纤粘连蛋白对小鼠胚胎体外发育和体外着床的作用

应用小鼠胚泡和外胎盘锥体外培养的方法，研究了纤粘连蛋白对小鼠胚泡发育及胚泡或外胎盘锥粘附和扩展的影响。结果显示，纤粘连蛋白对小鼠胚泡发育有一定的促进作用；对胚泡及外胎盘锥的粘附和胚泡初生滋养层细胞及外胎盘锥次生滋养层细胞扩展均有显著促进作用。纤粘连蛋白分子活性位点的合成肽段精-甘-天冬-丝氨酸可有效抑制纤粘连蛋白对胚泡或外胎盘锥发育、粘附和扩展的促进作用。结果表明，纤粘连蛋白在小鼠胚胎发育和着床过程中起着重要作用，这种作用是通过纤粘连蛋白分子活性位点对胚泡或外胎盘锥细胞上纤粘连蛋白受体的识别和结合实现的。

PP1195一个新的与纤粘连蛋白相互作用促进肝癌细胞迁移的基因

目的:PP1195是新近获得的一个基因,酵母双杂交发现PP1195与纤粘连蛋白(Fibronectin,FN)相互作用。本文旨在说明该基因与FN间的关系及对肝癌细胞浸润和迁移能力的影响。方法:采用体外翻译表达PP1195基因和FN基因产物,体外结合实验观察两者之间的作用;采用细胞粘附实验观察PP1195基因表达对Hep3B细胞与FN结合能力的影响;采用细胞侵袭重建基底膜和划痕实验观察该基因表达对肝癌细胞浸润和迁移能力的影响。结果:表明PP1195和FN有相互结合作用;诱导PP1195基因表达可显著增加Hep3B细胞与FN的结合能力;以及SMMC7721细胞的浸润和迁移能力。结论:PP1195基因是一个新的与纤粘连蛋白相互作用并能够增加肝癌细胞浸润和迁移能力的基因。

层粘连蛋白、纤粘连蛋白、IV型胶原在人月经周期子宫内膜中的表达

目的 研究细胞外基质蛋白层粘连蛋白 (LN)、纤粘连蛋白 (FN)和IV型胶原 (IVCL)在正常人月经周期子宫内膜中的表达。 方法 采用免疫组织化学方法检测 4 9例正常月经周期子宫内膜中LN、FN、IVCL蛋白的表达。 结果 LN主要分布于腺上皮及腔上皮基底膜 ,分泌中期表达最强。FN主要分布于间质 ,腔上皮及腺上皮基底膜也均有表达 ,分泌中期含量丰富。IVCL在腺上皮基底膜的表达分泌中期最强 ,在间质的表达分泌早期最强 ,分泌中、晚期表达逐渐减弱。LN、FN、IVCL在血管基底膜上均有表达 ,无周期性变化。 结论 LN、FN、IVCL在月经周期子宫内膜中的表达随月经周期而变化。

输卵管妊娠中整合素β_3及细胞基质成分层粘连蛋白及纤粘连蛋白表达的研究

目的:探讨整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白在输卵管妊娠发生中起到的作用。方法:采用流式细胞定量分析技术检测输卵管妊娠患者输卵管黏膜上皮、宫内膜及正常输卵管黏膜上皮、正常宫内早孕宫蜕膜组织中整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白表达。结果:整合素β3的表达输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜,但差异无显著性(P>0.05);输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05),高于正常输卵管上皮,差异无显著性(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。层粘连蛋白的表达输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜,但差异无显著性(P>0.05);输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P<0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P<0.05)。纤粘连蛋白的表达输卵管妊娠组输卵管上皮高于子宫内膜上皮(P<0.05)及正常输卵管上皮(P<0.05),低于正常子宫蜕膜但差异无显著性(P>0.05);输卵管妊娠组子宫内膜上皮低于正常子宫蜕膜(P<0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P>0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P<0.05)。结论:整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白参与胚泡异位着床于输卵管内,可能在输卵管妊娠发生过程中起到一定的作用。

近距离小剂量放疗对血管纤粘连蛋白及细胞基质金属蛋白酶-2基因表达的影响

目的:探讨近距离小剂量放射治疗对血管纤粘连蛋白和细胞基质金属蛋白酶-2基因表达的影响及其机制。方法:以0、7、1 4、2 8Gy6 0 Co射线辐射培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,观察其对纤粘连蛋白( FN)及细胞基质金属蛋白酶- 2 ( MMP- 2 ) m RNA表达的影响。结果:7Gy放疗组对细胞MMP- 2及FN m RNA表达与对照组比较无显著性差异,而1 4Gy、2 8Gy放疗组FN m RNA分别为72 .0 5±5 .82和49.77±5 .62 ,较对照组( 95 .1 7±6.41 )比较有显著性差异( P<0 .0 5 )。MMP- 2 m RNA在1 4Gy、2 8Gy放疗组分别为64.2 5±3.81和42 .1 7±3.1 6,较对照组( 82 .5 2±6.5 0 )比较也有显著性差异( P<0 .0 5 )。结论:提示1 4、2 8Gy6 0 Co射线辐射可以抑制MMP-

纤粘连蛋白诱导Hela细胞黏附及MMP-2基因表达

目的 观察纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)诱导的Hela细胞的黏附及基质金属蛋白酶 (matrixmetalloprotein ases,MMPs)基因的表达 ,探讨恶性肿瘤细胞侵袭、转移发生的机制。方法 无血清培养Hela细胞 ,以FN作为细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM)成分 ,用MTT法检测Hela细胞的黏附率及光镜下计数Hela细胞的铺展率并观察Hela细胞形态的变化 ;用明胶酶谱法检测MMPs的活性。结果 无FN作用的Hela细胞不发生黏附及铺展 ,亦无明显MMPs基因表达 ;当纤粘连蛋白浓度为 5～ 1 0 μg ml时 ,黏附率及铺展率最大 ;黏附的Hela细胞启动MMP 2基因的表达 ,纤粘连蛋白浓度为 5～ 1 0 μg ml时 ,MMP 2活性最大。 结论 FN可诱导Hela细胞黏附 ,进而引发一系列细胞内信号转导机制 ,启动MMP 2基因表达 。

增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白在早期自然流产患者胎盘中的表达

目的:观察增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白在早期自然流产患者胎盘中的表达情况。方法:通过免疫组织化学方法观察30例早期自然流产患者胎盘中增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白的表达。结果:早期自然流产患者较正常早期妊娠胎盘中增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白的表达减弱(P<0.05)。结论:研究提示早期自然流产患者胎盘中滋养细胞增殖、粘附能力下降。

CD44和纤粘连蛋白在子宫腺肌病中的表达及其意义

目的探索CD44和纤粘连蛋白因子(FN)在子宫腺肌病(AMS)患者子宫内膜中的表达情况,评估其在AMS中的潜在诊断价值。方法采用免疫荧光染色鉴定子宫内膜细胞中CD44和FN的表达和细胞定位,收集AMS患者和对照组子宫内膜进行体外分离培养,分别提取mRNA和蛋白质。采用反转录定量PCR(RT-qPCR)检测CD44和FN的mRNA表达情况,利用Western blot检测CD44和FN的蛋白表达水平,并进行组间比较。结果CD44的mRNA和蛋白相对表达量在两组患者中均无显著性差异(P>0.05);与对照组比较,FN的mRNA相对表达量在AMS患者子宫内膜中呈现约6.5倍的下调,蛋白质表达呈现约1.8倍的下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论FN参与AMS病理过程中细胞粘附生长的调节,FN的表达下调以及CD44的稳定表达有望作为AMS患者诊断或者预后的潜在预测指标。

层粘连蛋白、纤粘连蛋白对两株小鼠肝癌细胞实验粘附的影响

本文探讨了层粘连蛋白（ＦＮ）和纤粘连蛋白（ＬＮ）对两株细胞体外粘附的影响，以及与其转移能力的相关性。结果显示ＬＮ和ＦＮ对高转移的下细胞的附壁及对淋巴结组织的粘附均有促进作用。而低转移的Ｐ细胞仅ＦＮ对其初期（３小时）附壁和淋巴结组织的粘附有一定影响。提示瘤细胞质膜受体蛋白的表达与其转移能力密切相关。

粘着斑激酶和丝裂原活化蛋白激酶对纤粘连蛋白诱导平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的 研究粘着斑激酶和丝裂原活化蛋白激酶在细胞外基质成分诱导血管平滑肌细胞迁移和增殖中的作用。方法 通过纤粘连蛋白 (FN)诱导培养的平滑肌细胞迁移和增殖 ,以免疫沉淀和Western印迹法检测粘着斑激酶 (FAK)和丝裂原活化蛋白激酶 (p4 2 / 4 4MAPK)及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸 (ODN)经脂质体转染细胞 ,观察其对FAK和p4 2 / 4 4MAPK磷酸化、细胞迁移以及增殖的影响。结果 不同浓度FN(5、10、2 0、4 0、6 0 μg/ml)在有效诱导平滑肌细胞迁移和增殖时FAK和p4 2 / 4 4MAPK也呈明显表达 ,2 0 μg/mlFN可使其磷酸化处于较高的表达量。脂质体可有效地介导ODN转染 ,转染效率为 86 7%± 4 5 %。转染后FAK以及p4 2 / 4 4MAPK磷酸化表达量明显减少 ,10、2 0、4 0和 6 0 μg/mlFN组迁移细胞数也分别显著减少 (2 3 2 6 %、2 1 6 3%、19 31%、17 88% ,P <0 0 5 ) ,5～ 6 0 μg/ml不同浓度的FN组 ,细胞增殖减少 2 7 6 7%～ 4 6 6 7% (P <0 0 5 )。 结论 活化的FAK和p4 2 / 4 4MAPK是细胞外基质诱导平滑肌细胞迁移和增殖的重要信号分子 ,二者之间存在着密切的联系 ,由其介导的信号转导促进了这一过程 。

纤粘连蛋白-整合素相互作用启动胚泡中基质金属蛋白酶活性

纤粘连蛋白是一种主要的细胞外基质，能够与整合素相互作用，介导胚泡的粘附和扩展．首次发现与纤粘连蛋白共同培养的小鼠胚泡产生基质金属蛋白酶－２和－９；若无纤粘连蛋白，小鼠胚泡不产生基质金属蛋白酶－２和－９；焦点粘着激酶是整合素信号转导通路中的关键信号分子，其反义寡聚脱氧核酸显著抑制纤粘连蛋白诱导的胚泡基质金属蛋白酶活性．结果表明，纤粘连蛋白可能通过其整合素受体的信号转导通路，启动小鼠胚泡基质金属蛋白酶－２和－９的表达，协调胚泡的侵入能力和子宫内膜的接受能力，从时间和空间上保证植入相关事件的准确性．

纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达

目的 研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法 以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶 酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论 纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。

芪贞汤对人大肠癌纤维粘连蛋白黏附能力的影响

[目的]探讨扶正解毒活血法中药芪贞汤对人大肠癌高转移细胞株L-10细胞纤维粘连蛋白黏附能力的影响。[方法]通过体外细胞培养法,观察该方对L-10细胞纤粘连蛋白黏附能力的阻碍作用。[结果]芪贞汤对L-10细胞纤维粘连蛋白黏附能力明显抑制,并且显示了芪贞汤高浓度优于低浓度,有明显的浓度依存性;随着时间的推移,其抑制作用在变化,当作用120min时,阻碍作用达到高峰,随后其阻碍作用逐渐减低。[结论]扶正解毒活血法中药芪贞汤对人大肠癌高转移细胞株L-10细胞具有明显的抗纤维粘连蛋白黏附能力的作用,从而提示芪贞汤有可能通过抑制纤维粘连蛋白黏附能力,实现抑制癌的浸润和转移的作用。

整合素及纤粘连蛋白在调控卵巢癌细胞失巢凋亡过程中的作用

目的研究整合素及纤粘连蛋白(fibronectin,FN)在卵巢癌细胞逃避失巢凋亡过程中的作用及其机制。方法2005年1月至2006年5月于山东省立医院采用间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV3细胞高转移亚克隆SKOV3-S1细胞中整合素蛋白αv、β1、α5β1的表达;建立细胞悬浮分离培养导致凋亡的模型,流式细胞仪检测细胞凋亡;抗体封闭法检测不同整合素蛋白在凋亡过程中的作用;逆转录PCR检测p53、bcl-2、bax基因表达的变化;比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性改变。结果(1)S1细胞表面普遍表达整合素αv、β1、α5β1。(2)FN使细胞凋亡率由63.7%降至29.0%,αv及β1抗体使凋亡率上升,α5β1抗体对凋亡没有影响。(3)FN使S1细胞中bcl-2基因表达上升,bax表达下降。αv封闭抗体能抑制FN的基因表达调节作用。(4)在悬浮生长状态下,caspase-3被激活;FN使caspase-3活性减弱;加入αv及β1封闭抗体后,酶活性增强。结论SKOV3-S1细胞表面整合素受体蛋白αv通过与FN结合,提高了细胞凋亡调节基因bcl-2/bax的比率,使caspase-3活性减弱,这是SKOV3-S1细胞避免失巢凋亡的重要原因之一。

纤粘连蛋白在实验性牙周炎鼠牙龈组织中的表达

目的:观察分析大鼠实验性牙周炎牙龈组织中纤粘连蛋白(fibronectin,FN)的表达及意义。方法:26只8周龄雄性Wistar大鼠,随机分为局部丝线结扎高糖软食4周和8周两组,每组实验动物10只,空白对照组3只。运用免疫组化方法,观察分析FN在健康牙龈组织中、牙周炎牙龈组织中的表达及意义。结果:健康牙龈组织中,FN相对均匀弥漫表达于整个牙龈结缔组织基质内;牙周炎牙龈组织中,FN表达具有部位特异性,即上皮下结缔组织最上部基质内FN表达明显下调;结合上皮根端基底细胞基底面下FN表达明显上调,表达强度和范围随结合上皮根向增生程度的增加而增强。结论:炎性刺激下调炎症中心区牙龈结缔组织基质内FN表达;炎症刺激上调结合上皮根端基底细胞基底面下FN表达,其表达强度和范围随结合上皮根向增生程度的增加而增强扩大,暗示FN参与牙龈结合上皮根向增生迁移活动。

小剂量^(60)Co放疗对血管纤粘连蛋白及细胞基质金属蛋白酶-2基因表达的影响

目的 探讨小剂量60 Co放射治疗对血管纤粘连蛋白和细胞基质金属蛋白酶 -2基因表达的影响及其机制。方法 以0、7、14、2 8Gy60 Co射线辐射培养的大鼠主动脉平滑肌细胞 ,观察其对纤粘连蛋白 (fibonectin ,FN)及细胞基质金属蛋白酶 -2 (ma trixmetalloproteinase -2 ,MMP -2 )mRNA表达的影响。结果 7Gy放疗组对细胞MMP -2及FNmRNA表达与对照组比较无显著差异 ,而 14Gy、2 8Gy放疗组FNmRNA分别为 72 0 5± 5 82和 49 77± 5 62 ,较对照组 (95 17± 6 41)比较有显著差异 (P <0 0 5 )。MMP -2mRNA在 14Gy、2 8Gy放疗组分别为 64 2 5± 3 81和 42 17± 3 16,较对照组 (82 5 2± 6 5 0 )比较有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 14、2 8Gy60 Co射线辐射可以抑制MMP -2合成和FN等胞外基质的代谢。

纤维蛋白支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响

观察纤维蛋白-纤粘连蛋白-层粘连蛋白复合支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响,评价该支架移植修复脊髓损伤的可行性。本研究将圆柱状复合支架移植入大鼠脊髓完全横断缺损部位,同时以该模型动物作为对照组。分别于术后4w、8w、12w对动物下肢运动功能进行BBB评分。然后取出支架/脊髓组织,用免疫荧光双标和免疫印迹技术分析损伤部位神经纤维再生和胶质细胞增生情况;并用透射电镜观察支架移植部位的组织学结构。结果显示:术后4～12w支架移植组动物BBB评分明显高于对照组(P<0.05)。于术后4w,移植组可见支架内有少量神经纤维,此后神经纤维逐渐增多,而胶质细胞增生不明显;对照组脊髓损伤局部可见坏死空洞,空洞周边胶质细胞增生明显。免疫印迹检测结果表明,移植组神经丝蛋白(NF-200)相对含量高于对照组;对照组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的相对含量高于实验组。以上结果提示:纤维蛋白支架移植可促进大鼠脊髓损伤后神经再生,并抑制胶质瘢痕形成。纤维蛋白(原)作为生物材料用于构建修复脊髓损伤的组织工程支架具有良好的应用前景。

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞增殖的影响

【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白的表达,并研究不同浓度bFGF对MSC生长曲线和克隆形成率的影响。【结果】原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落14d时接近融合,传代后细胞体积变大,约5～7d传代1次;免疫组化显示MSC呈波形蛋白阳性,而纤粘连蛋白阴性。浓度10ng/mL和20ng/mLbFGF组的MSC的细胞数和克隆形成率比5ng/mLbFGF组和对照组(无bFGF)明显增加,具有高度显著性(P<0.01)。【结论】bFGF可明显促进MSC的增殖。

细胞外基质蛋白介导晶体上皮细胞粘附的作用

目的探讨纤粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原3种细胞外基质蛋白促牛晶体上皮细胞（LEC）的粘附作用，以阐明后囊膜混浊（PCO）发生的组织病理学机制。方法应用3H-TDR掺入法研究纤粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原和鸡卵白蛋白对体外培养的牛LEC的粘附作用。结果牛LEC能够粘附到包被有不同浓度的料粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原培养板表面上，呈现出浓度和时间效应特点肥牛LEC不能够粘附到包被有不同浓度的鸡卵白蛋白培养板表面上。给哈构成晶体囊膜的层粘连蛋白和I型胶原，以及白内障摘除术后进入眼房水的纤粘连蛋白能够介导LEC粘附到后囊膜上，在PCO发生过程中起到重要的促进作用。

细胞迁移过程中整合蛋白(Integrin)α3亚基的表达及其作用

本文研究Ｖｅｒｏ细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ－１上迁移过程中，整合蛋白α３亚基的表达。结果表明：纤粘连蛋白显著促进α３亚基在Ｖｅｒｏ细胞中的表达和细胞膜上定位；Ｖｅｒｏ细胞在迁移过程中α３亚基表达增强，并大量定位于细胞迁移方向的细胞膜上；纤粘连蛋白抗体引起Ｖｅｒｏ细胞中α３亚基表达下调并抑制Ｖｅｒｏ细胞迁移。上述结果证实α３亚基在Ｖｅｒｏ细胞迁移过程中起重要作用；纤粘连蛋白通过促进α３亚基表达和定位而引起细胞迁移。细胞外基质中层粘连蛋白对α３亚基表达无促进作用，提示Ｖｅｒｏ细胞在细胞外基质上迁移可能不依赖于α３亚基。