薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法对纤溶酶活性的体外检测

用薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法体外检测了6种市售心血管药物的纤溶酶活性,结果与所检测药物的相关药理作用相符,表明薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法能够准确、可靠地进行纤溶酶活性的体外检测.

一种检测凝血酶、类凝血酶的新方法——纤维蛋白原平板法

目的:创建一种定量检测凝血酶(Thrombin)、类凝血酶(Thrombin-likeenzymes)活性的新方法——纤维蛋白原平板法。方法:采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应,制作相应的标准曲线及回归曲线,并对凝血酶、类凝血酶活性作定量测定。结果:本法制作的凝血酶、类凝血酶检测标准曲线具有良好的线性关系(r=0.9994、r=0.9997)。结论:纤维蛋白原平板法可用于凝血酶、类凝血酶定量测定。具有操作简便、直观、稳定、敏感度高,不受检品浊度或颜色干扰且成本低廉等特点。

大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶的研究

为研究大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶,通过对 6种树脂的吸附容量,吸附平衡时间,洗脱液等条件进行考察,筛选出了D4020和D3520两种分离效果较好的树脂。

一种改良的纤维平板法

介绍一种改良的用以快速地定性和半定量检测纤溶活性蛋白的纤维平板法.对该方法中的几个关键因素作了详细的研究和探讨.纤维平板中纤维蛋白原和纤溶酶原的浓度对裂解面积不产生任何影响,但是纤维蛋白原的浓度会对裂解圈的观察产生影响,纤维蛋白原浓度低于0.2 mg/mL时会使背景色过淡而不能清晰地观察到裂解圈.尿激酶浓度在2～250 mU/μL范围时,尿激酶浓度的对数和裂解圈相互垂直的两条直径乘积的对数之间存在明显的线性关系.在本实验设计方案下,尿激酶的最佳使用浓度为10～20 mU/μL.同时,本文还探讨了纤维平板中纤溶酶原的去活条件,当琼脂纤维平板凝固后很难完全去活纤溶酶原,但是,在琼脂纤维蛋白原混合物凝固前于95℃持续温浴40 min,则能彻底去活纤维蛋白原中残留的纤溶酶原.

tPA体外纤溶活性及半定量检测方法的确立

在原有的纤维蛋白平板溶圈法 (fibrin agarose plate assay,FAPA)检测系统中引入纤溶酶原 (plasminogen) ,使该法检测组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activator,t- PA)的灵敏度提高 30倍以上 ,达到 0 .0 1ng(约0 .0 0 1IU )水平 ;并对不同反应时间、纤维蛋白含量、琼脂糖凝胶厚度下的溶圈结果进行对比研究。结果表明 ,37℃温育18～ 2 4h可以得到较满意结果 ;其他因素虽不同程度地影响溶圈出现时间及大小 ,但对其溶圈梯度及标准曲线无明显影响。从而确立了以 FAPA为基础的快速、灵敏、可靠的重组 t- PA体外纤溶活性半定量检测方法。

赤爱胜蚯蚓（Eiseniba Foetida Sarigng）纤溶酶的研究──■蚯蚓纤溶酶活性测定方法的研究

本文主要阐述了蚯蚓纤溶酶活性（效价）的测定方法的研究结果。通过对气泡上升法，精氨酸脂酶法（ＴＡＭＥ法）和纤维蛋白平板法测定蚯蚓纤溶酶活性的比较，最后认为纤维蛋白平板法能够客观地表示出纤溶酶溶解血栓的能力，虽然方法较为复杂，难度较大，但准确性强，结果可靠。ＴＡＭＥ法由于受样品中混有杂蛋白酶其稳定性受到一定的影响，但此法简便易行可作为中间产品的快速检测。文中详细地介绍了纤维蛋白平板法。

瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法,测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10%,3%,3%和6%,表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好,特异性好,灵敏度高,较适合测定瑞替普酶活性的要求。

慢性扁桃体炎组织中的纤溶酶原激活剂测定

目的 :为探讨蛋白分解酶在扁桃体炎发展和转归中所起的作用。方法 :运用纤维蛋白平板的方法对 19例慢性扁桃体炎患者的扁桃体组织进行初步研究。结果 :慢性扁桃体炎的扁桃体组织中有纤溶酶原激活物的活性 ,平均比活性值为(2 2 8.847± 2 2 7.90 5 ) mm2 /μg。结论 :提示抗纤溶疗法是治疗慢性扁桃体炎很有潜力的手段。

甘糖酯对大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物活性的诱导作用

为了研究甘糖酯对大鼠体内尿激酶型纤溶酶原激活物 (urokinase PlasminogenActivator,u PA)活性的影响 ,采用溶解圈中和抑制法和发色底物法检测了大鼠口服甘糖酯后体内u PA活性的变化情况。结果表明 :甘糖酯可提高大鼠体内血液的纤溶活性 ,主要表现为 u PA活性升高。以不同剂量的甘糖酯连续喂药 10 d后 ,发现喂药组大鼠 u PA活性明显高于对照组 ,喂药组大鼠血浆 u PA活性升高同喂药剂量正相关 ,在 0～ 10 0 mg/ kg的剂量范围内 ,随喂药剂量增加而升高。提示在一定的剂量范围内甘糖酯可提高大鼠体内 u PA活性 ,激活纤溶系统 ,提高血液纤溶活性 。

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在转基因烟草中的表达

实验室构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,t-PA)植物表达载体并转化入根瘤农杆菌GV3101。该农杆菌以叶盘法转化烟草,建立表达t-PA的转基因烟草体系。通过对转化植株进行Southern blotting,RT-PCR,Western blotting和纤维蛋白琼脂糖平板(fibrin-agarose plate assay,FAPA)法检测,结果显示,在转基因烟草中成功地表达出有活性的人t-PA。

纳豆菌(Bacillus natto)纤溶活性分析

通过纤维平板法测定了纳豆菌（ＢａｃｉｌｕｓＮａｔｏ）的裂解纤维凝块抗血栓活性。同时，初步探索了该菌抗血栓有效成份—纳豆激酶（Ｎａｔｏｋｉｎａｓｅ）在３７℃下产率最高，该菌的液体培养５０ｈ左右酶活性最佳。并查明该酶在培养液ｐＨ为６．３０～１０．８０。

中国根霉12~#纤溶酶活力单位的测定

主要阐述了根霉纤溶酶活性 (效价 )的测定方法 ,采用血纤维蛋白平板法 ,在以尿激酶为参照标准的情况下 。

纳豆激酶活性测定方法

对先后建立的纤维平板法等几种测定纳豆激酶活性的方法进行概括总结介绍。

影响纤维蛋白原检测结果的因素分析

目的:探讨纤维蛋白原测定的影响因素。方法:采用凝血酶法检测不同样本状态纤维蛋白原含量,并对纤维蛋白原测定的两种方法即凝血酶法和PT-演算法进行方法学比对研究。结果:标本溶血或脂血不影响利用凝血酶原理对纤维蛋白原含量的测定,但PT-演算法对脂血标本则产生测定误差;方法学比对结果显示纤维蛋白原含量在1.5-4.3g/L浓度之间,两种方法学之间无统计学差异,但对于过低或过高浓度时两种方法测定结果产生明显的偏离。结论:在临床工作中首先要采集合格的标本,然后尽可能选择凝血酶法进行测定,以确保为临床提供准确可靠的实验结果。

急性脑梗死患者同型半胱氨酸及凝血纤溶相关指标的检测及意义

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)、凝血及纤溶指标对判断急性脑梗死疾病的进展与预后的意义。方法:收集45例急性脑梗死患者(急性脑梗死组)和30例健康体检者(对照组)外周血,检测血浆中Hcy、纤维蛋白原、D-二聚体和纤溶酶原的含量,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin量表(mRS)评分对急性脑梗死患者疾病的进展及预后进行评估和分组,观察不同预后与不同进展各组患者血浆Hcy、纤维蛋白原、D-二聚体和纤溶酶原的含量变化。结果:急性脑梗死组患者血浆Hcy、纤维蛋白原、D-二聚体含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);急性脑梗死组患者血浆中纤溶酶原的含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与急性脑梗死疾病进展组相比,非进展组患者的Hcy、纤维蛋白原及D-二聚体含量较低,纤溶酶原含量较高,差异有统计学意义(P<0.05);急性脑梗死患者预后良好组与不良组的Hcy、纤维蛋白原及纤溶酶原的差异无统计学意义(P>0.05),预后良好组D-二聚体含量较预后不良组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:检测Hcy及凝血纤溶相关指标的含量可有效判断急性脑梗死患者病情、预后和进展,D-二聚体含量与患者的预后相关。

胆囊结石患者胆汁凝血、抗凝、纤溶指标的检测

目的 :探讨胆囊结石患者胆汁凝血、抗凝和纤溶指标变化。方法 :采用免疫比浊法、ELISA和发色底物法测定2 0例胆囊结石和 17例非结石患者胆汁中凝血、抗凝和纤溶指标。结果 :胆囊结石组胆汁高凝、抗凝活性减低、纤溶活化。结论 :胆囊结石患者胆汁中凝血、抗凝、纤溶功能异常与结石形成有关。

凝血和纤溶功能在妊娠高血压综合征中的作用

目的研究凝血和纤溶功能在妊娠高血压综合征(简称妊高征)中的作用。方法对70例妊高征患者,采用美国ACL- 200全血自动凝血分析仪检测凝血指标,用发色底物法检测组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(t- PA)及纤溶酶原激活物抑制剂(PAI -1 )。结果妊高征患者的部分激活凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)缩短,纤维蛋白原(Fg)含量升高,PAI- 1活性升高,与正常妊娠妇女相比,P<0. 05;中、重度妊高征患者的上述指标与轻度妊高征患者相比,P<0. 05;t- PA在各组之间无显著性差异。结论凝血和纤溶功能的改变对妊高征的发生、发展起一定作用。

急性胰腺炎患者凝血、纤溶功能的变化检测及意义

目的探讨33例急性胰腺炎患者凝血及纤溶系统的变化及临床意义。方法用全自动血凝分析仪,检测急性胰腺炎组和正常对照组的凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶原时间(APPT)和纤维蛋白原浓度(FIB)。ELISA法检测D-二聚体(D-dimmer)。结果在各项指标中,轻型急性胰腺炎组与对照组比较差异无显著性(P>0 05);重症急性胰腺炎组和对照组比较差异有显著性(P<0 01)结论重症急性胰腺炎病人PT、APTT和FIB、D-dimmer值明显异常,且提示预后不佳。早期监测急性胰腺炎患者凝血、纤溶功能对病情的转归判断与预后有重要意义。