五步蛇毒纤溶组分Ⅱ对大鼠颈动脉血栓的溶栓作用

目的了解五步蛇毒纤溶组分Ⅱ对大鼠颈动脉血栓有无溶栓作用。方法采用大鼠颈动脉血栓模型，舌下静脉注射五步蛇毒纤溶组分Ⅱ，分为3个剂量组（n=10），其剂量分别为625μ·kg-1、1250μVg·kg-1和2500μ·kg-1。用尿激酶作用阳性对照，其剂量分别为1250IU·kg-1、2500IU·kg-1和5000IU·kg-1。用生理盐水作阴性对照。结果给药lh后，五步蛇毒纤溶组分Ⅱ组溶解血栓的重量（三上s）分别是（1.9士0.6）mg、（4.8土0.9）mg和（7.0土0.8）mg。尿激酶组溶解血栓的重量（王士s）分别是（l·6上0·5）mg、（2.3土0.7）mg和（3.0土0.4）mg。生理盐水组溶栓重量（Z士s）为（0.6土0.2）mg。五步蛇毒纤溶组分正组、尿激酶组与生理盐水组作t值检验，PMO.01。结论五步蛇毒纤溶组分I和尿激酶对大鼠颈动脉血栓都有溶栓作用，并有量效关系。

尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分与铽的相互作用

利用平衡透析、原子吸收、荧光滴定和荧光寿命测定等方法确定了皖南尖吻蝮蛇蛇毒纤溶组分（FP）中Ca（2+）含量，并利用荧光光谱研究了Tb（3+）与FP中色氨酸（Trp）残基之间能量转移和FP中的微区结构。结果表明，每个FP分子中只含有一个Ca(2+)；Tb(3+)可完全取代FP中的Ca(2+)，FP中的Trp残基可将能量转移到结合在FP中的Tb(3+)上；研究还测得Tb(3+)与FP中Trp残基之间的距离约为0．375nm。

长白蝮蛇毒纤溶组分的纯化及理化性质的研究

采用DFAE-Sepharose-CL-6B离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,从长白蝮蛇毒中分离到五种具有纤溶活性的组分,并对其理化性质进行了较为深入的研究。结果表明,长白蝮蛇毒各纤溶组分具有纤溶酶和纤溶酶原激活因子的双重作用,能被金属酶抑制剂EDTA-Na_2完全抑制。已纯化的三种纤溶组分,无出血活性。

蝮蛇毒中纤溶组分Ⅱ对血小板聚集的影响

目的 :研究蝮蛇毒纤溶组分 水解纤维蛋白原的作用方式以及对家兔血小板聚集的影响。方法 :采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)方法检测纤溶组分 水解纤维蛋白原的作用方式。用比浊法测定血小板聚集率。结果 :纤溶组分 能快速水解纤维蛋白原的 Aα-链和 Bβ-链 ,对γ-链无影响。 5 0 mg/ L PRP、2 5 mg/ L PRP和 12 .5 mg/ L PRP3个不同剂量的纤溶组分 对家兔血小板聚集均有抑制作用 ,并存在一定的量效关系。结论 :蝮蛇毒纤溶组分 是一种 α-纤维蛋白 (原 )酶 ,对 ADP诱导的兔血小板聚集有抑制作用。

Tb^（3＋）探针法研究蛇毒中纤溶组分的Ca^（2＋）结合环境

采用Ｔｂ￣（３＋）作为荧光探针研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分中钙离子的结合环境。实验表明每个纤溶组分中含有一个高亲和点。钙离子位于发色团色氨酸（Ｔｒｐ）附近，并可能和苯丙氨酸（Ｐｈｅ）结合，在不同波长的激发下能产生Ｔｒｐ→Ｔｂ￣（３＋），Ｔｒｎ→Ｔｂ￣（３＋）→ｐｈｅ，Ｔｂ￣（３＋）→ｐｈｅ和Ｔｂ￣（３＋）→Ｔｒｐ之间的能量转移。Ｔｂ￣（３＋）位于Ｔｒｐ附近并可能与Ｐｈｅ结合。计算表明Ｔｂ￣（３＋）与Ｔｒｐ之间的距离约为５．６６Ａ。

大孔吸附树脂分离蝉蜕抗凝纤溶组分的研究

目的:研究大孔吸附树脂分离蝉蜕水提醇沉物中抗凝纤溶组分的工艺条件。方法:以比吸附量及解吸率为主要参考指标,辅以凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及血凝-纤溶药效指标,采用NKA-9型大孔吸附树脂对蝉蜕水提醇沉物进行动态吸附分离,确定大孔吸附树脂分离纯化蝉蜕水提醇沉物中抗凝纤溶组分的最佳工艺条件。结果:选取NKA-9型大孔吸附树脂,径高比为1:12,以浓度10mg/m L的25m L样液,上样,2BV/h的流速连续通过树脂柱。吸附完全后,用6BV 50%乙醇进行洗脱。结论:该工艺稳定可行,可有效地用于蝉蜕水提醇沉物中抗凝纤溶组分的分离纯化。

蚯蚓纤溶酶组分的抗原性

以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基 ,通过亲和层析制备出的蚯蚓纤溶酶 (EFE)含有 11～ 13个组分 .为了了解这些组分的相互关系 ,用EFE免疫家兔获得了抗血清 .利用该抗血清与已纯化的 10个组分进行免疫双扩散 ,根据形成沉淀线的形状可以将上述 10个组分分为 4大组 .各组内组分之间的沉淀线完全融合 (免疫反应同一性 ) ;组间沉淀线交叉 (免疫反应非同一性 )或为支线 (免疫反应部分同一性 ) .这种按免疫学性质分组与根据分子量大小、氨基酸组成和N端氨基酸序列分组基本吻合 .上述结果为EFE的分类提供了依据 .

地鳖虫纤溶活性蛋白组分抑制血管的生成

从地鳖虫(Eupolyphaga sinesisWalke)中分离纯化出纤溶活性蛋白组分———地鳖虫纤溶活性蛋白(Fibrinolyric protein ofEupolyphage sinesis,EFP),研究其对血管生成的抑制作用。以新鲜地鳖虫为原料,采用硫酸铵分段盐析,经DEAE-纤维素和SephadexG-75柱等方法分离纯化EFP,用不同浓度的EFP作用于人微血管内皮细胞(MVEC),用MTT法测定EFP对MVEC增殖的影响,用单细胞凝胶电泳和AnnexinV-FITC/PI双荧光染色观察细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测EFP对MVEC细胞周期的影响,并采用鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管模拟肿瘤的新生血管,检测EFP对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的作用。结果表明:1)MTT法测得EFP可抑制MVEC细胞增殖,增殖抑制率达46%;2)EFP可诱导MVEC细胞凋亡,且成剂量依赖关系,用单细胞凝胶电泳法检测细胞凋亡,随着EFP浓度的增大,拖尾细胞增多;用AnnexinV-FITC/PI进行双荧光染色发现,当EFP处理浓度达2μg/ml时,出现了大量凋亡晚期细胞;3)EFP可干扰MVEC的细胞周期,出现S期和G2/M期阻滞;4)用鸡胚尿囊膜实验观察到EFP剂量为0.06mg/egg即可抑制鸡胚尿囊膜血管生成,最高抑制率可达35.8%。提示地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用。

三七皂甙、肝素钠和蝮蛇毒纤溶酶组份对凝血系统的作用研究

就三七皂甙 (PNS)及与肝素钠、蝮蛇毒纤溶酶组分的复方对纤维蛋白原的凝血酶时间、体内外复钙时间和纤溶激活作用进行了研究 ,结果表明 ,三七皂甙能增强肝素的抗凝活性 ,增加蝮蛇毒纤溶组分的溶纤作用 。

Rhizopus chinensis 12^#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopuschinensis12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、OctylSepharoseFastFlow疏水层析、Q SepharoseHighPerformance离子交换层析和SephacrylS 100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS PAGE方法测定该酶相对分子质量为18000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16600,表明该酶由单亚基组成.