四氯化碳诱导C57BL/6J小鼠肝纤维化模型建立方法及优化

目的通过不同给药方式不同剂量四氯化碳诱导的C57BL/6J小鼠肝纤维化模型,通过影像学、分子生物学及组织病理学等方法进行比较,以此优化四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型。方法36只健康C57BL/6J雄性小鼠,适应性饲养1周后,随机分为空白组、2周组、3周组、4周组、6周组及8周组共6组(n=6),除空白组外均作为阳性对照组。空白组以橄榄油0.2 mL腹腔注射,每周3次,各阳性对照组以20%CCl4-橄榄油溶液腹腔注射,剂量为2 mL/kg,每周3次。记录各组小鼠体重变化情况。分别于第15、22、29、43及57天测量小鼠肝弹性值后取血,分别测量小鼠谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN)、前Ⅲ型前胶原(pro-typeⅢcollagen,PC-Ⅲ)及Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)含量,对肝组织进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)、Masson及天狼星红染色,Metavir评分系统评估肝纤维化程度。结果与空白组相比,各阳性对照组小鼠精神萎靡、扎堆喜卧。在小鼠体重方面,4周组、6周组、8周组与空白组相比均明显下降,而2周组与空白组相比体重明显升高。肝弹性超声显示,随着给药时间增加,弹性值呈进行性升高。生化结果显示,与空白组相比,各阳性对照组ALT、AST水平均显著升高,随着给药时间增加,各阳性对照组HA、LN、PC-Ⅲ及Ⅳ-C水平呈升高趋势。病理结果显示:随着给药时间增加,小鼠肝纤维化程度呈进行性加重,4周时符合肝纤维化病理诊断,6周时有假小叶形成趋势,而8周时已形成假小叶,提示早期肝硬化。结论20%CCl4-橄榄油溶液以每周3次、连续4周腹腔注射的方法能成功建立C57BL/6J小鼠肝纤维化模型,稳定性好、成模较快,可以作为肝纤维化模型制造的优化方案。

四氯化碳和猪血清肝纤维化模型组织病理比较

目的:比较四氯化碳和猪血清染毒诱导的大鼠肝纤维化模型肝组织病理表现的异同. 方法:四氯化碳组、猪血清组大鼠分别于每周一、四腹腔注射.400 mL/L CCl4(2 mL/kg)、猪血清0.5 mL/鼠,连续7 wk.实验末取肝组织,常规切片,HE染色后光镜下观察肝组织病理改变;Masson三重染色、James染色后光镜下分别观察胶原纤维、网状纤维的增生情况,并采用病理图像系统进行半定量分析;另取部分肝组织,常规处理后电镜下观察超微结构变化. 结果:猪血清组肝组织纤维间隔纤细,包含明显的胶原沉积,间质细胞成分多,胶原沉积并不弥散,仅限于纤维间隔,偶见细胞损伤.四氯化碳组纤维间隔粗大,弥散分布,纤维间隔内细胞成分多;肝细胞损伤严重且广泛,脂肪变性明显.病理图像分析系统半定量分析显示四氯化碳组胶原纤维和网状纤维面密度、数密度、周密度均显著高于猪血清组(P<0.05或P<0.001). 结论:四氯化碳诱导的肝纤维化程度较猪血清严重.

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究

目的构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl4)复制模型方法进行适当改进。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A组10只、B组14只和C组16只。B组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液2 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液5 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、TP、A/G)水平;HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果实验第8周B、C组均可见明显肝功能损害表现。B组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论低剂量CCl4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。

腹腔注射低浓度四氯化碳建立小鼠肝纤维化模型

在中国患肝炎病后,肝纤维化、硬化、肝癌高发.建立肝纤维化动物模型,有利于进行病理过程的研究.四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）导致肝微粒体脂质过氧化,肝脂肪变性、进而纤维化.常规采用高浓度CCl4建模型,对动物选择性强,同时因给药剂量高,动物死亡率高.本实验采用低浓度CCl4、反复腹腔注射,希望建立一套简便可行的小鼠肝纤维化建模方法.

猕猴肝纤维化模型建立与评价

目的:探讨灵长类动物肝纤维化模型制作方法,建立与人类肝纤维化更接近的动物肝纤维化模型.方法:猕猴10只,随机分为实验组和对照组,实验组每周皮下注射400mL/LCCl40.8mL/kg,连续10wk,同时辅以高脂饲料饲喂.注射CCl4后11wk,检测肝功相关的血清蛋白、血脂浓度及观察肝组织病理学变化.结果:实验组血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLO)、血清总胆固醇酯(TCH)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、血清胆红素(TBIL)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原含量与对照组相比均显著升高(2017.1±244.5nkat/Lvs550.1±72.8nkat/L,1978.6±237.0nkat/Lvs488.9±55.2nkat/L,47.7±5.4g/Lvs41.5±6.1g/L.4.2±0.5mmol/Lvs3.3±0.4mmol/L,1.1±0.2nmml/Lvs0.5±0.1mmol/L,1.9±0.3mmol/Lvs1.4±0.2mmol/L,9.5±1.2μmol/Lvs6.3±0.8μmol/L,419.3±42.1μg/Lvs68.4±8.2μg/L,274.6±32.2μg/Lvs39.4±4.5μg/L,269.7±18.2μg/Lvs103.7±12.3μg/L,P<0.01),而总蛋白(TP)和白蛋白含量降低与对照组相比显著降低(74.3±8.4g/Lvs84.3±7.7g/L,34±4.3g/Lvs41.7±4.8g/L,P<0.01).纤维化动物肝组织显示,肝小叶间纤维增生,部分纤维细胞向肝细胞间延伸.

金黄色葡萄球菌诱导小鼠乳腺纤维化模型TGF-β1的表达

为探究金黄色葡萄球菌(S.aureus)引起乳腺纤维化的致病分子机制,本研究以不同剂量(10~4 cfu/m L、10~6cfu/m L、10~8cfu/m L、10^(10)cfu/m L)的S.aureus感染哺乳期BALB/c小鼠乳腺组织,观察小鼠临床症状和病理组织学变化,筛选建立小鼠乳腺纤维化模型的S.aureus感染剂量。感染小鼠后分别于感染后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d采集小鼠乳腺组织,通过病理组织学观察、免疫组化染色、荧光定量PCR、western blot等方法,研究乳腺纤维化、TGF-β1的表达分布状况,检测TGF-β1的m RNA的转录和蛋白表达水平。结果显示108 cfu/m L S.aureus感染哺乳期小鼠21 d时出现乳腺组织纤维化,确定其为建立小鼠乳腺纤维化模型的感染菌剂量。10~8 cfu/m L S.aureus感染小鼠乳腺组织后,TGF-β1主要由巨噬细胞(感染后1 d、3 d、5 d)、乳腺成纤维细胞(感染后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d)及乳腺上皮细胞(感染后7 d、14 d、21 d)表达;在感染后3 d～7 d时小鼠乳腺组织中TGF-β1的表达先升高后降低,感染后14 d、21 d时其表达再次升高,并显著高于对照组(p<0.01)。本研究表明通过S.aureus感染小鼠乳腺可以建立小鼠乳腺纤维化模型,并能够促进感染后小鼠巨噬细胞、乳腺成纤维细胞、乳腺上皮细胞中TGF-β1的表达,TGF-β1在小鼠乳腺纤维化的发生发展过程中具有重要的促进作用。

超声弹性成像监测下大鼠肝纤维化模型的制备

目的超声弹性成像监测下使用硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化模型,以提高成模率和成模一致性。方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组,每组10只。第1组正常喂养作为正常对照组;第2组为传统建模组,即硫代乙酰胺(TAA)皮下注射200 mg/kg,每周2次,连续注射6周,第3组为监测建模组,即从第2次注射开始,每次注射前使用超声诊断仪进行检查,并根据检查结果决定该次是否进行注射。结果监测建模组大鼠死亡率为10%,肝纤维化形成率为90%;传统建模组大鼠的死亡率为30%,肝纤维化形成率为60%。两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝纤维化诱导过程中根据超声弹性成像结果调整TAA的诱导剂量,可成功诱导大鼠肝纤维化,降低大鼠死亡率。

肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响研究

目的探究肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响。方法 48只雄性清洁级SD大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组及肝纤溶颗粒组,每组各12只。除正常对照组外各组复制肝纤维化模型。于复制模型后的3周各组大鼠同时给药,正常对照组与模型对照组大鼠给予生理盐水1.5 ml/kg灌胃,1次/d;复方鳖甲软肝片组给予33.3%复方鳖甲软肝片溶液1.5 ml/kg重灌胃,1次/d;肝纤溶颗粒组给予33.3%肝纤溶颗粒溶液1.5 ml/kg灌胃,1次/d。各组连续用药6周。实验开始后第3、6和9周对各组大鼠肝脏病理学、细胞凋亡数量、肝纤维化指标水平以及内质网应激相关指标进行检测。结果与其他各组相比,肝纤溶颗粒组纤维增生程度评分下降(P<0.05),肝凋亡数下降(P<0.05);透明质酸、层黏连蛋白、血清Ⅲ型前胶原、血清Ⅳ型胶原水平下降(P<0.05);CHOP、ATF6蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论肝纤溶颗粒组肝纤维化大鼠细胞凋亡数量和肝纤维化水平较复方鳖甲软肝片组下降,差异有统计学意义(P<0.05),肝纤溶颗粒能够改善肝脏病理变化,调节内质网应激相关指标,对临床有指导意义。

肝纤维化模型大鼠肝功能变化与萱草活性成分黄酮苷的干预

背景:萱草活性成分黄酮苷被认为具有调整人体代谢,清除超氧阴离子自由基,清除体内代谢废物,护肝抗衰老,有很强的扶正固本之功效。目的:观察萱草活性成分黄酮苷对肝纤维化模型大鼠的肝功能的影响。方法:建造四氯化碳大鼠肝纤维化模型,建模的同时给予萱草活性成分黄酮苷干预。实验4周后采血,检测血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶、清球蛋白比值、高密度脂蛋白值,观察大鼠的进食、活动和生长状况。结果与结论:实验4周后,四氯化碳模型组大鼠死亡率为37.5%,黄酮苷组为12.5%。2周后,模型组大鼠体质量明显下降(P<0.05),黄酮苷组与阴性对照组比较未见显著性下降(P>0.05)。黄酮苷组大鼠肝/体比值较模型组有所下降。黄酮苷较模型组血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶及清球蛋白比值显著降低,与阴性对照组差异无显著性意义。提示,在肝纤维化的病理进程中,采取萱草活性成分黄酮苷进行干预,可有效缓解大鼠肝损害改善肝功能。

缬沙坦抑制二甲基亚硝胺肝纤维化模型MMP2 mRNA表达的研究

研究血管紧张素Ⅱ - 1型受体拮抗剂缬沙坦对二甲基亚硝胺 (DMN)大鼠肝纤维化模型MMP2mRNA的表达。制备DMN诱导的大鼠肝纤维化模型 ,同时缬沙坦灌胃 2 0mg·kg-1·d-1,共 8周 ,大鼠肝组织明胶酶A(MMP2 )mRNA的水平以逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)方法检测。缬沙坦可明显改善DMN肝纤维化的程度 ,模型组MMP2mRNA的水平高于正常对照组 ,缬沙坦预防性治疗组MMP2mRNA水平低于模型组 (P <0 0 1)。缬沙坦可抑制MMP2mRNA的表达 。

磁共振弥散加权成像ADC值诊断兔肝脏纤维化模型病理变化

目的研究磁共振弥散加权成像(MR-DWI)ADC值在诊断肝脏纤维化模型(Liver fibrosis model,LFM)病理变化中的价值和意义。方法对4只正常和13只LFM兔进行MR-DWI检查,选择b值为200s·mm-2、500s·mm-2、300s·mm-2、600s·mm-2,分别在肝脏左右侧获得4个ADC值。按照ISHAK肝脏病理组织学评分和纤维化分期标准,对全部兔肝脏标本进行组织病理学评分分级(1～6分为一级、7～12分为二级、13～18分为三级)和纤维化分期(Ⅰ期～Ⅵ期),以此为标准统计分析ADC值的变化情况。统计学分析应用SPSS13.0统计软件包,采用单向方差分析方法(Analysis of variance,ANOVA)。P<0.05为差异有统计学意义。结果兔LFM组中4个ADC值均明显低于正常对照组,统计分析表明正常对照组与模型组、不同病理评分分级和纤维化分期间ADC值差异性均有统计学意义,P=0.000。结论肝脏发生纤维化时,肝组织的ADC值明显降低,随着病理评分分级和纤维化分期的增加,ADC值降低越加显著。肝细胞变性、肿胀和炎细胞浸润,以及间质内胶原纤维沉积,使水份含量减少,水的自由运动受到限制,是导致ADC值降低的主要病理学基础。

构建大鼠肝纤维化模型并观察大豆磷脂的保护作用

目的：目前认为肝纤维化尚存在可逆性。实验以光镜和细胞图像胶原半定量手段进一步验证大豆磷脂干预复合病因诱导肝纤维化大鼠模型肝细胞的组织学变化特点。方法：实验于2004-10/2007-05在辽宁医学院科学实验中心完成。①实验材料及分组：健康雄性SD大鼠24只，体质量180～220g。随机分为3组，即对照组、模型组、大豆磷脂组，每组8只。②实验过程：模型组采用复合病因诱导大鼠肝纤维化（给预高脂低蛋白食物和饮乙醇，皮下注射四氯化碳），大豆磷脂组给予造模饮食水，同时给予大豆磷脂300mg/（kg·d）灌胃，正常对照组给予大鼠正常饮食水。42d后麻醉下断颈处死大鼠。③实验评估：验证模型是否成功：采用光镜观察肝组织病理学改变；并用细胞图像分析仪对肝纤维化进行半定量分析；检测各组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、单胺氧化酶活性。实验过程对动物的处置符合动物伦理学标准。结果：①造模结果：6周末验证大鼠肝纤维化模型造模成功。②光镜观察组织学变化：苏木精-伊红染色可见模型组正常肝小叶已经被破坏，坏死区中央或周围有炎性细胞浸润。肝窦多受压变窄或闭塞。门脉区有大量成纤维细胞、纤维细胞和增生的胶原纤维，纤维组织相互环绕形成大量假小叶。MASSON染色可见模型组肝组织形成了较宽的以胶原纤维为主要成分的纤维间隔（绿色），胶原纤维分隔、包绕肝小叶，多数形成假小叶。大豆磷脂组上述变化较轻。③细胞图像胶原半定量测定结果：模型组、大豆磷脂组肝组织胶原纤维面积密度显著高于正常对照组（P〈0．01），而大豆磷脂组的指标显著低于模型组（P〈0．01）。④血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及单胺氧化酶活性：模型组和大豆磷脂组高于正常对照组（P〈0．01），但大豆磷脂组的指标低于模型组（P〈0．01）。结论：大豆磷脂干预肝纤维化大鼠后肝模型血清酶活性比模型组明显下降，胶原积累程度半定量分析也验证了干预后胶原纤维密度低于模型组，说明干预修复了受损的肝细胞。

丹金舒肝胶囊对肝纤维化模型大鼠转化生长因子β_1 mRNA的影响

目的:从分子水平研究丹金舒肝胶囊对肝纤维化模型大鼠转化生长因子β1mRNA的影响。方法:采用CCL4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,Wister大鼠随机分为6组,每组10只,雌雄各半,分别为:空白对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱治疗组、丹金舒肝胶囊低剂量治疗组(2.5g/mL)、丹金舒肝胶囊中剂量治疗组(5.0g/mL)、丹金舒肝胶囊高剂量治疗组(10.0g/mL)。造模结束后,剖取大鼠肝脏,采用RT-PCR产物半定量法检测肝组织中转化生长因子β1mR-NA的表达。结果:丹金舒肝胶囊能明显下调TGFβ1mRNA水平,同时在肝纤维化大鼠一般情况、肝脏指数、HA、LN、III型前胶原肽血清学水平和病理指标等方面均显示出良好疗效。结论:丹金舒肝胶囊通过下调TGFβ1mRNA的水平,进而抑制静止的HSC转变为活化的MFB,减少ECM的合成,最终阻断肝纤维化的进程。

内质网应激caspase-12通路在大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型中的作用研究

内质网应激（ERS）是继死亡受体活化和线粒体损伤之后第3条介导细胞凋亡的信号转导通路。既往研究[1,2]表明多种肝脏疾病的发生与内质网特有的caspase-12介导的细胞凋亡有关。但caspase-12介导的细胞凋亡是否存在于胆汁淤积性肝纤维化进展中,其作用如何尚未有文献报道。

当归注射液及前列腺素E_2对结缔组织生长因子在大鼠肺纤维化模型中表达作用的比较研究

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠肺间质纤维化中的表达及其在25%当归注射液、前列腺素E2(dmPGE2)的肺脏保护作用中的意义。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、当归组、PGE2组。按博莱霉素(BLM)5mg/kg体重复制大鼠肺纤维化模型,当归组、dmPGE2组术后分别给于25%当归注射液(腹腔内注射)、dmPGE2(肌肉注射),于第28天处死全部大鼠。制备大鼠肺组织切片,用原位杂交及免疫组化SABC法分别检测CTGF mRNA、纤维连结蛋白(FN)和Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)在肺内的表达,HE染色评价肺纤维化程度。结果模型组CTGF mRNA、FN和Col-Ⅲ的表达及肺纤维化程度明显高于对照组(P<0.01),而当归组及PGE2组明显低于模型组(P<0.01)。两治疗组间比较,除CTGF外,其余指标无显著性差异(P>0.05),各组指标的相关分析表明,CTGF表达水平与肺纤维化程度(r=0.886;P<0.01)、FN(r=0.836;P<0.01)和Col-Ⅲ(r=0.918;P<0.01)呈正相关关系。结论25%当归注射液可能通过下调CTGF而减轻肺间质纤维化。

猪血清联合ConA建立Balb／c小鼠肝纤维化模型及评价

肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是诸多致病因素导致肝硬化的前期病理过程。我国每年由乙型肝炎病毒等病毒感染引起的肝硬化患者众多。免疫法造模致肝纤维化与临床上慢性肝炎所致的肝硬化在发病机制上较为接近，有利于对肝纤维化的发病机制进行深入研究，为筛选抗肝纤维化药物提供客观依据。随着分子生物学的不断发展，基因库中积累的小鼠基因数据极为丰富，为实验动物过程中肝纤维化的评估和分子治疗研究提供了便利。本研究采用猪血清联合刀豆蛋白A（con—canavalin A，Con-A）建立Balb／c小鼠肝纤维化模型，通过多种方法对其进行评价，寻找免疫学肝纤维化实验动物模型中新的标记分子。

重组人干扰素β-1a注射液对大鼠肝纤维化模型的治疗作用

目的研究重组人干扰素β-1a注射液及白蛋白注射液对肝纤维化大鼠的治疗作用。方法通过给大鼠灌服50%的四氯化碳花生油溶液1 mL/kg,每周2-3次,5周后开始使用受试药物（隔日注射1次）,同时继续同上灌服50%的四氯化碳花生油溶液。9周后取血、取肝脏,测定血清ALT、AST、TP、ALB、TBIL,测定肝组织羟脯氨酸含量,并对肝脏做病理组织学检查。结果干扰素β-1a、白蛋白注射液均能明显降低肝纤维化模型大鼠血清的ALT、AST、TBIL,能明显升高肝纤维化大鼠血清ALB、ALB/GLB,且能明显降低肝纤维化大鼠肝组织羟脯氨酸含量。结论干扰素β-1a、白蛋白注射液对肝纤维化模型大鼠的肝纤维化程度均有明显的抑制作用。