纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制

目的探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷(gracillin)诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制。方法以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4μmol/L)gracillin作用不同时间(12、24、48 h)对细胞增殖的影响。与不加药物的对照组进行比较,采用生物透射电子显微镜观察gracillin(2μmol/L)作用24 h对细胞自噬小体形成的影响;通过GFP-LC3质粒转染实验检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后A549细胞中序列相似性家族102成员A(FAM102A)mRNA和蛋白的表达水平,以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)]和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(又名Akt)信号通路相关蛋白的表达水平。结果gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖趋势;其作用24 h的半数抑制浓度为2.55μmol/L。gracillin作用24 h后,细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体;自噬小体膜上可见明显的GFP-LC3绿色荧光斑点,且有随药物浓度升高而增多的趋势。与对照组比较,gracillin不同浓度组细胞中FAM102A mRNA和蛋白的表达水平(0.5、1、2μmol/L组)、Beclin-1蛋白的表达水平(1、2μmol/L组)和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(2μmol/L组)均显著升高,p62蛋白的表达水平(1、2μmol/L组)和Akt蛋白(1、2μmol/L组)、PI3K蛋白(2μmol/L组)的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论gracillin可能通过上调FAM102AmRNA和蛋白的表达、抑制PI3K/Akt信号通路来促进A549细胞发生自噬,从而发挥抑制细胞增殖的作用。

纤细薯蓣皂苷的药理作用研究进展

纤细薯蓣皂苷(Gracillin)是一种甾体皂苷类化合物,其广泛存在于如穿龙薯蓣、七叶一枝花、吉祥草、附子等多种传统药用植物中,研究报道其具有抗肿瘤、抗炎、抗寄生虫等药理作用。现对国内外有关Gracillin的结构特征和药理作用等方面进行综述,以期为Gracillin的深入研究及合理开发利用提供理论依据。

淡紫青霉ACCC31890对纤细薯蓣皂苷的生物转化

目的:研究淡紫青霉菌对纤细薯蓣皂苷的生物转化,分离鉴定转化产物并进行药理活性探讨。方法:使用硅胶柱色谱和半制备液相色谱分离转化产物,依据质谱(MS)、核磁共振(NMR)波谱分析进行结构鉴定,并对产物进行了体外抗炎活性的研究。结果:从转化粗提物中分离得到三个依次脱糖基产物,分别为5R-spirost-5-ene-3-ol-O-β-D-Glucopyranoside-(1→3)-β-D-Glucopyranosyl(1),延龄草苷(2)和薯蓣皂苷元(3),转化率分别为1%,1%,45%;体外抗炎活性研究表明三种转化产物对LPS刺激巨噬细胞分泌NO,IL-6和MCP-1具有不同程度的抑制作用,其抗炎活性随着糖链的逐步水解有所增加,以终产物薯蓣皂苷元的抗炎活性最强。结论:淡紫青霉菌转化纤细薯蓣皂苷得到薯蓣皂苷元的产率较高,糖基的数量对甾体皂苷类化合物抗炎活性有着一定的影响。

纤细薯蓣皂苷对破骨细胞的分化及其骨吸收功能的影响

目的:探讨纤细薯蓣皂苷(GRA)对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的破骨细胞分化及其骨吸收功能的影响。方法:从6周龄C57/BL6小鼠的骨髓腔获取骨髓来源巨噬细胞(BMMs)进行培养,首先利用CCK-8试剂盒测定GRA对BMMs增殖的影响,其次,在RANKL诱导的破骨细胞分化过程中加入GRA进行处理,通过TRAP染色观察破骨细胞的数量、形态,再将破骨样细胞种植到羟基磷灰石板上分析GRA对破骨细胞骨吸收功能的影响,最后利用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)分析GRA对破骨细胞相关基因表达情况的影响。结果:GRA在20μmol/mL的浓度以下对破骨细胞前体细胞没有毒性;与对照组相比,GRA浓度为5μmol/mL时能够显著抑制破骨细胞的分化(P<0.001),抑制破骨细胞的骨吸收功能(P<0.001),同时抑制破骨细胞相关基因CTSK、NFATc1、TRAP和DC-STAMP的表达(P<0.01)。结论:GRA能够抑制破骨细胞的分化及其骨吸收功能,为临床预防及治疗因破骨细胞吸收功能增强导致的骨质疏松症提供新的理论依据。

HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷

目的建立HPLC法同时测定不同产地穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷。方法穿山龙药材粉末经50%甲醇超声处理。采用Agilent SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水,梯度洗脱;检测波长203 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;进样体积20μL。结果原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷在1.054 0~10.540 0、0.519 0~5.1900、0.287 0~2.870 0、0.021 2~0.212 0、0.061 4~0.614 0、0.061 4~0.614 0μg线性关系良好,r均大于0.999 0。平均加样回收率分别为100.19%、100.24%、99.87%、100.92%、99.36%、100.03%,RSD值分别为2.03%、2.51%、2.33%、3.07%、2.77%、3.41%。不同产地的穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的质量分数分别为1.587~4.837%、0.260~1.950%、0.477~1.317%、0.037~0.187%、0.801~3.813%、0.088~0.524%。结论该方法快速、简便、准确,可用于穿山龙药材的质量控制。

纤细薯蓣皂苷衍生物及其抗肿瘤活性研究

基于纤细薯蓣皂苷母体结构,通过水解和酯化反应制备了11个纤细薯蓣皂苷衍生物,通过波谱学方法(NMR、MS)确证了其化学结构,其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅸ、Ⅺ均为新化合物.采用改良MTT法对衍生物进行了体外抗肿瘤活性试验,结果显示,纤细薯蓣皂苷衍生物对人慢性骨髓性白血病细胞K562、人肝癌细胞Hep G-2均表现出一定的抗肿瘤活性,一些化合物表现出优于纤细薯蓣皂苷元的抗肿瘤活性,其中的化合物Ⅸ、Ⅺ表现出明显的抗肿瘤活性趋势,尤其化合物Ⅸ,对2种肿瘤细胞的IC50值分别为3.66μg/m L和21.47μg/m L;而且发现糖基部分糖的数量影响化合物抑制肿瘤细胞的活性.

南重楼中纤细薯蓣皂苷的鉴别及含量测定

目的：建立南重楼药材中纤细薯蓣皂苷的定性鉴别及含量测定方法。方法：采用薄层色谱法定性鉴别南重楼药材中的纤细薯蓣皂苷,并采用高效液相色谱法测定纤细薯蓣皂苷的含量。色谱柱为Waters XTerra RP18,流动相为乙腈-水（梯度洗脱）,流速为1.0 ml/min,检测波长为203 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果：纤细薯蓣皂苷的TLC斑点清晰、分离度好。纤细薯蓣皂苷的进样量在0.22~11.10μg范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.999 9）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2%;平均加样回收率为100.81%,RSD为1.83%（n=3）。结论：本方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于南重楼中纤细薯蓣皂苷的定性鉴别及含量测定。

穿山龙中原薯蓣皂苷杂质的分离与鉴定

目的对穿山龙Dioscorea nipponica Makino中原薯蓣皂苷所含杂质的化学成分进行研究。方法从穿山龙提取物中得到原薯蓣皂苷粗品,再采用大孔吸附树脂、制备HPLC法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分得3个杂质,经鉴定分别为黄山药皂苷H(dioscoreside H,1)、原纤细薯蓣皂苷(protogracillin,2)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-呋甾烷-5-烯-3β,22ξ,26-三醇-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(26-O-β-D-glucopyranosyl-[25R]-furost-5-en-3β,22ξ,26-triol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl{1→4}-β-D-glucopyranoside,3)。结论化合物1和3为首次从穿山龙中分离得到。

大孔树脂技术纯化重楼中皂苷单体的工艺研究

目的研究用12种不同型号大孔树脂富集纯化重楼中重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷I的最佳工艺。方法采用HPLC法测定重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ的含量,比较在12种不同型号大孔树脂下3种单体的静态吸附量和解吸率,并根据动态吸附和解析实验,确定最佳的吸附洗脱工艺。结果 ADS-17树脂对3种重楼皂苷单体的吸附能力和解吸率较强,40%乙醇用于除杂,洗脱8个柱体积,90%乙醇用于富集皂苷单体,洗脱15个柱体积,浸膏得率为14.6%,浸膏中重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ的含量分别为64.14、9.50、108.37 mg·g^(-1),转移率分别为87.67%、91.63%、93.98%。结论该工艺能有效富集纯化重楼中重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷和重楼皂苷Ⅰ。

生长年限对滇重楼中甾体皂苷活性成分和生物量积累的影响

目的探究云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis(滇重楼)根茎中甾体皂苷活性成分和生物量积累随生长年限的变化状况,以期为滇重楼的质量控制提供科学依据。方法以7、8、9、11、12、13、14、15年生滇重楼为研究对象,采用HPLC法和直接称重法测定不同年限滇重楼根茎中8种甾体皂苷(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅲ、H、Ⅴ和纤细薯蓣皂苷)含量和生物量。结果8种甾体皂苷活性成分线性关系良好(R^(2)≥0.9995),精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于3%,验证了该方法的可行性;随着年限的增长,滇重楼根茎生物量呈逐渐增长的趋势,其生长发育可分为增长缓慢期(第1~4年)、增长快速期(第5~10年)和增长平缓期(第11年后)3个阶段,其中7年生滇重楼根茎生物量增长最快,平均年增长量达(31.843±14.225)g;滇重楼根茎中8种甾体皂苷成分含量在不同生长年限的变化呈随机波动、无规律,《中国药典》2020版规定的3个指标成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ含量之和与8种甾体皂苷总和的变化趋势一致;用4个主成分对不同年限滇重楼药材进行综合评价,结果显示7年生样品在所有样品中的综合得分位于前7名。结论建立了同时测定滇重楼中8种甾体皂苷活性成分含量的方法,可用于滇重楼的质量评价;滇重楼并非种植年限越长越好,建议以7年生滇重楼采收入药为最佳。

UPLC法同时测定云南重楼栽培品中11种皂苷的含量

目的:建立超高效液相色谱法同时测定云南重楼栽培品中伪原薯蓣皂苷、伪原纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅴ共11种甾体皂苷的含量。方法:采用CORTECS UPLC C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~18 min,30%A→50%A;18~28 min,50%A),流速0.3 mL·min^(-1),检测波长203 nm,柱温30℃,进样量1μL。结果:伪原薯蓣皂苷、伪原纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅴ线性范围分别为2.006~401.2、2.024~404.8、1.972~394.4、1.912~382.4、1.896~379.2、1.772~354.4、2.056~411.2、2.016~403.2、1.970~394.0、1.736~347.2、1.756~351.2μg·mL^(-1);平均回收率(n=6)分别为98.73%、100.30%、101.90%、99.52%、98.33%、100.25%、98.57%、97.70%、101.63%、100.16%和98.80%,RSD分别为2.09%、2.41%、1.77%、2.74%、1.50%、2.35%、2.06%、1.76%、2.82%、2.05%和1.86%。云南重楼栽培品中上述11种甾体皂苷的含量分别为0~0.874、0~0.764、1.066~5.144、0~0.327、1.192~1.952、0~0.455、2.442~6.182、0.394~0.954、0~0.681、2.182~10.105、0~0.674 mg·g^(-1)。结论:该方法可用于同时测定云南重楼栽培品中11种甾体皂苷的含量,为云南重楼药材的质量评价提供参考。

HPLC法测定不同产地重楼属植物中7种甾体皂苷成分

目的研究不同产地重楼属植物主要活性成分甾体皂苷量的差异性,为探讨品种及产地对重楼属植物活性成分的影响提供参考依据。方法采用HPLC法测定不同产地的重楼属6种药材中偏诺皂苷-3-O-α-L-Rha(1→2)[α-L-Rha(1→4)]-β-D-Glc(PGRR),重楼皂苷I、II、VI、VII、H及纤细薯蓣皂苷的量。结果不同重楼属植物中的皂苷种类及其量存在较大差异,滇重楼、巴山重楼以及长药隔重楼的皂苷种类及其量较多;同一品种不同产地的重楼药材,其皂苷的种类及其量亦不同,湖北恩施的金线重楼较重庆巫溪产的皂苷量高,贵州安顺的长药隔重楼皂苷量明显高于湖北来凤产。结论重楼属植物的品种及产地对其活性成分的量及类型有很大的影响。

UPLC法测定云南省不同地区云南重楼及多芽品系中7种甾体皂苷量及其指纹图谱建立

目的以云南省不同地区云南重楼及多芽品系为材料,采用UPLC-ELSD法同时测定7种甾体皂苷量并建立高黎贡山地区样品UPLC指纹图谱,评价其质量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,体积流量0.2 m L/min,漂移管温度55℃,氮气压力275.8 k Pa,增益500,以乙腈-水为流动相梯度洗脱。结果样品在23 min内能完全被分离,方法学考察均符合要求;23份样品中19份符合《中国药典》2015年版要求,《中国药典》项下4个皂苷平均质量分数为1.42%,其中高黎贡山地区的样品平均质量分数高达1.660%;10批次高黎贡山地区云南重楼(多芽品系)样品间相似度小于0.9,标定了8个共有特征峰,并对4个特征峰进行了归属;样品中7个皂苷的种类和量经PCA分析和系统聚类分析均不能明显分类。结论该方法简便、快速、灵敏度高,可用于云南重楼的质量快速评价;云南重楼及其多芽品系在化学成分种类和量上并无明显区别;高黎贡山地区的云南重楼(多芽品系)是一个值得推广栽培和深入研究的品种。

基于七叶一枝花中高含量皂苷类成分的氮、磷、钾配施方案研究

目的研究氮、磷、钾肥配施对七叶一枝花Parispolyphyllavar.chinensis中皂苷类成分含量的影响,以优化七叶一枝花最佳氮、磷、钾配施方案,为其合理施肥提供科学依据。方法以3因素5水平二次回归通用旋转组合设计安排田间试验,采用UPLC-ELSD法测定七叶一枝花中7种皂苷含量,通过方差分析建立回归方程(经F检验),利用模型分析氮、磷、钾配施对各皂苷含量的影响,使用统计频数法筛选最优施肥方案。结果贡献率分析表明,氮肥对重楼皂苷II、V的贡献率最大,磷肥对重楼皂苷H、纤细薯蓣皂苷的贡献率最大,钾肥对重楼皂苷I、Ⅵ、Ⅶ的贡献率最大。单因素分析表明,氮、磷、钾对重楼皂苷Ⅶ、Ⅵ含量有极显著影响(P<0.01);互作效应分析表明,不同浓度的氮肥、磷肥和钾肥的协同作用显著提高重楼皂苷Ⅵ的含量;根据回归模型分析最佳施肥范围,取交集得氮、磷、钾肥最优施肥范围分别为516.39~557.19、2771.70~2848.20、461.61~502.65kg/hm^(2)。结论建立了重楼皂苷与氮、磷、钾肥配施的相关性回归方程模型,有利于七叶一枝花中皂苷类成分含量的提高,为合理施肥提供科学性依据。

滇重楼药材的研究进展及其质量标志物(Q-Marker)预测分析

对滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis化学成分、药理作用、毒性评价及构效关系进行系统综述,依据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)理论,结合滇重楼中化学成分与其功效主治、药性、可测性、质量传递与溯源等方面的关联性分析滇重楼潜在的Q-Marker。在功效与滇重楼中化学成分关联中发现,滇重楼作用于肝、肾、肺、血、胎盘等组织,干预癌症、高血压、癫痫、肝损伤、关节炎等疾病;结合中药Q-Marker理论指导原则,揭示了重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ、H,纤细薯蓣皂苷,蜕皮激素、多糖、黄酮等可作为滇重楼功效相关的Q-Marker,为制定更加科学全面的滇重楼质量控制标准和临床合理应用提供理论依据。

HPLC-DVD变波长法同时测定跌打止痛散中6种指标成分

目的建立HPLC-DVD波长切换联合梯度洗脱法同时测定跌打止痛散（DZS）中6种指标成分羟基红花黄色素A、薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的量。方法采用HPLC-DVD法,Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;乙腈-0.4%甲酸水溶液为流动相,体积流量0.9 m L/min,梯度洗脱;羟基红花黄色素A的检测波长为403 nm,薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的检测波长为203 nm;进样量为20μL。结果 6种指标成分羟基红花黄色素A在3.46-69.20μg/m L（r=0.999 4）、薯蓣皂苷在9.52-190.40μg/m L（r=0.999 7）、原薯蓣皂苷在8.74-174.80μg/m L（r=0.999 6）、甲基原薯蓣皂苷在4.45-89.00μg/m L（r=0.999 9）、伪原薯蓣皂苷在2.64-52.80μg/m L（r=0.999 5）、纤细薯蓣皂苷在3.28-65.60μg/m L（r=0.999 8）质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于2.0%;供试品溶液在室温条件下12 h内稳定;平均加样回收率和相应的RSD分别为98.57%、1.59%;97.64%、1.28%;99.43%、1.07%;97.98%、1.64%;98.57%、1.16%;97.17%、1.37%。结论建立的HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定DZS中的6种成分,方法操作简便、快速、准确,可作为DZS全面可靠的质量控制方法。

重楼多指标UPLC定量分析及其化学品质综合评价

目的探讨10种重楼药材中7种有效成分含量,并进行化学成分整合评控,为其资源评价提供了科学依据。方法收集不同产地55批重楼药材,采用UPLC法测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、薯蓣皂苷、重楼皂苷H、纤细薯蓣皂苷的含量,进一步采用TOPSIS数学模型对含量结果进行归一化与多指标数据集成化,获得重楼中7种指标的化学品质综合指数。结果10种重楼药材的综合评价排名由高到低依次为长柱重楼(Ci=0.2755)>多叶重楼(Ci=0.2732)>大理重楼(Ci=0.2698)>滇重楼(Ci=0.2445)>南重楼(Ci=0.2345)>狭叶重楼(Ci=0.1591)>黑籽重楼(Ci=0.1416)>矮重楼(Ci=0.1178)>七叶一枝花(Ci=0.1151)>毛重楼(Ci=0.1149),表明不同种重楼化学综合质量差异较大,其长柱重楼、多叶重楼和大理重楼的化学综合质量优于滇重楼,南重楼与滇重楼的结果较为接近,可作为滇重楼资源扩充的优势品种。结论通过TOPSIS整合评控对重楼类中药材的质量评价有一定的参考依据。