鸡胚胎期肌纤维分化lncRNA相关ceRNA网络构建

肌纤维的分化直接影响肌肉类型。本研究旨在筛选肌肉中差异表达的长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)和小RNA(microRNA, miRNA),构建lncRNA-miRNA-mRNA调控网络。试验利用玫瑰冠鸡和科宝鸡胚胎期肌肉组织建立lncRNA、miRNA文库,筛选与肌纤维分化相关的胚胎期骨骼肌差异表达的lncRNA和miRNA,进行靶向关系预测、GO和KEGG富集分析并构建lncRNA相关的ceRNA调控网络。结果显示,共有953个lncRNA和909个miRNA在胚胎期8 d和14 d组间差异表达。基于靶向关系预测、靶基因功能富集分析,筛选出与肌纤维分化相关的lncRNA和miRNA,成功构建包含41个lncRNAmiRNA-mRNA关系对的lncRNA相关ceRNA网络。研究结果为丰富后续ceRNA在肌纤维分化的研究提供理论依据,为改善家禽肌肉品质奠定了基础。

烟草HD-ZIP转录因子HD20的克隆及纤维分化功能的研究

旨在揭示烟草HD20在植物纤维分化中的作用。基于前期烟草基因组数据库设计特异性引物,通过RT-PCR克隆获得基因cDNA序列,将其命名为HD20,NCBI登录号为KC339003。该基因全长762 bp,编码253个氨基酸,亚细胞定位于细胞核,其编码的HD-ZIP蛋白由2个不同的结构域组成,包括N末端含有60个氨基酸的HD结构域和其后28个氨基酸组成的ZIP基序。构建植物表达载体,通过农杆菌蘸花法遗传转化拟南芥,经筛选获得阳性转基因植株,其石蜡切片显示,茎部木质部较对照发达。HD20对烟草及拟南芥的纤维分化具有调控作用。

明胶纤维支架促进人牙髓干细胞的成纤维分化

背景:牙髓炎、牙髓坏死使得牙齿丧失活力,牙质变脆易折裂,并且失去牙髓免疫防御反应,如何实现牙髓组织再生成为口腔领域研究热点。支架材料的理化性质、生物相容性等对于干细胞的增殖和分化起关键作用。目的:探讨明胶纤维支架是否能够促进牙髓干细胞向成纤维细胞分化。方法:通过静电纺丝法合成不同浓度的明胶纤维支架,利用扫描电镜观察支架的表面形貌,拉伸实验检测明胶纤维支架的物理学性质。将人牙髓干细胞接种于支架材料表面,利用MTT和RT-PCR方法检测明胶纤维支架对人牙髓干细胞增殖和成纤维分化能力的影响。结果与结论:(1)7.5%的明胶纤维支架纤维直径为(2.02±0.36)μm,交联后纤维直径增大,为(3.15±0.52)μm;15%的明胶支架纤维出现粘结,交联后粘结情况更加显著,纤维结构丧失,呈现平面结构;(2)两种明胶纤维支架均能促进人牙髓干细胞的黏附和生长,第7天时,7.5%明胶纤维支架上的细胞数量明显高于15%明胶纤维支架(P<0.05);(3)7.5%明胶纤维支架组CollagenⅠ、α-SMA、Periostin和Fibronectin的表达水平高于15%明胶纤维支架组(P<0.05);(4)结果表明,7.5%明胶支架的多孔纤维结构更利于细胞的增殖和向成纤维细胞分化。

Fhl1基因敲除对不同年龄小鼠腓肠肌肌纤维分化和自噬水平的影响

目的探索Fhl1(Four and a half LIM domains protein 1)基因敲除(Fhl1-ko)对不同年龄小鼠腓肠肌肌纤维分化和自噬水平的影响。方法以2.5月龄和8月龄的野生型和Fhl1-ko型雄性小鼠为研究对象,应用Western blotting技术检测自噬标记物P62(general transcription factor IIH subunit1), LC3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta)和Beclin1在小鼠腓肠肌中的表达情况。应用定量PCR技术检测不同类型的肌纤维在小鼠腓肠肌中的表达情况。结果与野生型2.5月龄的腓肠肌相比, Fhl1-ko小鼠腓肠肌中LC3BⅡ和Beclin 1明显增加, P62却并没有明显降低。而与野生型8月龄的腓肠肌相比, Fhl1-ko小鼠腓肠肌中LC3BⅡ明显增加, Beclin1表达水平改变没有统计学意义, P62的表达水平明显增加。在2.5月龄鼠中, Fhl1-ko可以明显降低腓肠肌中MYHⅡA, MYHⅡX型肌纤维相对表达量,明显增加MYHⅡB型肌纤维相对表达量。在8月龄鼠中, Fhl1-ko基因敲除可以明显增加腓肠肌中MYHⅠ和MYHⅡA型肌纤维相对表达量。结论 Fhl1-ko对不同年龄小鼠腓肠肌肌纤维分化和自噬水平的影响不同,提示调节自噬水平可能是FHL1基因突变和蛋白缺失所致的骨骼肌肌病的潜在治疗手段,并且针对不同年龄段的患者应采用差异化的精准治疗手段。

不同脂肪酸种类及浓度对棉纤维分化发育的影响

以陆地棉标准系TM-1为材料,利用棉花胚珠离体培养技术并结合对纤维分化发育状态的扫描电镜观察,研究豆蔻酸(C14)、棕榈酸(C16)、硬脂酸(C18)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)、花生酸(C20)、山嵛酸(C22)、木蜡酸(C24)等不同链长脂肪酸以及不同浓度棕榈酸对棉纤维分化发育的影响.结果表明:在离体培养基中添加棕榈酸(C16)对棉纤维的分化发育及伸长有较明显的促进作用,特别是在培养基中添加5.0μmol/L棕榈酸纤维的伸长最明显,其纤维平均长度为1.086mm,比对照增加53.4%,差异具统计学意义(P<0.01),而棕榈酸浓度过高则抑制纤维的伸长;木蜡酸(C24)对纤维伸长也表现出一定的促进作用,纤维平均长度比对照增加21.9%(P<0.05);扫描电镜观察表明,在5.0μmol/L棕榈酸处理下胚珠表面光滑且突起多、密,分布均匀;添加硬脂酸、油酸或山嵛酸的处理几乎没有出现突起.说明在本试验条件下,在棉花胚珠离体培养中促进纤维分化发育的棕榈酸适宜浓度为5.0μmol/L.

棉花游离愈伤细胞成纤维分化和发育的研究

用棉花胚珠切块诱导愈伤组织，经悬浮培养使分化为游离的纤维细胞，对愈伤组织及纤维诱导的条件和影响因素作了探讨。发现大部分愈伤细胞可分化为纤维细胞，适当的生长激素配比，特别是提高GA3浓度及适当的PH（PH5．0）可促进细胞的分化和生长，愈伤组织的年龄、培养基的成分和材料性质等都对愈伤细胞的产生和纤维的分化有影响、对结果进行了分析讨论。

外源性透明质酸对人牙周膜细胞增殖及成牙骨质、成纤维分化的影响

目的:探讨外源性透明质酸(HA)对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及成牙骨质、成纤维方向分化的影响,从而为牙周再生提供新思路。方法:选用Nano HA及150K HA对PDLCs进行刺激。hPDLCs分组:空白对照组(Con);OS组(添加成骨诱导液OS);Nano HA组(+OS+Nano HA);150K HA组(+OS+150K HA)。对各组hPDLCs进行显微镜下细胞形态学观察,WST-1实验检测细胞增殖情况。采用rt-PCR检测牙骨质附着蛋白(CAP),牙骨质蛋白(CEMP1),Scleraxis(SCX),Toll样受体4(TLR4)等基因表达。结果:HA刺激下hPDLCs形态由长梭形或多角形变为圆形或椭圆形,细胞明显收缩。HA均抑制hPDLCs的细胞增殖。HA,尤其是Nano HA抑制hPDLCs中CAP的表达,HA也抑制CEMP1的表达,Nano HA及150K HA之间无明显差异。150K HA前期促进SCX表达,后期抑制SCX的表达。HA促进TLR4在hPDLCs中的表达,尤其是Nano HA。结论:HA可抑制hPDLCs增殖及其成牙骨质方向分化,短期促进长期抑制成纤维分化。

基于巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化的肾间质纤维化病理机制及药物干预作用

在肾间质纤维化过程中,骨髓中募集的巨噬细胞可在损伤的肾脏中直接转化为肌成纤维细胞。巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)是肾间质纤维化的重要病理机制之一。在MMT过程中,巨噬细胞的活化受转化生长因子-β1、Janus激酶3/信号转导及转录活化因子6、Wnt等信号通路调控,阻断这些信号通路可抑制MMT,改善肾间质纤维化。在临床及体内外实验中,针对防治肾纤维化的药物干预研究较活跃,其中某些药物的干预作用可能与巨噬细胞及MMT相关。因此,深入研究肾脏MMT的病理机制及药物干预作用可以为相关疾病的治疗提供新思路。

DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制小鼠肾小球内皮细胞转分化和肾纤维化

目的 基于分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)通过转化生长因子β/Rho相关激酶1(TGF-β/ROCK1)信号通路探讨对肾小球内皮细胞转分化的保护机制。方法 将小鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组,每组6只。除假手术组外,其余组建立UUO模型。空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组,于第0天(UUO后立即)在超声系统的引导下每侧肾脏注射10μL(108个嗜菌斑形成单位[PFU])空载体或DEC2载体。术后14 d处死小鼠,HE染色检测肾组织学病变情况、 Masson染色检测肾纤维化情况,Western blot法检测肾组织DEC2、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、 Rho相关激酶1(ROCK1)的蛋白表达。正常人肾小球内皮细胞(GEnC),采用ROCK1抑制剂Y-27632处理或转染DEC2, Western blot法检测暴露于TGF-β的GEnC中ROCK1、 α-SMA、 DEC2、 E-cadherin表达影响。通过免疫荧光细胞化学染色检测GEnC中ROCK1和DEC2定位,并通过免疫共沉淀实验验证二者的相互作用关系。结果 与假手术组相比,UUO组在第14天出现显著的肾纤维化和胶原蛋白积聚。在UUO组中,小鼠肾组织中DEC2和E-cadherin的表达显著降低,α-SMA的表达显著增加。与空载体处理的UUO组相比,过表达DEC2的UUO组小鼠肾纤维化和胶原蛋白积聚程度降低,并且小鼠肾组织中ROCK1、 α-SMA表达降低和DEC2、 E-cadherin表达增加。TGF-β以时间依赖性方式增强GEnC中ROCK1和α-SMA表达,并且DEC2、 E-cadherin水平降低。用ROCK1抑制剂Y-27632处理可部分消除TGF-β诱导的ROCK1、 α-SMA表达增加和DEC2、 E-cadherin表达降低。此外,在TGF-β刺激前,将GEnC转染DEC2降低细胞中ROCK1、 α-SMA表达,并增加DEC2、 E-cadherin表达。免疫荧光染色显示DEC2在GEnC中与ROCK1共定位,并且免疫共沉淀结果显示DEC2与ROCK1相互拉低。结论 DEC2在纤维化肾组织中下调,上调DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制GEnC的上皮肌纤维母细胞转分化及肾纤维化。

一例驴阴茎旁高分化纤维肉瘤的诊断与治疗

高分化纤维组织肉瘤属于低度恶性肿瘤,治疗以早期手术大块广泛切除为主。本文对一例阴茎旁增生肿物的一5岁种公驴进行诊治,诊断时采取了病史调查和常规诊断。采取水合氯醛等全身复合麻醉方法,对肿物进行手术切除,手术治疗效果良好。通过病理学分析发现,肿物为高分化纤维组织肉瘤。通过对本病例的诊断以及治疗过程,对今后此类疾病的相关研究提供相关临床数据。

Hippo-YAP信号通路在FGF诱导的晶状体上皮细胞增殖和纤维分化中的作用

转录共激活物-Yes相关蛋白（YAP）及其调控途径-Hippo在控制晶状体发育过程中的细胞生长和命运中起重要作用,而成纤维细胞生长因子（FGF）是晶状体细胞行为的调节因子。为了揭示Hippo-YAP信号通路在FGF诱导的晶状体上皮细胞增殖和纤维分化中的作用,本研究将大鼠晶状体上皮外植体与FGF一起孵育以诱导上皮细胞增殖和纤维形成,采用免疫标记法检测Hippo信号传导成分和磷酸化YAP的表达。结果显示,FGF诱导的晶状体细胞增殖与Total-YAP的强核定位及磷酸化YAP的低染色水平相关。FGF诱导的晶状体纤维分化与磷酸化YAP及核心Hippo信号传导组分的升高有关。使用维替泊芬抑制YAP后,可显著抑制FGF诱导的晶状体细胞增殖。FGF在晶状体细胞增殖和分化过程中促进Hippo/YAP信号传导,其中FGF诱导的核YAP表达在促进晶状体上皮细胞增殖中发挥重要作用。

天然有色棉纤维早期分化发育的细胞形态观察

应用石蜡切片技术对大田生长的天然有色棉(陆地棉)纤维的早期分化发育进行了研究。有色棉胚珠表皮细胞分化、突起时与普通白色棉一样,具有明显的形态学变化。但是,有色棉纤维突起的时间较白色棉迟,早期纤维细胞的伸长相对较慢,开花当天及开花后一天有色棉F/E值显著低于白色棉。

转化生长因子β1对人牙髓干细胞成纤维向分化的作用

目的 研究不同浓度转化生长因子β1(TGF-β1)促进人牙髓干细胞(hDPSCs)成纤维分化的作用。方法 利用含有不同浓度(1、5、10、20 ng/m L)TGF-β1的细胞培养基培养h DPSCs,分别在第1、3和7天时检测细胞增殖情况;在第7和14天时,采用RT-PCR方法检测成纤维相关因子[I型胶原蛋白(Collagen I)、纤连蛋白(Fibronectin)、骨膜蛋白(Periostin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]的表达情况。结果 MTT结果显示,第7天时,TGF-β1(1 ng/mL和5 ng/mL)可明显促进hDPSCs增殖。RT-PCR结果表明:第7d时,1ng/m L组、5 ng/m L组和10 ng/m L组Collagen I的表达水平分别为对照组的8.2倍、9.3倍和8.1倍,α-SMA的表达水平分别为对照组的6.2倍、6.7倍和5.8倍。5 ng/mL和10 ng/mL组的Periostin表达水平相近,约为1 ng/mL和20 ng/mL组的3.2倍和1.8倍(P<0.05)。第14天时,各实验组的成纤维相关因子表达水平均下降,但仍高于对照组。结论 TGF-β1可以促进h DPSCs的成纤维分化,浓度为10ng/mL时效果最明显。

棉花胚珠的形态学特征与纤维细胞的分化

以陆地棉(G.hirsutum)品种鲁棉1号为材料研究了棉花开花前后胚珠的形态学特征和纤维细胞的分化。结果表明,倒生的棉花胚珠可以分为合点区、株柄顶区、腰区和珠孔区。开花前8小时首先在珠柄顶端分化出半球状纤维细胞,合点区和腰区继之,最后在珠孔区。合点中心要比合点区迟8～12小时。胚珠内维管组织的联络方式是珠柄—珠柄顶—合点区—腰区一珠孔区开花前后胚珠表面有大量气孔分布,以合点区最多。维管组织联络方式和气孔的分布特征可能影响了胚珠不同部位纤维细胞的分化。

心脏成纤维细胞分化可能与DNA甲基化修饰调控有关

目的:以转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)体外诱导心脏成纤维细胞分化,探讨其中DNA甲基化的调控作用。方法:分离培养SD大鼠心脏成纤维细胞并行免疫细胞化学鉴定。取P1代细胞,分别以TGF-β1、DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMT)抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-d C)及TGF-β中和抗体进行干预。Western blot及细胞免疫荧光检测α平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,实时定量PCR检测α-SMA以及DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的基因表达,并进行DNMT活性测定。结果 :与对照组相比,TGF-β1与5-aza-d C一样均可诱导心脏成纤维细胞表达α-SMA,且TGF-β1可显著抑制总DNMT的活性(P<0.05),并可抑制DNMT1及DNMT3a的表达(P<0.01),但对DNMT3b的表达无明显影响(P>0.05)。结论:心脏成纤维细胞分化可能与DNA甲基化修饰调控有关,本研究从表观遗传学角度为心肌纤维化防治研究提供了新的治疗靶点。

波形蛋白与晶状体纤维细胞分化及白内障形成

波形蛋白在晶状体上皮细胞中表达。随着晶状体上皮细胞分化成晶状体纤维细胞及其不断的老化 ,波形蛋白逐渐减少。本综述总结了利用转基因技术研究波形蛋白在晶状体中的表达调控 ,及其与晶状体纤维细胞分化、白内障形成的关系。

肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化在糖尿病肾病中的临床意义

目的通过糖尿病肾病患者肾脏标本探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（EMT）在糖尿病肾病中的临床意义.方法：肾穿刺活检取糖尿病肾病患者肾脏组织,通过Westernblot检测E-cadherin及α-SMA 蛋白的表达,免疫组化观察E-cadherin及α-SMA 的表达特征,Realtime-PCR 检测ColIRNA 基因的表达,并常规查空腹血糖、血清肌酐及24h尿蛋白水平.结果：共入选61例患者,其中-期10例,二期11例,三期12例,四期15例,五期13例,正常对照组13例.随着分期增加患者肾组织E-cadherin表达下降,α-SMA 及ColImRNA 表达上调;α-SMA、ColⅠ 变化趋势与血糖、24h尿道白及肌酐变化呈正相关关系;而E-cadherin表达趋势与上述指标改变呈负相关关系.结论：EMT 在糖尿病肾病中发挥着非常重要的作用,能够导致糖尿病肾病患者肾功能的严重下降.

温度胁迫对棉花纤维细胞分化的影响

温度胁迫对棉花纤维细胞分化的影响ＥｆｆｅｃｔｏｆＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅＳｔｒｅｓｓｏｎＣｏｔｔｏｎＦｉｂｅｒＩｎｉｔｉａｔｉｏｎ棉纤维由单个的胚珠表皮细胞经分化、伸长、次生壁增厚和脱水成熟四个阶段发育而成。分化启始是纤维发育的基础，决定单粒种子上的纤...

力生长因子对牙周膜干细胞增殖分化的影响

目的探讨力生长因子(mechano⁃growth factor,MGF)对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),流式细胞仪检测表面标志物,并观察分选细胞的克隆形成能力及多向分化能力;CCK8法检测不同浓度MGF功能肽段(MGF⁃Ct24E肽)作用下PDLSCs的增殖活性;Western blot检测MGF⁃Ct24E肽作用下PDLSCs中的增殖细胞核抗原(pro⁃liferating cell nuclear antigen,PCNA)、碱性螺旋环螺旋转录因子Scleraxis、Ⅰ型胶原ɑ1(collagen type I alpha 1,COL1A1)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、Yes相关蛋白(Yes⁃associated protein,YAP)、磷酸化YAP(phosphory⁃lation yes⁃associated protein,P⁃YAP)蛋白表达量;免疫荧光观察YAP的表达情况;siRNA干扰YAP表达后,观察PDLSCs中MGF⁃Ct24E作用下PCNA、Scleraxis和COL1A1的表达。结果免疫磁珠分选的PDLSCs高表达干细胞表面标志物CD29、CD90、CD105,低表达造血细胞表面标志物CD34、CD45;细胞具有较强的克隆形成能力,成骨诱导茜素红染色后可见红色钙结节,成脂诱导油红O染色后可见红色脂滴;50 ng/mL和100 ng/mL MGF⁃Ct24E肽作用24 h后,PDLSCs的增殖活性增强(P<0.05);细胞中PCNA、Scleraxis和COL1A1蛋白表达上调,而Osterix蛋白表达量下调(P<0.05);50 ng/mL MGF⁃Ct24E肽作用24 h后,YAP蛋白357位点磷酸化水平增强(P<0.05),免疫荧光染色观察发现,YAP蛋白在胞核聚集;MGF⁃Ct24E肽作用下,siRNA抑制YAP表达后,细胞中PCNA、Scler⁃axis蛋白表达量下调(P<0.05)。结论MGF通过激活YAP促进PDLSCs增殖及成纤维分化。

sTβRⅡ拮抗新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad信号和肌成纤维细胞分化

目的研究可溶性转化生长因子-β1Ⅱ型受体(sTβRⅡ)对新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad信号和肌成纤维细胞分化的抑制效应。方法培养新生大鼠的心肌成纤维细胞,随机分为4组:PBS对照组、TGF-β1(5ng/ml)组、sTβRⅡ(50ng/ml)组和TGF-β1+sTβRⅡ组。30min、1h和2h后,免疫细胞化学染色检测P-Smad2和Smad3的表达;24h后,免疫细胞化学染色检测α-SMA的表达。结果与PBS对照组相比,TGF-β1组P-Smad2、Smad3(核阳性率)和α-SMA的表达显著性升高(P<0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+sTβRⅡ组P-Smad2、Smad3(核阳性率)和α-SMA的表达明显降低(P<0.05)。结论sTβRⅡ可拮抗新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad2/Smad3蛋白的磷酸化与核转位,阻断Smad信号转导通路,抑制肌成纤维细胞分化。