抗血清4型禽腺病毒纤突蛋白2的单克隆抗体研制及其部分特性研究

近年血清4型禽腺病毒(Serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)在国内鸡群流行,给养鸡业带来了巨大经济损失。目前尚无针对FAdV-4特异性单克隆抗体的制备及其应用报道。研究通过将FAdV-4全病毒免疫小鼠,以纤突蛋白2原核表达产物为筛选抗原,研制出了4株针对FAdV-4的单克隆抗体,分别命名为3C2、4A6、5C4、5H6。间接免疫荧光试验证明4株单克隆抗体不与所检测的血清8型禽腺病毒反应,也不与FAdV-4的纤突蛋白1反应,仅与FAdV-4的纤突蛋白2反应,并且单克隆抗体3C2在体外能有效抑制FAdV-4的感染。4株抗FAdV-4纤突蛋白2单克隆抗体的成功获得为研制FAdV-4快速诊断试剂盒及探究纤突蛋白2在FAdV-4致病机制中的作用奠定了基础。

抗禽腺病毒4型纤突蛋白-2的卵黄抗体的治疗效果评估

目的为研究防治禽腺病毒4型(fowl adenovirus type 4,FADV-4)的卵黄抗体的治疗效力。方法利用FADV-4纤突蛋白-2(fiber-2)亚单位疫苗对蛋鸡进行免疫,制备和纯化抗FADV-4 fiber-2的卵黄抗体后,评估该卵黄抗体不同治疗剂量、不同治疗时机对FADV-4的治疗效果。结果Fiber-2亚单位疫苗中fiber-2蛋白的空间结构预测为同源三聚体;利用该疫苗制备的卵黄抗体可用水稀释法和PEG-4000沉淀法得到初步纯化,其抗体效价可达10^(5.597)。卵黄抗体的治疗试验表明,在FADV-4感染后1 d内进行卵黄抗体治疗,鸡的存活率为100%,治愈率超过90%,且高剂量抗体治疗效果要优于低剂量;而在FADV-4感染后两天进行抗体治疗,鸡的存活率为70%,治愈率为50%,能够显著改善攻毒后的临床症状,延长鸡的存活时间,降低死亡率。结论制备的抗fiber-2卵黄抗体可以有效治疗FADV-4的感染。

犬冠状病毒S糖蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及其免疫原性研究

首次构建了能表达犬冠状病毒纤突糖蛋白(CCVS1)的重组犬2型腺病毒(CAV-2)。用RT-PCR方法从CCVDXMV株细胞培养物中扩增出编码S糖蛋白A、B、C和D4个抗原位点的基因片段S1,将其克隆到pVAX1中,然后将含有CCVS1基因的完整表达盒(CMV-S1-PolyA)进一步定向克隆到含有CAV-2E3区的穿梭质粒pVAXE3中,构建出pVAX△E3S1。通过SalⅠ+NruⅠ双酶切pVAX△E3S1回收含有目的基因的表达盒,将其克隆入含有CAV-2全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,获得重组质粒pCAV-2-CCV-S1。ClaⅠ+AscⅠ酶切pCAV-2-CCV-S1释放重组基因组,转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-S1。该重组病毒在MDCK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变。通过mRNA水平和Westernblot检测,证实重组病毒能表达CCVS1蛋白。动物免疫试验表明,该重组病毒可以有效地诱导免疫犬产生抗CCV和CAV-2抗体。