积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与Smad信号通路的影响

目的 研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对 Smad信号通路的影响。 方法 采用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞 ,将成纤维细胞分为用与不用积雪草苷两组 (实验组和对照组 ) ,4 8小时后采用逆转录 -聚合酶链反应 ( reverse transcription- polymerase chain reaction,RT- PCR)观察 Smad2及 Smad7m RNA表达量的改变。应用流式细胞仪分析、免疫细胞化学及蛋白印迹 ( Western blot)技术结合光密度扫描分析 ,观察积雪草苷对瘢痕成纤维细胞周期及磷酸化 Smad2和 Smad7的改变。 结果 实验组可见瘢痕中成纤维细胞从 S期进入 M期细胞减少 ,受到抑制 ;成纤维细胞中 Smad2的含量及 Smad2 m RNA的表达实验组较对照组改变不明显 ,但 Smad7的含量及 Smad7m RNA的表达实验组与对照组分别为 ( 1.33± 1.2 6 ) %、( 5 0 .80± 2 2 .4 0 ) %及 ( 9.15± 3.36 ) %、( 32 .18± 17.84 ) % ,二者两组差异均有统计学意义 ( P<0 .0 5 )。 结论 积雪草苷抑制瘢痕的作用是通过 Smad通路 。

大黄素对人肾成纤维细胞增殖的影响

目的:研究大黄素对人肾成纤维细胞增殖的影响。方法:在体外人肾成纤维细胞培养的基础上,采用3HTdR掺入法观察了不同浓度大黄素(10、30、50、80、100μg/ml)对人肾成纤维细胞3HTdR掺入率的影响。同时,利用流式细胞仪观察了大黄素(10、50、100μg/ml)对细胞周期的影响。结果:大黄素以剂量依赖方式降低了人肾成纤维细胞3HTdR掺入率(r=0995,P<001)。大黄素(50和100μg/ml)抑制了人肾成纤维细胞细胞周期的进程(P<001)。结论:大黄素通过抑制细胞DNA合成,延迟细胞周期的进程,抑制了细胞增殖,这一结果为大黄素的临床应用提供了部分实验依据。

汉防己甲素对成纤维细胞增殖及胶原合成的作用

目的 :研究汉防己甲素 (Tet)对成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ,及其与一氧化氮 (NO )的关系。方法 :体外培养人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,应用3H_TdR及3H_脯氨酸参入法观察Tet对HLF细胞增殖及胶原合成的作用 ;应用比色法测定细胞培养液NO水平及一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 :与对照组比较 ,Tet能明显降低3H_TdR及3H_脯氨酸参入率 ;同时 ,明显升高细胞培养液NO水平及NOS活性。结论 :Tet具有抑制成纤维细胞增殖及胶原合成作用 ,NOS活性升高 ,NO合成、释放增加是Tet抑制成纤维细胞增殖及胶原合成作用机制之一。

dNCPs、TGF-β1及联合应用对人牙髓成纤维细胞增殖、ALP及矿化的影响

目的 :观察牙本质非胶原蛋白 (dentinnon collageproteins ;dNCPs)、转化生长因子 (transforminggrowthfactor ;TGF β1)及联合应用对人牙髓成纤维细胞生物学特性的影响。 方法 :利用混合酶消化法成功培养了人牙髓成纤维细胞 ,角蛋白及波形丝蛋白鉴定其来源。在细胞中分别加入牙本质粉、dNCPs、TGF β1及其复合物 ,通过MTT、ALPase和Von Kossa染色检测其作用。 结果 :dNCPs和TGF β1可显著增加细胞的增殖及ALPase分泌 ,细胞可聚集成团形成矿化结节。 结论 :dNCPs和TGF β1可改变人牙髓成纤维细胞的生物学活性 ,但两者间无相互促进作用。

羟基积雪草甙对体外培养人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究羟基积雪草甙 (madecassoside ,Md)对人皮肤成纤维细胞 (humanskinfibrob last,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 XTT法研究Md对HSFb增殖的影响 ;放射免疫的方法测定实验组和空白对照组细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原氨基端肽原 (procollagenⅠandⅢofaminoterminalpropeptide ,PINP ,PⅢNP)的含量。 结果 (1 )Md在浓度高达 2 0 0 μg/ml时仍未见任何细胞毒性。 (2 )与空白对照组相比 ,Md对HSFb有明显促进增殖作用 (P <0 0 5) ,有效刺激HSFbPINP和PⅢNP的分泌。 (3)Md刺激靶细胞PINP和PⅢNP分泌的生物学作用呈现明显的量效关系。结论 Md在刺激体外培养HSFb增殖及Ⅰ。

钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的心脏成纤维细胞增殖中的作用

本研究观察了钙调神经磷酸酶 (CaN)在血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激的大鼠心脏成纤维细胞增殖中的作用。在培养的大鼠心脏成纤维细胞上 ,应用双波长荧光光度计检测Fura 2标记的细胞游离Ca2 +浓度 ;应用对硝基苯磷酸 (PNPP)作底物测定钙调神经磷酸酶 (CaN)活性 ;根据 3H 胸腺嘧啶掺入法评估CaN特异性抑制剂环胞素A(CsA)对AngⅡ刺激的心脏成纤维细胞DNA合成的影响。结果表明 ,AngⅡ (10 -7mol/L)刺激培养的大鼠心脏成纤维细胞 3H 胸腺嘧啶掺入较对照组增高 72 % (P <0 0 1) ,CsA可以抑制AngⅡ刺激的细胞 3H 胸腺嘧啶掺入。AngⅡ刺激的大鼠心脏成纤维细胞胞内Ca2 +浓度及CaN活性较对照组分别增高 112 % (P <0 0 1)和 17% (P <0 0 5 )。结果提示 ,CaN在一定程度上参与AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖的信号传递。

硝普钠促肺成纤维细胞增殖和凋亡的作用(英文)

用MTT测定、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法 ,观察了一氧化氮供体硝普钠 (sodiumnitroprusside,SNP)对体外培养的肺成纤维细胞增殖和凋亡以及Bcl 2、Bax和p5 3蛋白含量的影响。结果发现 :MTT吸光度、细胞数和增殖指数 (proliferationindex ,PI)均较对照增加 ;凋亡细胞数也增加 ,但尚不足以出现明显的“梯形”凋亡电泳条带 ;同时 ,细胞内Bcl 2蛋白下调和Bax蛋白上调 ;而细胞内p5 3蛋白含量无明显变化。结果表明 ,外源性NO有增强肺成纤维细胞增殖和凋亡的双重作用 ,但以促细胞增殖为主 ;此作用的分子机制与Bcl 2蛋白下调和Bax蛋白上调有关。

积雪草甙对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7表达的影响

目的研究积雪草甙对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7的影响。方法用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞术、免疫细胞化学检测其在正常状况和应用积雪草甙后细胞周期的改变与磷酸化Smad2和Smad7的改变。结果 积雪草甙可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期,减少成纤维细胞中磷酸化Smad2的含量,增加细胞中Smad7的含量。结论 积雪草甙抑制瘢痕的作用可通过Smad通路。

视黄酸对培养的鸡巩膜成纤维细胞增殖及超微结构的影响

目的:研究视黄酸(retinoic acid,RA)对体外培养的鸡巩膜成纤维细胞的生长及其超微结构的影响。方法:取第2～3代鸡巩膜成纤维细胞于96孔板中培养24h至贴壁后,分为A组(对照组)和各种终浓度梯度的RA实验组:B组(6×10~7mol/L)、C组(6×10~6mol/L)、D组(6×10~5mol/L)和E组(6×10^(-4)mol/L)分别作用24,48,72h,以MTT比色法检测RA对鸡巩膜成纤维细胞增殖的影响。另分别取对照组及6×10~5mol/LRA组对数生长期2代细胞铺片采用透射电镜观察其超微结构的改变。结果:与对照组相比,6×10~7mol/LRA对鸡巩膜成纤维细胞增殖没有明显的抑制作用(P >0.05);6×10~5mol/L及作用24h以上6×10~6mol/LRA明显抑制体外培养的鸡巩膜成纤维细胞的增殖(P<0.01)。6×10~4mol/LRA组细胞普遍变性崩解,抑制作用最强。与对照组比较,RA组细胞生长明显受抑制,胞质水肿,部分线粒体水肿空泡变,内质网扩张,细胞器呈变性改变。结论:RA对体外培养的鸡巩膜成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,并引起其超微结构的改变。可能是近视发生机制中的一个重要成分。

半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的通过对天然药物半边旗5F对瘢痕成纤维细胞凋亡作用的研究,以期探寻新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法以四甲基偶氮唑(MTT)法、流式细胞术和原位末端标记技术检测半边旗5F对成纤维细胞增殖和凋亡的影响。结果半边旗5F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性。采用流式细胞术和TUNEL法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高(P<0.05)。结论半边旗5F对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,并且能够诱导其发生凋亡,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物进行了新的尝试。

检测人成纤维细胞增殖的XTT比色法

利用 3种不同来源的成纤维细胞 (大鼠肾上皮细胞 ,人胎肺成纤维细胞 ,人成纤维细胞 )的活细胞线粒体脱氢酶在电子偶联剂硫酸酚嗪甲酯 (phenazinemethosulfate,PMS)的协同作用下 ,还原四氮唑复合物 (XTT)形成可溶性的棕黄色甲簪 (formazan)产物 ,测定细胞甲簪的生成量来反映细胞的生长与活性状态 ,并与传统的四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法作比较 .结果表明 ,XTT方法直接测定水溶性的甲簪产物 ,敏感度高于MTT法 ,具有操作简单、快速、灵敏度高、结果准确的优点 ,为成纤维细胞的研究建立了新的检测方法 .

川芎嗪和甘利欣对瘢痕成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响

目的观察川芎嗪、甘利欣对体外培养瘢痕成纤维细胞增殖和Ⅰ型、Ⅲ型前胶原基因表达的影响,探讨它们治疗瘢痕疙瘩的机理。方法体外培养瘢痕成纤维细胞。应用不同浓度的川芎嗪、甘利欣作用于3～9代瘢痕成纤维细胞。MTT法测定川芎嗪、甘利欣对瘢痕成纤维细胞增殖的影响。核酸斑点杂交法检测川芎嗪、甘利欣对瘢痕成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原基因表达的影响。结果MTT法显示,川芎嗪(0.1mg/mL,0.25mg/mL)、甘利欣(0.1mg/mL,0.25mg/mL,0.5mg/mL),作用时间48h、72h,均能明显地抑制瘢痕成纤维细胞增殖。随浓度增加,川芎嗪(0.5mg/mL,1.0mg/mL)、甘利欣(1.0mg/mL),在24h、48h、72h均显示明显的抑制作用(P<0.05)。浓度为1.0mg/mL、作用48h,72h,两种药物的抑制作用与曲安奈德组相比无显著性差异(P>0.05)。核酸斑点杂交结果提示,川芎嗪、甘利欣可显著降低瘢痕成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA的含量(P<0.01)。结论川芎嗪、甘利欣对体外培养的瘢痕成纤维细胞的增殖有显著的抑制作用,呈明显的剂量依赖关系和时间依赖关系。川芎嗪、甘利欣显著抑制瘢痕成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。

血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞增殖及p21,p27表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)增殖的作用及其分子机制。方法:差速贴壁法体外培养新生Wistar大鼠的CFs,随机分为3组:对照组,AngⅡ处理组,洛沙坦(losartan)+AngⅡ处理组。作用24h后,收集细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期与p21和p27的蛋白表达。结果:AngⅡ可显著提高CFsMTT-OD值,使S期细胞比率增加,G1期细胞比率下降,并降低细胞p27蛋白的表达,而对p21的蛋白表达无影响。AT1受体拮抗剂Losartan可完全阻断AngⅡ的作用。结论:AngⅡ通过AT1受体促进CFs增殖的机制可能与降低细胞p27蛋白的表达有关。

塔斯品碱对大鼠皮肤创伤和对成纤维细胞增殖及分泌的影响

目的:观察塔斯品碱(TA)对大鼠皮肤创伤愈合的作用及对成纤维细胞增殖和分泌生长因子的影响,探讨其促愈合作用机制.方法:建立大鼠皮肤损伤模型,采用组织学的方法评价愈合质量;体外培养L929成纤维细胞,MTT法观察TA对成纤维细胞增殖的影响,ELISA法测定TA对成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)及表皮生长因子(EGF)的影响.结果:TA 3.0和1.5 mg/ml溶液外涂对实验性大鼠皮肤损伤有加速修复作用;体外实验表明,0.05～0.4μg/ml TA可明显增加成纤维细胞对TGF-β1和EGF的分泌,其作用呈剂量依赖性,而对成纤维细胞的增殖无明显影响.结论:TA具有促伤口愈合作用,其作用可能与促进成纤维细胞分泌TGF-β1和EGF有关.

挤压伤大鼠血清促心脏成纤维细胞增殖作用

【目的】观察挤压伤大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞的增殖作用。【方法】培养1～3d龄SD大鼠心脏成纤维细胞,观察挤压伤大鼠血清和正常大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞数量、蛋白质含量、犤3H犦-胸腺嘧啶核苷(犤3H犦-TdR)和犤3H犦-脯氨酸(犤3H犦-Proline)掺入的影响。【结果】与正常大鼠血清组比较,挤压伤大鼠血清使培养的心脏成纤维细胞的数量(×109/L)、总蛋白含量(μg/2mL)分别由0.33±0.01、163.3±24.1增加至0.50±0.02和324.6±52.2,犤3H犦-Proline和犤3H犦-TdR掺入后测得的每分钟脉冲数则分别由1211.7±140.7、1104.8±113.9上升至2000.7±96.2和2066.2±223.5。【结论】肢体挤压伤大鼠血清可促进培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成。

rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的 探讨rhGM CSF促进口腔溃疡愈合的作用机制。方法 取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞 ,用rhGM CSF刺激成纤维细胞后第 2、4、6天用细胞计数及3 H 胸腺嘧啶掺入法 (3 H TdR)测定其增殖情况。结果 rhGM CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用 ,在 80～ 10 0ng/ml时 ,细胞生长达到最佳状态 ,过高浓度rhGM CSF的刺激作用反而下降。结论 rhGM