纤细眼虫(Euglena gracilis)核纤层蛋白基因的初步研究

目的:探讨在纤细眼虫(Euglenagracilis)中是否存在核纤层蛋白(lamin)基因,为核纤层蛋白基因的起源与进化研究提供线索.方法:以较为低等生物的核纤层蛋白基因cDNA序列为参考,设计引物P0010和P0012,以纤细眼虫总DNA为模板进行PCR,PCR产物回收、测序.由于不能获取完整序列,所以据测序结果又设计了P0013和P0014两条中间引物,组成P0010/P0013和P0014/P0012引物对进行PCR,回收产物测序.结果:P0010/P0012、P0010/P0013和P0014/P0012引物对进行PCR分别获得775、400和395bp的特异性PCR产物,对这3种产物分别测序,最终获得了P0010和P0012之间的全序列,共775bp.结论:在纤细眼虫中存在着核纤层蛋白基因.

双酶耦合催化法合成特定聚合度β-1,3-葡寡糖研究

采用蔗糖磷酸化酶和昆布二糖磷酸化酶双酶耦合催化工艺合成β-1,3-葡寡糖。以蔗糖为底物,通过蔗糖磷酸化酶磷酸解蔗糖生成α-D-葡萄糖-1-磷酸（α-D-Glucose-1-phosphate,G1P）,再以来自纤细眼虫（Euglena gracilis Z）中的昆布二糖磷酸化酶为β-1,3-葡寡糖合成酶实现G1P所带的葡萄糖单元往引物葡萄糖上的添加,通过控制催化反应时间得到不同聚合度的寡糖。在该策略下,反应0.5 h时耦合催化合成寡糖聚合度在4~6之间;反应4 h时,有7~11糖生成;4 h之后反应趋于平衡,并无更高聚合度的寡糖生成,聚合度稳定在4~11之间。对合成的寡糖进行电喷雾串联质谱（electrospray ionization tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS）和氢核磁共振（hydrogen nuclear magnetic resonance,^1H-NMR）分析,可证明产物为β-1,3-葡寡糖。对耦合催化条件进行优化,发现在100 mmol/L的磷酸缓冲液（pH 6.5）、100 mmol/L的蔗糖、50 mmol/L的葡萄糖、5 mmol/L的MgCl2、0.1 U/mL昆布二糖磷酸化酶、0.2 U/mL蔗糖磷酸化酶,40℃条件下反应4 h,葡萄糖的转化率可达39.4%。