绿豆球蛋白淀粉样纤维的形成、结构表征及乳化特性

基于不同酸热处理时间探讨绿豆球蛋白淀粉样纤维(mung bean globulin amyloid fibrils,MBGFs)形成过程中的结构演变规律,同时探究各阶段形成的MBGFs乳化特性。结果表明:加热0~12 h过程中,绿豆球蛋白(mung bean globulin,MBG)的亚基逐渐降解,水解成以小分子多肽为主的纤维结构单元;并产生大量β-折叠结构,相对含量从0 h的(18.28±0.75)%提升到12 h的(53.61±1.15)%,与硫磺素T结合后荧光强度增强;MBGFs形态逐渐变得细长、柔韧,在此过程中发生了定向的纤维化聚集;在加热16~24 h过程中,成熟的MBGFs结构逐渐发生解离,纤维结构特征被破坏;与MBG相比,MBGFs乳液的乳化活性指数、乳化稳定性指数、蛋白吸附率和界面蛋白含量均有明显提高,其中酸热处理4 h形成的MBGFs乳化效果最优;4 h MBGFs乳液油滴体积较小、分布均匀有序,表观黏度最高,具有弹性凝胶结构。综上,不同酸热处理时间对MBGFs结构和乳化特性具有显著影响,MBGFs与MBG相比具有更优异的乳化性能。本研究为明晰MBGFs形成规律提供理论支撑,为高效食品级乳化剂的研发提供思路。

淀粉样蛋白纤维作为食品配料的研究进展与思考

大多数食品蛋白质在适当的加工条件下可自组装形成淀粉样蛋白纤维。这种纳米纤维结构在改善食品品质方面极具前景,包括那些不能由蛋白质单体或其他蛋白聚集体实现的结构与功能。为了更好地了解它们作为食品配料的结构基础,本文总结了淀粉样蛋白纤维的多级结构特征,物理、化学和生物学性质,以及在食品中的潜在应用。在此基础上,给出了食品蛋白淀粉样纤维‘结构-性质-应用’之间的内在联系。最后,讨论了它们作为食品配料的安全性,并对其后续研究进行了展望。

原位还原的金纳米簇抑制β乳球蛋白淀粉样纤维形成

在碱性条件下,以β乳球蛋白(β-LG)为还原剂,直接原位还原氯金酸制备了荧光金纳米簇.通过调控氯金酸的用量,获得了红色和黄色两种荧光金纳米簇,并对其光学性质和形貌进行了表征.进一步,利用荧光光谱、圆二色光谱、动态光散射和透射电子显微镜等分析手段系统考察了这两种金纳米簇对β-LG聚集的抑制作用.研究发现:在这两种体系中,被吸附在金纳米簇表面的β-LG蛋白量不同,导致其对β-LG聚集的抑制作用也不同,即红色荧光金纳米簇可抑制β乳球蛋白聚集生长期,而黄色荧光金纳米簇则可抑制其成核期.

β-酪蛋白淀粉样纤维沉淀的形成及影响因素

利用硫磺素T（ ThT）荧光分析法和透射电子显微镜检测β-酪蛋白形成淀粉样纤维沉淀（ Fibril）的动力学过程,研究了磷脂和硫酸肝素对其 Fibril 形成的影响.实验结果表明,β-酪蛋白在65℃下, pH 值为5.4~9.0的范围内,加热252 h以上,并未形成Fibril,说明β-酪蛋白是一种很好的分子伴侣,在高温、弱酸和弱碱条件下均不形成淀粉样纤维沉淀.甘油磷酸胆碱D6PC和D9PC可以显著地促进β-酪蛋白的Fibril的形成,说明一定条件下蛋白质可能与细胞膜之间存在相互作用而导致其二级构象的转变.硫酸肝素对β-酪蛋白形成Fibril具有促进作用,在炎症组织中,硫酸肝素表达量的增加有可能促进β-酪蛋白形成Fibril,说明乳腺炎与乳腺中的Corpora Amylacea的形成存在一定的联系.

α7神经型尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞Tau和配对螺旋样纤维蛋白1水平的影响

目的探讨α7神经型尼古丁受体(n AChR)基因沉默对SH-SY5Y细胞Tau和配对螺旋样纤维蛋白(PHF)1水平的影响及α7n AChR在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用。方法 SH-SY5Y细胞转染α7 n AChR shRNA重组质粒,用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别测定细胞中α7 n AChR在mRNA和蛋白表达水平的变化;用Western印迹法检测细胞Tau和PHF1蛋白水平。结果α7 n AChR基因沉默组与空质粒组相比,α7 n AChR mRNA和蛋白质表达水平分别降低了94%(P<0.01)和82%(P<0.01);Tau蛋白水平升高了65%(P<0.01);PHF1蛋白水平升高了58%(P<0.05)。结论α7 n AChR基因表达抑制后Tau和PHF1蛋白水平明显升高,Tau蛋白和PHF1蛋白表达增加直接促进神经元纤维缠结的形成,这可能与AD的病理进程有一定关系。

固体核磁共振研究淀粉样蛋白纤维的进展

淀粉样蛋白纤维是一类纤维状的蛋白质聚集体,与多种蛋白质沉积疾病相关.对淀粉样蛋白纤维结构的研究,有助于人们从分子水平上阐述其形成机理,提供相关疾病预防或治疗的依据.由于淀粉样蛋白纤维不可溶、非结晶,因此液体核磁共振和X-射线衍射等方法对这类体系的应用受限,而固体核磁共振被认为是研究这类体系最具前景的技术.该综述介绍了固体核磁共振解析蛋白质结构的方法及其应用于淀粉样蛋白纤维体系的研究进展.

结直肠癌肝转移患者TACE治疗后含表皮生长因子的纤维蛋白样细胞外基质2水平及意义

目的分析结直肠癌肝转移患者外周血单个核细胞中含表皮生长因子的纤维蛋白样细胞外基质2(EGF containing fibulin-like extracellular matrix protein 2,EFEMP2)水平与TACE治疗疗效的关系。方法选择2015年3月至2017年7月在海安市中医院接受治疗的152例结直肠癌肝转移患者作为研究对象。用Ficoll密度梯度分离法分离外周血中单个核细胞;用蛋白质印迹法检测单个核细胞中EFEMP2表达水平。分析EFEMP2表达水平与TACE治疗疗效的关系。结果生存组和死亡组EFEMP2水平均随时间进展呈升高趋势。生存组不同时间节点时EFEMP2水平均高于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高EFEMP2组中位生存时间高于低EFEMP2组,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析结果显示靶向治疗和T3-EFEMP2均是结直肠癌肝转移患者3年生存预后的独立保护因素(P<0.05)。限制性立方样条拟合Cox回归分析结果显示T3-EFEMP2与结直肠癌肝转移患者3年生存预后呈非线性关系(P<0.05)。结论直肠癌肝转移患者外周血单个核细胞中EFEMP2水平与TACE治疗疗效有关,其水平低提示TACE治疗临床获益较小。

成纤维细胞生长因子受体样蛋白1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖和迁移能力的影响

目的检测成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(FGFRL1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况,并探究其在OSCC细胞增殖和迁移中的作用。方法利用Western blot检测FGFRL1蛋白在OSCC组织、癌旁正常组织、OSCC细胞株及正常上皮细胞中的表达;通过FGFRL1小干扰RNA(siRNA)干扰HN4细胞,影响FGFRL1蛋白的表达,利用CCK-8及Ki67实验检测FGFRL1对肿瘤细胞增殖能力的影响;细胞划痕及Transwell实验检测FGFRL1对肿瘤细胞迁移能力的影响;利用Western blot检测其对上皮间充质转化(EMT)相关指标蛋白的影响。结果FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织(t=2.820,P=0.0478);FGFRL1蛋白在OSCC细胞系中的表达量高于在HOK细胞中的表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)结果显示,FGFRL1 RNA在HOK细胞中的表达量低于在OSCC细胞系中的表达量。将FGFRL1 siRNA转染的HN4细胞作为实验组,NC siRNA处理的HN4细胞作为对照组。Ki67免疫荧光试验结果显示,实验组与对照组在48 h(P=0.4781)及72 h(P=0.3342)细胞增殖活力差异无统计学意义。细胞划痕实验结果显示,在12 h(P=0.0228)、24 h(P=0.0051)及36 h(P=0.0095)实验组细胞划痕面积百分比均比对照组小。Transwell实验结果显示,实验组在16 h(P=0.0087)及24 h(P=0.0086)细胞迁移数较对照组少。FGFRL1 siRNA干扰使得HN4细胞神经性钙黏附素蛋白和波形蛋白的表达量下降,上皮钙黏附素蛋白的表达量上升。结论FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织,在OSCC细胞株中的表达量高于正常上皮细胞。FGFRL1基因沉默对肿瘤细胞增殖无影响,但对肿瘤细胞EMT和细胞迁移具有一定的抑制作用。

食源蛋白淀粉样纤维及其在食品中的应用研究进展

食源蛋白经过特殊加工处理可以形成具有淀粉样蛋白形态的功能结构,即食源蛋白淀粉样纤维.食源蛋白淀粉样纤维因其特殊结构所具有的高长宽比、高杨氏模量、高疏水性、优异的界面特性、抗氧化和抗菌活性等性质,在食品工业未来应用中具有巨大的发展潜力.因此,针对近年来食源蛋白淀粉样纤维的研究新进展,总结了食源蛋白淀粉样纤维的形成机理、结构特征及其功能特性,对其在食品中的应用进行了详细综述,并展望了食源蛋白淀粉样纤维的未来发展.

绒毛周围大量纤维蛋白样物质沉积的研究进展

绒毛周围大量纤维蛋白样物质沉积(MPFD)是一种罕见的胎盘疾病,易导致孕妇流产、早产,且在此后妊娠中有较高的复发率,其特征性病理改变为大量纤维蛋白样物质沉积于胎盘。按绒毛及绒毛间隙累及程度分成3型:经典型、边缘型、透壁型。大量沉积使母体向绒毛间隙血流灌注减少,阻碍母胎交换,导致胎儿生长受限、神经系统发育障碍等,严重可危及胎儿存活。MPFD病因至今尚未完全阐明,可能与免疫介导的母-胎排斥有关。MPFD不独立发病,常合并多系统疾病,目前诊断主要通过血清学指标(MBP、MSAFP、s ENG、SVEGFR-1、EPO等)与超声检查相结合的方式。使用免疫球蛋白、肝素和阿司匹林联合治疗可改善MPFD胎儿结局。

胃癌组织中成纤维细胞生长因子受体样蛋白1的表达及其与术后复发转移的关系

目的探究胃癌组织中成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(fibroblast growth factor receptor-like protein 1,FG-FRL-1)的表达及与胃癌根治术后复发转移的相关性。方法选取2016年3月至2018年6月江苏省无锡市惠山区人民医院收治的92例拟行根治术治疗的胃癌患者。对比胃癌组织和癌旁组织(距癌组织≥5cm)FGFRL-1 mRNA表达水平。随访3年(3例失访),统计胃癌根治术后复发转移情况,并依据是否发生复发转移分为复发转移组(36例)和未复发转移组(53例)。对比复发转移组和未复发转移组患者的临床资料。多因素Logistic回归分析影响胃癌患者术后复发转移发生的危险因素。绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线),以曲线下面积(area under the curve,AUC)评价胃癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平对术后复发转移的预测价值。结果胃癌组织FGFRL-1 mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌根治术后3年复发转移发生率为40.45%。复发转移组临床分期Ⅲ期占比、低分化占比、肿瘤直径及癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平均高于未复发转移组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,临床分期、癌组织中FGFRL-1 mRNA均为胃癌患者术后复发转移发生的危险因素(OR=2.807、3.330,P<0.05)。ROC曲线分析显示,胃癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平预测术后复发转移发生的最佳截断点为1.21,灵敏度、特异度及AUC分别为72.22%、75.47%、0.714。结论胃癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平高于癌旁组织,且其与胃癌根治术后复发转移存在一定的相关性,可作为临床评估胃癌根治术后复发转移的重要参考指标。

β-淀粉样蛋白1-42寡聚体诱导的阿尔茨海默病大鼠海马的Bcl-2表达和caspase-3活性变化

目的：研究β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）寡聚体诱导痴呆大鼠脑海马区的Bcl-2表达和caspase-3活性变化及其意义.方法：采用Morris水迷宫法筛选出逃避潜伏期少于60 s的60只SD雄性大鼠随机分为4组,即正常对照组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组.通过脑立体定位仪将Aβ1-42纤维体、Aβ1-42寡聚体注入大鼠右侧脑室,制备AD大鼠模型.RT-PCR法检测大鼠海马Bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA的表达,用免疫印迹测定大鼠海马区Bcl-2蛋白表达和caspase-3活性.结果：与正常对照组及PBS对照组比较,模型组大鼠海马区Bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达较低,Aβ1-42纤维组Bcl-2的蛋白表达高于Aβ1-42寡聚体组;Aβ1-42寡聚体组的caspase-3 mRNA表达以及caspase-3蛋白活性高于Aβ1-42纤维组.结论：Aβ1-42寡聚体可下调Bcl-2表达,活化caspase-3.

血清FGL1、LncSChLAP1对晚期非小细胞肺癌免疫治疗效果及预后评估的价值

目的分析血清纤维蛋白样因子1(FGL1)、长链非编码RNA SChLAP1(LncSChLAP1)评估接受免疫治疗的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者疗效及预后的价值。方法选取2019年4月—2022年12月南京市胸科医院呼吸内科诊治晚期NSCLC患者98例为NSCLC组,均接受免疫检查点抑制剂治疗,根据疗效分为有效亚组74例和无效亚组24例,以同期医院健康体检者50例为健康对照组。酶联免疫吸附实验检测NSCLC患者血清FGL1水平,实时荧光定量PCR检测血清LncSChLAP1水平;多因素Logistic回归分析影响晚期NSCLC患者化疗疗效的因素;受试者工作特征曲线分析血清FGL1、LncSChLAP1对晚期NSCLC患者免疫治疗疗效的预测价值;Kaplan-Meier曲线分析血清FGL1、LncSChLAP1对晚期NSCLC患者生存预后的影响。结果血清FGL1、LncSChLAP1水平比较,NSCLC组高于健康对照组(t/P=57.365/<0.001、28.443/<0.001)。无效亚组TNM分期Ⅳ期比例、血清FGL1、LncSChLAP1水平高于有效亚组(χ^(2)/P=15.375/<0.001,t/P=35.077/<0.001、35.127/<0.001)。血清FGL1、LncSChLAP1高是影响晚期NSCLC患者免疫治疗疗效的独立危险因素[OR(95%CI)=1.327(1.104~1.596)、1.415(1.094~1.829)];血清FGL1、LncSChLAP1及两项联合的AUC分别为0.856、0.792、0.905,两者联合优于各自单独预测效能(Z/P=4.258/0.007、5.119/<0.001)。FGL1高、低表达组1年总体生存率分别为22.92%(11/48)、60.00%(30/50),LncSChLAP1高、低表达组1年总体生存率分别为27.66%(13/47)、54.90%(28/51),FGL1高表达组、LncSChLAP1高表达组晚期NSCLC患者1年累积生存率分别低于FGL1低表达组、LncSChLAP1低表达组(χ^(2)/P=14.180/<0.001、17.553/<0.001)。结论晚期NSCLC患者血清FGL1、LncSChLAP1升高,是新的评估晚期NSCLC患者免疫治疗疗效及生存预后的血清标志物。

3种改性小分子对不同Aβ42纤维结构稳定性的影响机制研究

淀粉样蛋白(Aβ)的错误聚集是阿尔茨海默症(AD)的关键病理诱发因素,主要通过Aβ的自聚集和金属离子诱导聚集两种方式实现.实验结果表明,食用樱桃红(ER)、丹参酮(TS)、氯碘喹啉(CQ)在不同程度上都能起到抑制淀粉样蛋白聚集的作用,但其作用机制大不相同.将ER,TS和CQ分子结构进行两两重组,获得3种新的活性分子,使其兼具金属螯合、旋转键及N-末端区域(NR)结合的复合优势.结果发现,改性分子对不同Aβ42聚集体的作用各异.有的改性小分子对纤维起到解聚集的效果,而有的则增加纤维的稳定性;有的小分子对一种纤维结构起到解聚集的效果,而对另一种则起到稳定的作用.并发现尽管小分子的负电基团与同带负电的Aβ纤维有很强的排斥作用,但其对某些构型依然有解聚集的效果.

FADD形成淀粉样蛋白纤维及其在果蝇免疫信号传递中的作用

探究果蝇FADD(Fas-associateddeathdomain-containingprotein)淀粉样蛋白纤维的形成及对IMD(Immune deficiency)信号通路中信号传递的影响,有助于更清楚地了解昆虫先天免疫信号通路中的调节机制,为其他物种的免疫调控提供参考。通过原核表达纯化dFADD蛋白、硫黄素T结合和透射电子显微镜观察等鉴定dFADD在体外纤维的形成;通过构建dFADD真核表达载体,SDD-AGE检测、共聚焦显微镜观察等探究dFADD在果蝇S2细胞内纤维聚合物的形成;构建dFADD结构域突变体,检测纤维形成的关键结构域及对IMD信号传递的影响。结果表明,dFADD在体外和细胞水平上都能聚合形成淀粉样蛋白纤维聚合物;纤维的形成是由dFADD的DED(Death-effector domain)结构域决定的,当DED结构域缺失时,dFADD以单体形式存在;双荧光素酶报告系统的检测结果显示,dFADD只有形成纤维时,才能诱导下游抗菌肽的表达,表明纤维形成是IMD信号传递的关键。本研究揭示了dFADD通过形成淀粉样蛋白纤维参与IMD信号通路中介导IMD与Dredd级联传导的作用,进一步加深了对淀粉样蛋白纤维不仅在哺乳动物,也在昆虫的免疫信号通路中传递信号这一保守功能的认识。

MFAP3L在胃癌中的表达及与PI3K/AKT信号转导通路的关系

目的了解微纤维关联样蛋白-3(MFAP3L)基因在胃癌组织中的表达情况并分析其与PI3K/AKT信号转导通路相关基因间的关系。方法采用半定量RT-PCR和组织微阵列免疫组化的方法分别检测MFAP3L、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、蛋白激酶B-β(AKT2)及β-半乳糖凝集素-3(Glaectin-3)基因在胃癌组织中mRNA及蛋白表达情况,并通过生物信息学方法预测分析MFAP3L蛋白结构特点。结果 (1)在同一组胃癌组织中,MFAP3L、Glaectin-3及PIK3CA蛋白均表达上调(17/24,70.8%,P=0.022;16/25,64.0%,P=0.017及14/25,56.0%,P=0.045);PIK3CA与AKT2基因mRNA均表达上调(19/29,65.5%,P=0.001与14/25,56%,P=0.001)。并且MFAP3L与Glaectin-3及PIK3CA间存在共表达。(2)MFAP3L蛋白含有多个磷酸化位点,且在胞内区聚集成簇,并具有1个与PI3K的SH3调节区高度同源的蛋白模序。结论 MFAP3L基因在胃癌组织中的表达变化可能与胃癌的发生有密切关系,并可能通过参与PI3K/AKT通路来参与肿瘤侵袭和转移。

过表达FGFRL1抑制HCT116人结肠癌细胞的增殖和迁移并促进其凋亡

目的探讨成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(FGFRL1)过表达对HCT116结肠癌细胞生物学行为的影响。方法构建可在哺乳动物细胞内表达FGFRL1的重组质粒pcDNA3.1-FGFRL1,转染结肠癌HCT116细胞后,通过持续的G418筛选获取稳定表达细胞系,实时定量PCR和Western blot法检测HCT116细胞FGFRL1的表达。随后将细胞分成空白组(未经处理的HCT116细胞)、阴性对照组(稳定转染空载体的HCT116细胞)及实验组(稳定转染pcDNA3.1-FGFRL1的HCT116细胞)。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell^(TM)小室实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果FGFRL1过表达组FGFRL1 mRNA和蛋白水平显著升高。过表达FGFRL1后,HCT116细胞增殖明显降低、细胞迁移能力明显下降、细胞凋亡明显增加。结论过表达FGFRL1抑制HCT116结肠癌细胞的增殖和迁移,并促进其凋亡。