人血浆谷氨酸型纤溶酶原的检测及其临床意义

目的 :探讨机体凝血和纤溶系统激活时 ,血浆中Glu -Plg(Pln)含量变化和其临床意义。方法 :利用自备的特异性针对Glu -Plg(Pln)抗原表位结构 (NH2 末端 1- 6 5aa)的单克隆抗体和针对Plg (Pln)重链区抗原表位的单克隆抗体 ,分别构建人血浆Glu -Plg(Pln)和Plg(Pln)二种双抗体夹心ELISA检测方法。应用 2种检测试剂分别对2 2 0例健康者、4 0例心外科手术后患者的血浆样品进行检测。结果 :实验结果表明 :2 2 0例健康者的Plg(Pln)含量为( 2 31 8± 6 2 1)mg/L ;Glu -Plg含量为 ( 2 13 9± 4 5 8)mg/L ;G/P比值为X =0 91。而 4 0例心外科手术后患者血浆中Glu -Plg(Pln)含量 ( 15 2 4± 6 8 1)mg/L与Plg(Pln)含量 ( 2 6 8 9± 73 3)mg/L比值显著为低 (P <0 0 1) ,其中 38例G/P比值也下降到X =0 5 4。结论 :血浆Glu -Plg(Pln)含量变化可能与血浆中Pln增加正反馈地促进Lys-Plg生成有关 ,增加的Lys -Plg能加速纤维蛋白水解。本实验建立的人血浆Glu -Plg(Pln)和Plg(Pln)

纤溶酶原Ala601Thr突变导致的遗传性异常纤溶酶原血症表型与基因型分析

目的对1个遗传性异常纤溶酶原血症家系进行表型及基因突变检测，寻找其致病基因。方法2015年5月10日温州医科大学附属第一医院神经内科门诊，收治1例因“半月前无明显诱因出现头痛，两侧颞部胀痛，伴呕吐，复视，睡眠差”的25岁男性患者，入院诊断“上矢状窦静脉血栓形成”。采集先证者及其家系成员（共3代14人）外周静脉血标本，在全自动血凝仪上检测其凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（Avrr）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体（D．D）及纤维蛋白原降解产物（FDP）；采用发色底物法和免疫火箭电泳法分别检测纤溶酶原活性（PLG：A）和纤溶酶原抗原（PLG：Ag）。PCR扩增纤溶酶原（PLG）基因19个外显子及其5’和3’侧翼区。用DNA直接测序法分析扩增产物，并通过反向测序验证突变位点。采用生物信息学预测软件（SIFT，PolyPhen-2和MutationTaster）分析突变对蛋白质功能的影响。采用Swiss—PdbViewer软件对突变位点进行模型分析。结果先证者及6位家庭成员PLG：A降低约50％，PLG：Ag正常。先证者及其奶奶、父亲的D—D和FDP值轻度升高。DNA测序结果表明，先证者及这6位成员PLG基因15号外显子g．38829G〉A杂合错义突变，导致p．Ala601Thr。生物信息学软件预测结果表明此突变可影响蛋白质的功能。蛋白质模型分析显示突变改变了氨基酸之间的疏水作用力和氢键，从而影响了蛋白质的稳定性。且所有家系成员5’非翻译区均存在g．2501C〉A杂合SNP。结论在该遗传性异常纤溶酶原血症家系中发现的PLG基因P．Ala601Thr杂合突变与纤溶酶原活性水平降低有关。异常纤溶酶原血症及该突变位点均为国内首次报道。