当归原药材与标准汤剂一致性评价

通过对比分析当归原药材与标准汤剂的体外活血活性标准,并建立其高效液相指纹图谱,以期对当归原药材与标准汤剂的质量相关性进行分析.采用纤维蛋白原平板法,以尿激酶、生理盐水分别作为阳性、阴性对照,透明圈大小为指标对当归原药材与标准汤剂的体外活血活性进行测定,采用高效液相色谱法建立其指纹图谱.实验结果显示:体外活血活性标准对比时,当归原药材有透明圈,而标准汤剂无透明圈;当归原药材与标准汤剂的高效液相指纹图谱均有8个共有特征峰,原药材比标准汤剂多一个峰A,但活血活性效应与8个共有特征峰并无相关性.实验结果表明,当归原药材与标准汤剂存在一定的差异性.

基于酶活性的地龙质量标准再评价研究

目的：建立基于体外酶活性法的地龙质量标准。方法：采用纤维蛋白原平板法,以尿激酶为参照,测定地龙蛋白酶的活性。结果：尿激酶在60-360 U/m L范围内与溶圈面积呈良好线性关系,r=0.999;平均加样回收率为98.84%,RSD为0.87%。结论：该法可快速、简便、准确地测定地龙所含蛋白酶的活性,可用于地龙质量控制。

酶解水蛭地龙混合药渣的工艺研究及其产物的抗凝活性评价

[目的]考察蛋白酶酶解水蛭地龙混合药渣的工艺条件,评价其酶解产物的抗凝活性。[方法]分别采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶对混合药渣进行酶解实验。采用凝血酶滴定法和纤维蛋白原平板溶圈法评价酶解产物的体外抗凝活性,以确定最佳酶种类。溶液pH、酶底比、酶解时间、酶解温度为考察因素,单因素实验优化酶解工艺。[结果]与药渣对照组和蛋白酶对照组对比发现,水蛭地龙混合药渣酶解液显示出较强抗凝活性。其中,碱性蛋白酶酶解产物的抗凝效果最好。其最佳工艺条件为酶底比0.95%、pH 11.4、酶解温度45℃,酶解时间4 h。[结论]经碱性蛋白酶酶解后,水蛭地龙药渣酶解液的抗凝活性最强。实验为废弃药渣的再利用提供实验依据和开发方向。

基于酶活性丹参茎叶散剂活血活性谱—效模型研究

采用HPLC法和纤维蛋白原平板法,测定6批丹参茎叶散剂的特征图谱和体外活血活性值,并对特征图谱的特征峰进行指认,分析其特征峰成分与活血活性的相关性;采用SPSS软件,经主成分分析、相关性分析和多重线性回归分析的方法构建其谱—效模型,并用6批丹参茎叶散剂对其进行验证.丹参茎叶散剂特征图谱中得到9个特征峰,体外活血活性值在132.52~153.25 U/mL.根据主成分分析,综合解释总方差和碎石图分析,得该模型的最优主成分数为5,由Spearman相关性分析得到5个主成分色谱峰和活血活性相关性均大于0.657,且对活血作用显示正相关,预测值和测量值的相对误差较小.建立的基于酶活性的活血活性谱—效模型可较好地预测丹参茎叶散剂的活血活性,为其进一步开发利用提供基础.

活血通脉胶囊抗凝血酶活性生物效价测定法的建立

目的建立活血通脉胶囊抗凝血酶活性生物效价测定方法,用于评价和控制其质量。方法分别对Markwardt法、纤维蛋白原平板法(沉淀法)测定水蛭和活血通脉胶囊的生物效价进行比较研究;选择琼脂糖-纤维蛋白原平板法(沉淀法)作为活血通脉胶囊生物效价测定方法,考察试验系,并进行了方法学验证。结果琼脂糖-纤维蛋白原平板法(沉淀法)测定水蛭和活血通脉胶囊抗凝血酶生物效价的中间精密度RSD分别为3.5%、5.2%,优于Markwardt法(RSD分别为15.6%、12.9%)。本法的线性范围为5 BP^20 BP(R2=0.994),回收率为98.26%,RSD 2.3%(n=6),中间精密度RSD 3.2%,重复性RSD 4.7%。结论琼脂糖-纤维蛋白原平板法(沉淀法)可用于活血通脉胶囊中抗凝血酶活性生物效价的测定,以评价和控制其生物质量。

重组纳豆激酶工程酵母菌发酵研究

利用在纤维蛋白平板法基础上进行改造的纤维蛋白原—琼脂糖平板法,筛选具有纳豆激酶活性的基因工程酵母菌。并用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶纤溶活性。通过甲醇诱导从近100个菌落中筛选出5株纳豆激酶活性较高的重组纳豆激酶工程菌。同时确定了重组纳豆激酶酵母菌的最佳甲醇诱导浓度2%,产酶高峰时间为96h。

地龙渗漉工艺参数优选

目的：优选地龙的渗漉工艺参数.方法：采用体外溶血法,以含固量和蛋白酶活性为综合评价指标,通过单因素试验优选地龙的渗漉工艺.结果：尿激酶在25 -125 U·mL-1与溶圈面积呈良好线性关系,最佳渗漉工艺参数为地龙粉碎为粗粉,浸泡时间0.5h,渗漉速度2 mL·min-1,加8倍量60％乙醇渗漉;渗漉液体积220 mL,含固量3.252 g,蛋白酶活性5 624.7 U·g-1.结论：纤维蛋白原平板法可快速、简便、准确地测定地龙中酶的活性,优选的工艺参数稳定可行,为地龙有效成分的充分利用提供新选择.

基于酶活性的丹参茎叶活血活性谱-效模型

目的:以12批丹参茎叶为研究对象,为究其HPLC指纹图谱中色谱峰和活血活性的相关性,建立其基于酶活性的活血活性谱-效模型并进行验证。方法:采用高效液相色谱法和纤维蛋白原平板法,测定6批丹参茎叶的指纹图谱和体外活血活性值,用对照品对指纹图谱特征峰进行指认,并对指纹图谱特征峰成分与其活血活性进行相关分析;运用SPSS软件,采用主成分分析-相关性分析-多重线性回归的分析方法建立其谱-效模型,采用6批丹参茎叶对该模型进行验证。结果:丹参茎叶指纹图谱中得到7个特征峰,由Kendalls tau-b相关性分析可证明丹参茎叶活血活性与7个色谱峰峰面积有相关性,陡坡图分析得该模型的最优主成分数为5,经指认分别为原儿茶醛,咖啡酸,共有峰5(未指认),迷迭香酸和丹酚酸B。其中原儿茶醛、共有峰5和丹酚酸B对活血作用显正相关,咖啡酸(CA)和迷迭香酸(PCA)对活血作用显负相关,预测值和实测值的平均相对误差较小。结论:该实验建立的基于酶活性的活血活性谱-效模型可较好地预测丹参茎叶的活血活性。