不同品质粗饲料日粮对瘤胃发酵及主要纤维分解菌的影响

【目的】研究不同品质粗饲料组成的混合日粮对绵羊瘤胃发酵功能和3种主要纤维分解菌的影响。【方法】以粗饲料分级指数GI为指标对粗饲料品质进行调配,在精粗比为2﹕8条件下配制3种混合日粮,其中含高GI粗饲料日粮组(H组,GI值=2.89)、含中GI粗饲料日粮组(M组,GI值=1.73)和含低GI粗饲料日粮组(L组,GI值=0.65)。利用16SrRNA特异性寡核苷酸探针杂交法测定3种纤维分解菌的数量变化。【结果】三组试验动物瘤胃液pH维持在正常范围,各组间差异不显著(P>0.05),但H组pH变化更为平缓。随着GI指数的升高,瘤胃液NH3-N浓度呈升高势态,H组显著高于L组(P<0.05),乙酸浓度有降低的趋势,而丙酸浓度则有上升的趋势,乙酸/丙酸出现降低趋势,各试验组TVFA浓度的平均值差异不显著(P>0.05)。黄化瘤胃球菌在绵羊瘤胃中相对含量的总平均值为1.18%,白色瘤胃球菌的相对含量为2.44%,琥珀酸拟杆菌的含量为10.07%。【结论】不同品质粗饲料日粮显著影响绵羊瘤胃产琥珀酸丝状杆菌的数量,随着粗饲料品质的升高,该菌的数量有增加的趋势;不同品质粗饲料日粮改变了瘤胃的发酵方式和发酵功能。

柴胡中草药对奶牛瘤胃菌群多样性及纤维分解菌的影响

通过DGGE和RT-PCR技术研究日粮中添加不同剂量的柴胡中草药对奶牛瘤胃细菌多样性和主要纤维分解菌(琥珀酸丝状杆菌、黄色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌)的影响。根据产奶量(37.5±1.8)kg/d、泌乳天数(75±15)d以及胎次(1.7±0.4)等相近的原则,将40头健康的中国荷斯坦泌乳奶牛随机分为4组(n=10),分别饲喂4种不同的处理日粮,即在基础日粮中分别添加0,0.25,0.50和1.00g/kg的柴胡中草药(DM基础)。试验持续10周,并在第6周口腔采集瘤胃液,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)和实时定量PCR(RT-PCR)对瘤胃细菌进行分析。DGGE图谱显示,中草药添加组和空白对照组并没有显著的差异条带,但其指纹图谱相似性并不高,均低于0.54,且1.00g/kg的添加量显著降低了瘤胃液细菌香农多样性指数,而0.50和1.00g/kg的添加量则提高了菌群优势度指数(P<0.05);RT-PCR结果显示,柴胡中草药对奶牛瘤胃主要纤维分解菌并没有显著的影响。因此,柴胡中草药在一定程度上影响了瘤胃细菌的多样性,但差异并不显著,可能由于瘤胃微生物适应了柴胡中草药的添加。

谷氨酰胺和L-肉碱对低温下肉羊瘤胃纤维分解菌的影响

本试验研究了饲粮中添加谷氨酰胺和L-肉碱对低温下肉羊瘤胃纤维素分解菌的影响,旨在了解谷氨酰胺和L-肉碱在减缓低温应激中的作用,为生产实践中应用抗应激剂提供理论依据和参考。试验选用9只健康东北细毛羊×德国肉用美利奴杂交肉羊,采用L9(34)正交试验设计,设3个谷氨酰胺水平(0、0.6%、1.2%)与3个L-肉碱水平(0、75、150m g/kg)。试验羊在低于正常饲养温度(由10℃降至0℃)条件下,饲喂添加不同水平谷氨酰胺和L-肉碱的饲粮。结果表明,谷氨酰胺有降低瘤胃白色瘤胃球菌相对含量的趋势(P>0.05),L-肉碱能显著降低瘤胃白色瘤胃球菌的相对含量(P<0.05),二者复合使用有缓解瘤胃白色瘤胃球菌相对含量下降的趋势;谷氨酰胺能显著提高瘤胃黄化瘤胃球菌相对含量(P<0.05),L-肉碱有提高瘤胃黄化瘤胃球菌相对含量的趋势(P>0.05),二者复合使用能进一步提高瘤胃黄化瘤胃球菌的相对含量(P>0.05);谷氨酰胺和L-肉碱有降低瘤胃产琥珀酸丝状杆菌相对含量的趋势(P>0.05),但二者复合使用有缓解瘤胃产琥珀酸丝状杆菌相对含量下降的趋势。结果提示:谷氨酰胺和L-肉碱在低温下复合使用能缓解瘤胃白色瘤胃球菌、产琥珀酸丝状杆菌相对含量的下降,提高瘤胃黄化瘤胃球菌相对含量。经比较分析,低温环境下肉羊饲粮谷氨酰胺和L-肉碱的添加量分别为1.2%和75mg/kg时可有效改变瘤胃微生物菌群,提高机体抵抗冷应激的能力。

纤维分解菌群对水稻秸秆田间腐熟效果的研究

稻草秸秆接种分解菌群还田，可以加速稻草秸秆在田间的软化和分解。与不接种相比，经３４ｄ ，秸秆分解率提高１３ ．６２ ％ ；经一季小麦生长，当季还田秸秆可完全被腐熟分解，收获后土壤容重下降０ ．０７ｇ／ｃｍ ３ 。小麦生长性状与不接种纤维分解菌群的相比，播种后７５ｄ ，次生根增加１１ ．８７ ％ ，分蘖数增加３７ ．５ ％ ，单株干重增加１９ ．７７ ％ ；营养生长后期，剑叶长增加３ ．４２ ％ ，宽增加７ ．８８ ％ ，株高增加４ ．９５ ％ ，第一、二、三节间长分别下降５０ ．５８ ％ 、１６ ．６ ％ 和８ ．８ ％ ；成熟时，有效穗增加４ ．２２ ％ ，每穗实粒数增加１ ．７２ ％ ，千粒重增加２ ．０８ ％ ，实际产量增加８ ．４２ ％ 。

瘤胃纤维分解菌多纤维素酶体及其类似物的研究进展

反刍动物瘤胃微生物能够有效地降解粗饲料,瘤胃细菌特别是纤维分解菌在此过程发挥了特别重要的作用。近年来的研究表明,只有与饲料颗粒相黏附的细菌才直接负责纤维物质的降解,可见黏附是瘤胃细菌降解纤维物质的关键步骤。多纤维素酶体是某些厌氧细菌和真菌产生的、能使微生物细胞与纤维物质发生黏附并高效降解纤维物质的多酶复合体。本文综述了多纤维素酶体的分子结构、瘤胃中主要纤维分解菌的多纤维素酶体及其类似物等方面的研究进展。

日粮可降解蛋白与非纤维性碳水化合物对人工瘤胃发酵、微生物合成以及纤维分解菌菌群的影响

【目的】探讨瘤胃降解蛋白(rumen degradable protein,RDP)水平和非纤维性碳水化合物(non-fibrecarbohydrates,NFC)类型对人工瘤胃发酵、微生物合成和纤维分解菌菌群的影响。【方法】采用2×4双因素试验设计,即2种RDP水平和4种NFC类型(玉米淀粉、蔗糖、柑橘果胶和菊粉)。RDP水平通过向4种日粮中分别添加0(低RDP)或1.56 g(高RDP)酪蛋白酸钠调节。【结果】①主效应上,蔗糖和果胶组的干物质和有机物质表观消失率显著高于其它两组(P<0.01);日粮RDP水平和NFC来源在影响中性洗涤纤维的表观消失率上存在交互作用(P<0.01),低RDP水平的蔗糖(P=0.10)和果胶组(P=0.09)趋向于低于淀粉组,但高RDP水平的处理组间差异不显著;②主效应上,果胶组中白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)的16S rDNA拷贝数高于淀粉组;日粮RDP水平和NFC种类在影响黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)和液相产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)的16S rDNA拷贝数方面存在交互作用,蔗糖组固相R.flavefacien在低RDP下的拷贝数和菊粉组液相F.succinogenes在高RDP下的拷贝数分别趋向于低于(P=0.06)和低于(P<0.01)淀粉组;③增加日粮RDP水平可以提高所有处理组的总挥发性脂肪酸产量(P<0.01)和总微生物氮(microbialnitrogen,MN)流量(P<0.01);主效应上,果胶组的乙酸摩尔比例(P<0.05)和乙丙比最高(P<0.01);不论RDP水平,蔗糖和菊粉组的丁酸摩尔比例均高于其它处理组(P<0.01);低RDP下各处理组的总MN流量差异不显著,但提高RDP使蔗糖和果胶组的总MN流量分别高于(P<0.01)和趋向(P=0.10)高于淀粉组;主效应上,淀粉组的N利用效率低于蔗糖(P=0.04)和果胶组(P=0.05)。【结论】日粮RDP水平和NFC类型在影响瘤胃发酵、微生物合成和纤维分解菌菌群方面存在交互作用,当日粮中含有足够的瘤胃可利用氮时,蔗糖和果胶较淀粉在促进微生物蛋白合成方面具有优势。

纤维分解菌对稻草田间腐解和水稻生长发育的影响

通过室内模拟试验、发酵试验和2年稻田水稻栽培试验验证了自选纤维分解菌的腐草效果。结果表明,环境条件在稻草腐解过程中起至关重要的作用,如适当的水分管理、良好的通气状况、较高土壤肥力和生物活性等有利于稻草快速降解。所选纤维分解菌在3种试验条件下均能明显的促进稻草快速腐解,且不同菌种混合接种的腐草效果好于单一菌种接种。室内模拟试验中施用纤维分解菌的稻草腐解率比未施用的30d内提高12.6%～22.8%。在较好的培养条件下,接种纤维分解菌的稻草腐解率比模拟田间条件下的自然腐解率30d内提高42.7%～59.9%。田间试验表明,稻草翻埋并接种纤维分解菌的稻草腐解率比稻草翻埋不接种的对照60d内提高3.5%,稻草覆盖并接种纤维分解菌的稻草腐解率比稻草覆盖不接种的对照60d内提高10.7%。连续2年的田间试验表明稻草还田结合此菌剂的施用,可减轻和防止多量稻草还田给水稻生长带来的不利影响,提高水稻的结实率、千粒重和每穗总粒数,从而提高水稻的产量,以稻草覆盖的产量提高较明显。

优良纤维分解菌的筛选及其产酶研究

从４０多个国内外产纤维素酶的菌株中筛选出纤维素分解酶活较高的绿色木霉ＮＦ４。该菌在以未经特别处理的稻草粉为主要碳源的固体发酵条件下，每克纤维素每天产纤维素酶活力可达４８个国际单位，其酶促反应的最适酸碱度和温度分别是ｐＨ４．８和６０℃，而半纤维素酶则分别为ｐＨ４．２和５５℃。

3种瘤胃纤维分解菌实时定量PCR方法的建立

为探索以减毒胞内侵袭菌介导的黏膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,本试验以白色瘤胃球菌、黄化瘤胃球菌和产琥珀酸丝状杆菌3种主要瘤胃纤维分解菌16SrRNA分别设计引物,以山羊瘤胃液提取细菌总DNA,分别扩增3种纤维分解菌目的DNA片段,并连接至pMD-18TVector上,经PCR和测序鉴定后,以不同稀释度的重组质粒为模板进行荧光定量PCR反应。结果显示,扩增得到的3种瘤胃纤维分解菌目的片段与已知菌种相应片段的同源性大于99%;以不同稀释度重组pMD-18T为模板建立的荧光定量PCR扩增曲线差异明显,绘制标准曲线的相关系数均接近1,熔解曲线均呈单一峰值。因此,本试验成功建立了3种瘤胃主要纤维分解菌的实时定量PCR方法,为减毒胞内侵袭菌介导的黏膜免疫研究奠定了基础。

生长育肥猪后肠纤维分解菌的数量及微生物发酵作用

本试验采用严格厌氧微生物学方法 ,对生长肥育猪的盲肠、结肠和直肠内容物中总厌氧菌和纤维分解菌的数量、纤维素酶活性、氨态氮和VFA含量进行了测定。结果表明 ,盲肠和直肠内容物中纤维分解菌的数量显著高于结肠(P<0.01) ;盲肠内容物中羧甲基纤维素酶活性最高 ,其次是结肠 ,直肠最低(P<0.05) ;直肠和盲肠的氨态氮浓度显著高于结肠(P<0.05) ;盲肠、结肠和直肠的总VFA含量分别为82.79、154.47和143.80mmol/L ;乙酸的摩尔百分比为盲肠>结肠>直肠 ;丙酸的摩尔百分比无明显改变 ;丁酸的摩尔百分比为盲肠<结肠<直肠(P>0.05)。本试验证明 ,饲喂玉米—豆粕型日粮的生长肥育猪后肠中存在相当数量的纤维分解菌 ,盲肠、结肠和直肠内容物中纤维分解菌的数量分别占可培养微生物区系的8.6 %、3.1 %和22.1 %。后肠微生物发酵类型为乙酸发酵型。

实时荧光定量PCR对瘤胃纤维分解菌定量方法的构建

试验构建了白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌及产琥珀酸丝状杆菌等3种瘤胃纤维分解菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线,以用于纤维分解菌的定量测定。提取瘤胃微生物总DNA,以各菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pMD18-T Vector连接并转化到大肠杆菌。用氨苄青霉素培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果表明:所构建的3条标准曲线具有很高的相关性(R2>0.999),并获得了高扩增效率产物(白色瘤胃球菌为101%、黄色瘤胃球菌为98.0%、产琥珀酸丝状杆菌为97.7%),说明成功构建了瘤胃纤维分解菌实时绝对定量PCR的标准品和标准曲线,为定量研究瘤胃纤维分解菌奠定基础。

羊草茎在奶牛瘤胃中降解特性及其对食糜纤维分解菌数量的影响

本试验旨在研究羊草茎降解特性和紧密吸附于茎的3种主要纤维分解菌的动态变化。选用羊草茎为试验材料,将其纵切6份后装入尼龙袋投入瘤胃中,分别在6,12,24,48和72h取出,利用扫描电子显微镜观察超微结构变化;取粉碎后羊草茎进行尼龙袋试验,分别在0.5,2,6、12,24,48和72h取出,测定不同时间点中性洗涤纤维（neutral detergent fiber,NDF）降解率和吸附在茎中3种主要纤维分解菌的数量变化。结果表明,薄壁组织和韧皮部可被瘤胃微生物降解,维管束会伴随薄壁组织的降解而发生脱落。羊草茎和食糜不同时间点纤维分解菌数量均为产琥珀酸丝状杆菌〉白色瘤胃球菌〉黄色瘤胃球菌,茎中产琥珀酸丝状杆菌和黄色瘤胃球菌数量在24h达峰值,分别为10~9和10~5 copy/g羊草茎,白色瘤胃球菌在12h达峰值,为10~8 copy/g羊草茎。瘤胃食糜中3种纤维分解菌的数量在24h内基本处在一个恒定的水平,而羊草茎NDF降解率在72h内逐渐提高,羊草NDF降解率与瘤胃食糜中3种纤维分解菌数量不同步,这可能与纤维分解菌分泌的酶活力存在滞后有关。

日粮中添加不同纤维分解菌对鹅生产性能的影响

为研究日粮中添加不同纤维分解菌对鹅生产性能的影响,试验选用0日龄健康农安本地鹅64只,随机分成4组,每组16只。试验组从0日龄每3d饲喂一次纤维分解菌,喂菌量为109 CFU/mL,纤维分解菌分别为:从鹅肠道内分离扩增的芽孢纤维分解菌(A组);从白蚁肠道内分离扩增的芽孢纤维分解菌(B组);从牛粪中分离扩增的芽孢纤维分解菌(C组);对照组用等量的蒸馏水代替。测定鹅日增重、采食量、料重比。结果表明,A、B、C组提高了鹅的日增重、采食量,显著降低了料重比,B组作用效果较好、A组次之,C组较差。

纤维素－刚果红培养基对土壤纤维分解菌的直接计数

介绍了一种新的鉴别培养基，含酸洗纤维素和染料刚果红．纤维分解菌能在其上产生一清晰可见的红色水解圈，明显区别于其它微生物类群．用该培养基可快速。

银杏叶提取物对山羊瘤胃纤维分解菌的影响

以3只安装永久性瘤胃瘘管的山羊为试验动物,以淀粉、纤维素和酪蛋白为底物,银杏叶提取物在瘤胃培养液底物的浓度设为0(对照组)、0.30%、0.60%、0.90%、1.20%5个水平,利用相对定量PCR法分析银杏叶提取物对山羊瘤胃内3种主要纤维分解菌的影响,结果表明,银杏叶提取物能够极显著提高产琥珀酸拟杆菌的数量(P<0.01),显著提高黄色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌的数量(P<0.05)。

鹅肠道纤维分解菌的分离与鉴定

大量的研究表明，鹅能不同程度的利用饲粮中的纤维类物质，而微生物在鹅对纤维类物质利用的过程中起到了至关重要的作用。本研究在对吉林白鹅消化道正常菌群定植规律的研究基础上，对吉林白鹅肠道内纤维分解菌进行筛选与鉴定，从而获得高酶活力的菌株，

内蒙古白绒山羊瘤胃中内纤毛虫及三种纤维分解菌的定量研究

试验采用荧光定量PCR技术,在不同精粗比日粮条件下对内蒙古白绒山羊瘤胃内容物中内纤毛虫和3种主要纤维分解菌进行定量研究。结果表明:日粮中粗料比例增加,内纤毛虫(Ento-dinium)的数量降低,组间差异不显著(P>0.05);日粮中粗料比例增加,产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)和白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)的数量均增加,组间差异不显著(P>0.05)。

不同保护剂对纤维分解菌冷冻保存活性的作用

目的:添加甘油、蔗糖、葡萄糖、蛋黄作为纤维分解菌冷冻干燥的保护剂,筛选最有利于纤维分解菌冷冻干燥保存的保护剂,为优化纤维分解菌冷冻干燥低温保存保护剂提供参考。方法:添加甘油、蔗糖、葡萄糖、蛋黄作为4个试验组,添加量均为10%,每个试验组3个重复,同时设置1个不含保护剂的空白对照组。预冻时间设为12h和24h,采用羧甲基纤维素钠半固体培养基与稀释至107级的菌悬液混匀的方法培养冷冻干燥处理前后的纤维分解菌,37℃培养12h,观察处理前后每个培养皿中单个菌落数并计数。结果:预冻时间为12h,甘油处理组、空白对照组与蛋黄处理组、葡萄糖处理组、蔗糖处理组间差异极显著(P<0.01),甘油处理组与空白对照组间差异显著(0.05>P>0.01);预冻时间为24h,蔗糖处理与空白对照组间差异显著(0.05>P>0.01),蛋黄处理与蔗糖处理、甘油处理、空白对照组间差异极显著(P<0.01)。结论:预冻时间为12h和24h,均以蛋黄处理组的复活率最高,不加保护剂的复活率最低。随着预冻时间的延长,每个不同处理组的复活率都有所减小。预冻时间12h,蛋黄处理组的复活率在试验中最高,保护效果最好。

两种山羊瘤胃纤维分解菌16S rDNA序列的体外扩增和鉴定

从山羊瘤胃内容物中提取瘤胃细菌总DNA，以瘤胃中两种主要纤维分解茵为目的菌种，分别依据其16S rDNA序列设计引物，利用PCR技术对其16S rDNA进行体外扩增，对扩增产物测序后进行同源性分析。结果表明：以提取的瘤胃细菌总DNA为模板，采用PCR技术可成功地从山羊瘤胃内容物中扩增出黄色瘤胃球菌和产琥珀酸丝状杆菌16S rDNA的特异性片段；测序后与GenBank中的序列进行比对，表明黄色瘤胃球菌与原序列（AF104841）的同源性达到99．4％，产琥珀酸丝状杆菌与原序列（AJ505937）的同源性达到94．6％。

2-甲基丁酸对断奶前后犊牛瘤胃发酵、酶活及纤维分解菌菌群的影响

通过研究日粮添加2-甲基丁酸对断奶前后犊牛瘤胃发酵、酶活及纤维分解菌菌群的影响,旨在探讨其对犊牛瘤胃发育的影响。试验选取32头体重(46.45±0.37)kg15日龄的荷斯坦哺乳公犊,随机分为4组,每组8头,对照组犊牛断奶前饲喂鲜奶,断奶后饲喂犊牛料和苜蓿干草,试验组在对照组日粮基础上分别添加3、6和9g·d^(-1)的2-甲基丁酸,犊牛在45日龄断奶,分别于30和90日龄时从各组抽取4头,晨饲前称重后进行屠宰并采样测定指标。结果表明,90日龄犊牛瘤胃总挥发性脂肪酸及乙酸与丙酸比例,滤纸酶、羧甲基纤维素酶、纤维二糖酶、木聚糖酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶和蛋白酶的活力,溶纤维丁酸弧菌、白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌和产琥珀酸丝状杆菌的数量,较30日龄均显著增高(P<0.05),而pH和氨态氮浓度均显著降低(P<0.05)。日粮添加6和9g·d^(-1)的2-甲基丁酸,较对照组显著降低了瘤胃pH,较3g·d^(-1)和对照组显著降低了氨态氮浓度(P<0.05),日粮添加9g·d^(-1)的2-甲基丁酸较3g·d^(-1)和对照组显著提高乙酸与丙酸比例,较3g·d^(-1)和对照组显著提高滤纸酶、羧甲基纤维素酶、纤维二糖酶、木聚糖酶、α-淀粉酶和β-淀粉酶的活力,较3g·d^(-1)和对照组显著提高纤维丁酸弧菌、白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌和产琥珀酸丝状杆菌的数量,但对蛋白酶的活力无显著影响(P>0.05)。结果提示,2-甲基丁酸通过刺激纤维分解菌和淀粉分解菌的生长提高瘤胃纤维分解酶和淀粉降解酶的活力,从而促进瘤胃发酵和瘤胃的发育;根据各项指标综合考虑,建议2-甲基丁酸的适宜添加量为6g·d^(-1)。