诱因。因此,猪肺炎支原体的防控应该得到充分重视。

血清二胺氧化酶测定的临床应用进展

二胺氧化酶（diamine oxidase;DAO,E.C.1.4.3.6）是存在于哺乳动物小肠的黏膜或纤毛上皮细胞中催化二胺的细胞内酶,它可通过调节细胞内的离子平衡、影响传导通路、促进细胞修复,对肠黏膜具有保护作用[1]。小肠黏膜屏障功能衰竭时或肠黏膜细胞坏死时血清DOA升高,因此,血液中的DOA活性可反映肠道损伤状态[2,3]。

烟草雾吸入导致慢阻肺机制的实验研究——大鼠Clara细胞结构及其分泌蛋白的变化

为探讨烟草雾吸入诱导的慢性阻塞性肺疾病 (COPD)大鼠气道Clara细胞及其分泌蛋白 (又称Clara细胞 10kDa蛋白 ,CC10 )表达的变化 ,采用自制的染毒箱 ,使大鼠吸入烟草雾制作COPD模型 ,对Clara细胞进行电镜及免疫组化观察 ,并测定大鼠气道阻力及呼吸系统总顺应性。COPD大鼠终末及呼吸性细支气管Clara细胞数量减少 ,胞浆内滑面内质网扩张 ;终末及呼吸性细支气管上皮细胞CC10表达减少 ;呼吸功能检查显示气道阻力增加、呼吸系统总顺应性下降 ;气道上皮细胞CC10阳性细胞百分率与气道阻力呈负相关。COPD大鼠终末及呼吸性细支气管上皮细胞Clara细胞数量减少 ,气道上皮细胞CC10表达减少 ,CC10阳性细胞百分率与气道阻力呈负相关、与动态顺应性呈正相关。