纤维粘连蛋白靶向JAK/STAT3信号通路调控粘连性肠梗阻的机制

目的:探究纤维粘连蛋白(FN)靶向JAK/STAT3信号通路调控粘连性肠梗阻的作用机制。方法:选取2019年1月—2020年12月就诊行肠切除手术的粘连性肠梗阻患者65例(观察组),同期行腹股沟疝手术患者65例(对照组),取患者肠组织及术前血液样本,采用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学实验检测肠组织样本中FN、STAT3、p-STAT3基因及蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清样本中FN表达。体外培养人肠上皮细胞系HIEC-6,采用慢病毒转染抑制细胞FN表达,采用CCK8、Transwell迁移实验观察FN对细胞增殖及分化的影响,同时采用qRT-PCR、Western Blot实验检测FN对细胞STAT3、p-STAT3表达的影响。结果:与对照组比较,观察组肠组织中FN mRNA及蛋白表达明显较高(P<0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白表达则明显较低(P<0.05),且观察组血清中分泌型FN含量也明显较高(P<0.05)。体外实验显示,与NC siRNA组HIEC-6细胞比较,LV-FN siRNA组HIEC-6细胞在48、72、96、120 h的增殖率均明显较低(P<0.05),细胞迁移能力也明显较低(P<0.05),其FN mRNA及蛋白表达明显较低(P<0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白则明显较高(P<0.05)。结论:纤维粘连蛋白在粘连性肠梗阻患者肠组织及血清中呈明显高表达,可通过JAK/STAT3信号通路的异常激活影响细胞的增殖和迁移,引起病变肠段发病。

姜黄素对人视网膜色素上皮细胞中基质金属蛋白酶、纤维粘连蛋白1表达的影响观察

目的观察姜黄素对人视网膜色素上皮(RPE)细胞中基质金属蛋白酶(MMP)、纤维粘连蛋白1(FN1)表达的影响。方法将人RPE细胞分成2组,姜黄素组加入0.5×10^(-5)mol/L的姜黄素,对照组不加姜黄素,两组细胞继续孵育48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1 mRNA,采用Western blotting法检测细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1蛋白。结果姜黄素组细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1 mRNA相对表达量分别为0.41±0.14、5.02±0.22、1.09±0.21、0.47±0.28、2.50±0.21,对照组分别为5.10±0.38、6.43±0.15、0.27±0.19、1.82±0.12、6.83±0.18,两组相比,P均<0.05。姜黄素组细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1蛋白相对表达量分别为6155.33±124.01、6208.00±157.33、8126.33±235.78、3541.67±130.16、3684.33±90.22,对照组分别为16207.33±210.19、8053.33±61.98、2543.67±122.20、9477.33±108.68、8218.00±239.86,两组相比,P均<0.05。结论姜黄素可上调人RPE细胞中MMP1、MMP2、MMP9、FN1的表达,下调MMP3的表达。

整合素β_3和纤维粘连蛋白在人正常及妊娠输卵管的表达与变化

目的:探讨整合素β3和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在人正常及妊娠输卵管黏膜内的表达与变化。方法:应用免疫组化和图像分析技术检测整合素β3及FN在人正常和妊娠输卵管黏膜内的表达。结果:整合素β3在人正常输卵管黏膜上皮纤毛细胞的胞浆内表达。峡部,排卵后显著高于排卵前(P<0.001);壶腹部,排卵后显著下降(P<0.001);伞部,排卵后的4 d内升高,显著高于其它各时期(P<0.001)。输卵管近妊娠部位黏膜上皮纤毛细胞和分泌细胞胞浆内均表达整合素β3,与分泌期正常输卵管黏膜上皮细胞内的表达比差异无统计学意义。正常输卵管黏膜上皮基底膜和基质表达FN,增生期高于分泌期(P<0.001);FN在近妊娠部位输卵管黏膜内的表达量高于分泌期正常输卵管(P<0.001)。结论:输卵管各节段黏膜整合素β3和FN的表达水平依月经周期不同时期而有明显变化。整合素β3可能不参与输卵管妊娠的发生,FN有可能是输卵管内滞留胚胎植入的分子基础之一。

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在着床期小鼠子宫内膜中的表达

目的 :为探讨层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在胚泡着床过程中的生物学作用。方法 :本实验使用昆明雌性小鼠 3 0只 ,分为未孕和早期妊娠共 6组。通过免疫组织化学方法 ,检测了层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在着床期小鼠子宫内膜中的分布状况。结果 :胚泡着床开始时 (即受精后 4～ 5天 ) ,层粘连蛋白和纤维粘连蛋白均出现一个表达高峰 ,尔后纤维粘连蛋白迅速减少。受精后 6～ 8天 ,细胞外基质中的层粘连蛋白逐渐增加。结论 :层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在营造胚泡着床微环境和植入调节中发挥重要作用。

纤维粘连蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭和转移的影响

为了研究纤维粘连蛋白（FN）与人涎腺腺样囊性癌（Acc）转移的关系，本研究应用免疫组织化学染色，Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验，对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC—2和从其克隆出的高转移细胞株ACC—M细胞进行比较研究。结果发现FN在ACC—M表达明显高于ACC—2。在加入外源性FN后，ACC—2体外移动性、粘附率均明显提高，已接近ACC—M，而ACC—M无明显变化。结果表明FN在Acc侵袭和转移中起重要的调节作用。

纤维粘连蛋白对牙周膜细胞附着和增殖的影响

应用细胞培养技术，在离体的正常和牙周病变根片上培养牙周膜细胞（ＰＤＬＣ），经２４ｈ和７２ｈ分别观察其各自的生长状态，并观察纤维粘连蛋白（ＦＮ）对细胞附着和生长的影响，通过细胞计数定量比较其附着和增殖程度的差异。结果显示，在离体的牙周病患牙根面上ＰＤＬＣ附着和增殖数量明显低于正常牙根面，细胞生长状态也较差；经ＦＮ作用后，其附着数量明显增加。进一步证实ＦＮ对ＰＤＬＣ确实是一种有效的促生长因子；此外，还提示ＦＮ的促附着和促增殖作用有所差异。

多种维生素及微量元素对高温致神经管畸形的保护作用及其对纤维粘连蛋白和层粘连蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨高温致神经管畸形(NTD)的因素及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。方法:实验孕鼠随机分为A组(孕前第8天开始灌服多种维生素及微量元素)、B组(孕后第1天开始灌服)和C组(不灌服)孕鼠高温处理。对各组胎鼠进行形态学观察,记录NTD发生率;用原位杂交技术检测纤维粘连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)在神经上皮细胞及其周围间充质中的转录状况。结果:(1)各组鼠胚均出现不同类型的NTD,C组NTD发生率最高,为77.5%。(2)各组鼠胚神经上皮细胞及其周围间充质中见FN和LN mRNA阳性转录信号,C组明显弱于其他组。结论:FN和LN转录降低是NTD发生的重要因素之一,多种维生素及微量元素对高温致NTD有一定的保护作用。

促排卵周期PCOS妇女子宫内膜纤维粘连蛋白及层粘连蛋白的表达

目的:了解促排卵药物氯米酚(CC)、hMG及GnRH-a对黄体中期子宫内膜内膜纤维粘连 蛋白(FN)及层粘连蛋白(LN)表达的影响。方法:应用单克隆抗体,采用免疫组织化学技术检测50 例正常妇女自然周期以及50例正常妇女,45例多囊卵巢综合征妇女应用CC／hCG,CC／hMG／hCG 及GnRH-a／hMG／hCG方案促排卵治疗后黄体中期子宫内膜FN和LN的表达。结果:子宫内膜FN 和LN表达在正常妇女自然周期着床窗口时呈现强阳性;而CC、hMG抑制FN和LN的表达,使 其阳性强度减弱,有显著性统计学差异P<0．01;GnRH-a对FN和LN抑制不明显。同时妊娠者较 未妊娠者FN和LN表达强度高。结论:CC／hCG及CC／hMG／hCG方案促排卵后黄体中期子宫内膜 中FN和LN表达下降或缺失,内膜容受性下降,妊娠率降低。

层粘连蛋白及纤维粘连蛋白与药流后子宫出血关系的研究

为探讨层粘连蛋白 (LM)及纤维粘连蛋白 (FN)在米非司酮药物流产 (以下简称药流 )后子宫持续出血时的表达 ,对 2 0例米非司酮 +米索前列醇药物流产后子宫出血 (出血组 )的刮出组织及 1 0例人工流产负压吸宫术吸出的组织 (对照组 ) ,用HE及免疫组织化学方法染色并观察标本。结果 :出血组的刮出组织中 4 5%可见滋养细胞或绒毛 ,90 %发现蜕膜组织。 2组蜕膜组织的血管及腺上皮基膜、蜕膜细胞周围和一部分蜕膜细胞胞质内都含有较丰富的LM与FN ,并且 2组间比较 ,FN与LM含量表达无明显差异 (P >0 .0 5)。说明残留蜕膜中含有能分泌大量LM与FN的蜕膜细胞和血管 ,致使蜕膜组织与子宫壁牢固地结合而不易脱落 ,影响内膜发育而引起出血。

加味消渴康对糖尿病肾病大鼠纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原表达的影响

目的观察加味消渴康对糖尿病肾病大鼠肾组织纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和Ⅳ型胶原表达的影响。方法采用单侧肾切除加链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropahy,DN)模型,将造模成功后的24只DN大鼠随机分为正常组、模型组、氯沙坦组和中药组。中药组予加味消渴康灌胃,氯沙坦组予氯沙坦灌胃,正常组及模型组每日灌服等量蒸馏水,共灌胃12周。各组大鼠于第12周末处死取出肾脏,运用免疫组织化学法观察肾组织FN、LN和Ⅳ型胶原的表达。结果加味消渴康能降低肾组织FN、LN及Ⅳ型胶原的表达。结论加味消渴康对DN大鼠有一定的治疗作用。

纤维粘连蛋白EDA^+片段在退变椎间盘中的表达及其意义

[目的]检测退变椎间盘内EDA+Fn的表达,探讨损伤在椎间盘退变中的作用。[方法]收集人腰椎间盘退变临床手术标本,经病理证实均发生退变,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增目标条带。[结果]正常椎间盘内没有EDA+Fn的表达,而退变椎间盘内均有EDA+Fn的表达;中重度退变者EDA+Fn的表达较轻度退变者为多(轻中度组间P=0.016<0.05;轻重度组间P=0.007<0.05),中重度之间则没有明显差别(P≥0.501)。[结论]EDA+Fn在退变椎间盘内有较高表达,直接证明损伤是椎间盘退变的重要的致病因素之一。

米非司酮对人绒毛和蜕膜内纤维粘连蛋白表达的影响

目的观察米非司酮终止早孕后,绒毛和蜕膜内纤维粘连蛋白(FN)的表达情况。方法宫内早孕要求终止妊娠且孕龄<49 d的妇女,分为药物完全流产组(n=15)、药物不全流产组(n=15)和对照组(手术流产组,n=15)。两药物流产组取服药(米非司酮配伍米索前列醇)第3天排出的绒毛和蜕膜组织,对照组取负压吸引出的绒毛和蜕膜组织。采用免疫组化法测定绒毛和蜕膜组织中FN的表达。结果对照组绒毛和蜕膜FN的阳性表达率明显高于两药物流产组(P<0.017);其中,不完全流产组绒毛和蜕膜组织中FN的阳性表达率高于完全流产组(P<0.017)。结论米非司酮可通过降低早孕妇女绒毛和蜕膜中FN的表达,改变胚胎宫内发育的内环境,在细胞外基质水平发挥抗早孕的作用。

纤维粘连蛋白与碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附的协同刺激作用

目的研究纤维粘连蛋白(fibronection,FN)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单独或联合应用时对成骨细胞在生物衍生骨支架上黏附的影响,并探索其潜在机制。方法取第3代成骨细胞,以bFGF(0.1、1、10和100ng/ml)刺激,接种于FN(0.1、1、10和100μg/ml)或多聚赖氨酸(Polylysine)修饰的生物衍生骨支架上,MTT法检测组间细胞黏附效率差异,电镜观察细胞密度与形态。GRGDS肽封闭后再次重复上述步骤。结果单独应用FN与bFGF均可增加成骨细胞在生物衍生骨支架上的黏附效率(P<0.05),联合应用时,产生的效应显著增强,两者存在交互作用(P<0.01)。而Polylysine与bFGF无此交互作用(P>0.05)。电镜观察发现,两者联合应用时细胞密度、铺展效果均优于单独应用。应用GRGDS肽后,FN联合bFGF产生的黏附促进作用被显著阻断。结论bFGF与FN对成骨细胞在生物衍生骨三维支架上的黏附存在协同刺激作用,细胞黏附产生这一效应的机制很可能是由RGD-整合素α5β1途径来介导的,需深入研究探讨。

牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖、DNA合成、细胞形态的影响

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＭ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０μｇ／ｍｌ）对体外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０μｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０μｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）和空白组对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）均使牙髓细胞处于伸展状态，支持细胞的粘附。说明ＦＮ可促进牙髓细胞增殖，并可通过整合素受体调节细胞与基质之间的联系。

牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响

目的研究外源性牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响。方法采用体外培养技术,原代培养大鼠成骨细胞,用AlamarBlueTM摄入法,检测不同浓度的牛血浆纤维粘连蛋白对大鼠成骨细胞增殖的影响。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起;核卵圆形,常居一侧;胞质内碱性磷酸酶染色呈阳性反应,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。牛血浆纤维粘连蛋白能够促进大鼠成骨细胞的增殖,当浓度为40μg/ml时,AlamarBlueTM还原率明显升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);当浓度为50μg/ml时,差异极显著(P<0.01)。结论一定浓度的牛血浆纤维粘连蛋白具有促进大鼠成骨细胞增殖的作用。

纤维粘连蛋白EDA片段调控结肠癌SW480细胞的增殖、凋亡

目的研究纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡的影响。方法慢病毒感染结肠癌SW480细胞干扰纤维粘连蛋白EDA片段表达,建立纤维粘连蛋白EDA片段低表达的SW480细胞。利用MTT检测干扰前后细胞增殖的变化,并采用流式细胞术检测干扰前后细胞凋亡的变化。同时使用Western blot分别检测干扰前后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果慢病毒感染结肠癌SW480细胞后,纤维粘连蛋白EDA片段持续低表达。MTT法结果显示,干扰纤维粘连蛋白EDA片段24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低。转染组与未转染组及空载体组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示未转染组、空载体组及转染组的细胞凋亡率分别为(3.09±1.13)%、(3.71±0.42)%、(47.76±1.51)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot的结果显示干扰纤维粘连蛋白EDA片段后促凋亡因子Bax表达上调,同时,凋亡抑制因子Bcl-2表达降低。结论纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞具有促增殖、抗凋亡作用。

胚泡表面Le^Y寡糖对小鼠胚泡纤维粘连蛋白、层粘连蛋白表达及分泌的影响

目的 体外观察 L e Y 寡糖对着床前小鼠胚泡细胞外基质 ( ECM)主要成分纤维粘连蛋白 ( FN)、层粘连蛋白 ( LN)的表达和分泌的影响。 方法 采用特异性单克隆抗体 AH6阻断胚泡表面 L e Y寡糖 ,运用半定量逆转录 -聚合酶链反应 ( RT-PCR)及免疫印迹法检测 L e Y寡糖对着床前小鼠胚泡 FN及 LN的表达和分泌的影响。 结果 在体外培养中 ,经 AH6封闭胚泡表面 L e Y 寡糖抗原后仅 1 .5h,胚泡 FN及 L N的分泌有明显升高 ( P<0 .0 1 ) ,并且持续 6 h以上 ,而胚泡 FN及 L N的基因转录表达变化不明显 ( P>0 .0 5)。 结论 胚泡表面的 L e Y寡糖抗原对着床前胚泡的 FN及 L

纤维粘连蛋白及骨形成蛋白-2、4在牙胚发育中的表达研究

目的观察纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和骨形成蛋白-2、4(BMP-2、4)在大鼠牙胚发育中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及成熟过程的时空表达关系,为明确牙齿发育的分子调控网络提供理论和实验基础。方法获取SD大鼠蕾状期和钟状期第一磨牙牙胚,通过免疫组化LsAB法观察FN和BMP-2、4的表达差异及相互关系。结果FN在蕾状期和钟状期都有表达,蕾状期主要分布在牙上皮、牙间质,周围非牙间质细胞为阴性,钟状期主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域和分化中的内釉上皮细胞。钟状期BMP-2、4的表达较强,主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域。结论BMP-2、4和FN在牙齿发育的蕾状期和钟状期均有表达,但表达的阳性分布区不同。

基质金属蛋白酶-2和纤维粘连蛋白mRNA表达与乳腺癌转移相关性的探讨

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达量与乳腺癌转移的关系。方法:采用荧光定量RT-PCR方法检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌的MMP-2和FNmRNA表达量,分析MMP-2和FNmRNA表达量与乳腺癌转移的关系。结果:30例淋巴结转移癌的MMP-2和FNmRNA表达量低于原发癌,组间比较差异有显著性(P<0.05)。MMP-2和FNmRNA表达量呈线性分布,但线性回归和双变量线性相关分析表明两个基因的mRNA表达量无相关性(P<0.05)。结论:MMP-2和FNmRNA表达量在转移癌较原发癌下调。