纤维蛋白原样蛋白2凝血酶原酶与暴发性肝衰竭的研究进展

纤维蛋白原样蛋白2(fgl2)凝血酶原酶是近年发现的一种新的促凝因子。在病毒引起的暴发性肝衰竭(FHF)中,由巨噬细胞和内皮细胞分泌的fgl2凝血酶原酶在肝脏选择性高表达,可通过直接激活凝血酶原转化为凝血酶而启动免疫凝血过程,加重肝损伤。fgl2凝血酶原酶的活性与肝损伤的程度、病毒易感性密切相关。肝细胞核因子4α是病毒核心蛋白激活小鼠凝血酶原酶fgl2基因的必需转录因子。fgl2凝血酶原酶的研究可为FHF的治疗提供新的靶点。

人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定

目的建立人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(fibrinogen-related domain,FRED)的原核表达系统,并鉴定表达蛋白的凝血活性。方法应用RT-PCR从外周血单个核细胞扩增fgl2凝血酶原酶FRED基因,克隆到原核表达载体pET22b(+),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,重组蛋白经SDS-PAGE电泳和免疫印迹鉴定并用His-Tag柱纯化,以促凝活性(procoagulant activity,PCA)检测鉴定其凝血功能。结果扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED基因,成功构建了重组pET-FRED原核表达质粒,表达的融合蛋白具有直接促凝血活性。结论建立了人fgl2凝血酶原酶FRED的高效原核表达系统,FRED可能为fgl2凝血酶原酶促凝血的活性区域。

fgl2凝血酶原酶在重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的表达意义

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝损伤中fgl2凝血酶原酶的表达情况及意义。方法 SD大鼠采用数表法随机均分为假手术(SO)组和SAP组,各24只。采用逆行胆胰管注射4%牛磺胆酸钠法制备大鼠SAP模型。收集术后1、4及8h时点肝脏标本,行常规病理检查及Masson染色随机计数肝脏微血管内微血栓形成的阳性血管数;血样检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST);实时定量(real-time)PCR法、免疫组织化学法测定fgl2凝血酶原酶在大鼠肝脏的表达情况。结果组织病理学检查示SAP大鼠肝组织内炎细胞浸润及坏死;fgl2凝血酶原酶在SAP大鼠肝脏微血管内皮细胞高表达(P<0.01);SAP组肝脏微血管可见微血栓形成;SAP大鼠阳性血管率显著高于SO组(P<0.01),且与肝脏fgl2凝血酶原酶表达呈正相关(r=0.948,P<0.01);SAP组肝脏病理学评分显著高于SO组(P<0.01)且与fgl2凝血酶原酶表达呈正相关(r=0.704,P<0.01)。结论 fgl2凝血酶原酶在SAP大鼠肝脏中的异常表达可能通过介导微血栓形成导致SAP相关性肝损伤的进展;其表达水平可能与SAP相关性肝损伤的病理损害程度相关。

胆固醇结石患者胆汁凝血因子及纤维蛋白与结石形成关系的研究

目的:通过研究胆囊胆固醇结石(简称胆石)患者胆石或胆囊胆汁中的纤维蛋白和凝血因子来阐明纤维蛋白在胆固醇结石形成中的作用。方法:收集胆石患者胆囊胆汁2 5份及非胆石患者胆囊胆汁15份,测定凝血酶原片段1+ 2 (F1+ 2 )、抗凝血酶Ⅲ抗原与活性、纤溶酶消化前后D -二聚体及总蛋白水平。取胆石15枚,制作成石蜡切片,分别行PAS染色、纤维蛋白和因子免疫组织化学染色。结果:胆石患者胆汁中F1+ 2、抗凝血酶Ⅲ抗原、抗凝血酶Ⅲ抗原含量与活性之比、D -二聚体、总蛋白和纤维蛋白含量均高于非胆石组(P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;抗凝血酶Ⅲ活性却低于非胆石组(P <0 .0 5 ) ;胆石组胆汁经纤溶酶消化后D 二聚体水平显著升高(P <0 .0 1)。胆石中的蛋白提取物经纤溶酶消化后可检测到D -二聚体。胆石切片PAS染色、纤维蛋白和因子免疫组织化学染色均呈现阳性网状结构分布。结论:胆石患者的胆汁处于“血栓前”状态,成石胆汁中有大量的交联纤维蛋白生成与累积;纤维蛋白与因子参与了胆石网状结构的形成。

重组hfgl2-miRNA腺病毒在裸鼠人肝癌模型中的安全性初探

目的:探讨针对人hfgl2-miRNA的腺病毒颗粒(Ad-hfgl2-miRNA)在裸鼠人肝癌模型中的体内分布及安全性。方法:利用人肝癌细胞系HCCLM6建立裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤模型,每只裸鼠瘤内注射1×10~9 IU的Ad-hfgl2-miRNA,于给药后第1、3、7、9、11、15、19、24天采用qRT-PCR检测Ad-hfgl2-miRNA在裸鼠心、肝、脾、肺、肾、瘤、小肠中的表达,通过检测体内生化指标及组织病理改变,初步评估药物的安全性。结果:Ad-hfgl2-miRNA在裸鼠心、肝、脾、肺、肾、瘤、小肠中均有表达,以心、肝、肾、瘤、小肠表达较强,维持至停药后第24天。各生化指标检测值无明显异常或仅有轻度异常。组织病理学未见明显病理改变。结论:Ad-hfgl2-miRNA在荷瘤裸鼠体内及瘤内能够安全表达,未见有器官损害表现,为今后开展Ad-hfgl2-miRNA的基因治疗奠定了基础。

大鼠冠脉原位血栓模型中纤维介素的表达及意义

目的:探讨在大鼠冠脉原位血栓模型中纤维介素(fgl2)的表达及意义。方法:雄性SPF级SD大鼠78只,随机分到模型组36只,假手术组36只和正常对照组6只,模型组与假手术组术后1h、1d、1周、2周、3周、4周各6只。模型组经主动脉根部注入月桂酸钠,假手术组注入生理盐水,正常对照组不予处理,分别用HE与纤维素快速染色(MMSB)、ELISA、RT-PCR法、免疫组化法观察冠脉微血管原位血栓的形成及血管性假血友病因子(vWF)与fgl2的表达。结果:模型组大鼠心肌微血管可见血小板纤维蛋白性原位血栓,有原位血栓形成的微血管数量显著增加;血浆中vWF水平明显升高;RT-PCR示fgl2表达明显增加,免疫组化示fgl2分布于心肌微血管壁。假手术组和正常对照组未见明显变化(P>0.05)。结论:在冠脉微血管内皮细胞功能紊乱的基础上,冠脉微血管壁fgl2表达显著增加并促进以血小板纤维蛋白沉积为主的原位血栓形成。

FGL2凝血酶原酶在糖尿病大鼠心脏的表达及意义

目的探讨纤维蛋白原样2(FGL2)凝血酶原酶在糖尿病大鼠心脏的表达及其意义。方法实验大鼠随机分为对照(NC)组和2型糖尿病(T2DM)组。HE染色及纤维素染色(改良MSB染色)观察大鼠心脏病理改变,随机计数微血管中微血栓形成的阳性血管数;逆转录PCR法、免疫组织化学法测定FGL2凝血酶原酶在大鼠心脏的表达。结果与NC组相比,FGL2凝血酶原酶在T2DM大鼠的心脏微血管内皮细胞中高表达;T2DM组大鼠心脏微血管内可见微血栓形成;T2DM组大鼠阳性血管数显著高于NC组,且与FGL2凝血酶原酶蛋白表达呈正相关。结论 FGL2凝血酶原酶可能通过介导糖尿病心脏微血栓形成而促进糖尿病微血管病变的发生与发展。

妊娠期糖尿病患者胎盘FGL2凝血酶原酶在滋养细胞的表达及其意义分析

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘滋养细胞纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)凝血酶原酶的表达及其意义分析。方法选取2020年11月至2022年1月在广西壮族自治区南溪山医院妇产科就诊的GDM患者100例作为观察组,同时选取正常孕妇100例作为对照组,比较两组FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达,同时分析观察组有和无不良妊娠结局患者临床资料、FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达差异。结果观察组FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达分别为(1.03±0.31)和(0.97±0.22),明显高于对照组(P<0.05)。观察组有和无不良妊娠结局患者年龄、孕期体质量指数(BMI)和不良孕产史比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组有不良妊娠结局患者FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达、空腹血糖(FBG)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分别为(1.34±0.29)、(1.21±0.26)、(7.25±0.87)mmol/L和(1.95±0.30),明显高于无不良妊娠结局患者(P<0.05)。FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达与FBG、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、孕期BMI、FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达是GDM患者不良妊娠结局的影响因素(P<0.05)。结论GDM患者胎盘滋养细胞FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达明显上调,与患者胰岛素抵抗、不良妊娠结局有关,值得进一步研究。

fgl2在重症急性胰腺炎大鼠胰腺中的表达及意义

目的:探讨纤维蛋白原样2(fibrinogen-like protein 2,fgl2)在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺中的表达及意义。方法:48只SD大鼠随机均分为假手术(sham operation,SO)组及SAP组。实时荧光定量PCR法、免疫组化法检测fgl2在大鼠胰腺及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的的表达。结果:与SO组相比,fgl2在SAP大鼠胰腺微血管内皮(P<0.01)及PBMC(P<0.05)中高表达;SAP组胰腺病理评分显著高于SO组(P<0.01),且与胰腺(r=0.852,P<0.01)及PBMC(r=0.735,P<0.01)中fgl2表达呈正相关。结论:fgl2在胰腺及PBMC中的表达与胰腺损伤程度密切相关,因此可能可用作早期预测SAP发生的标记物。

fgl2参与重症急性胰腺炎大鼠微血栓形成

目的研究纤维蛋白原样2(fgl2)凝血酶原酶在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺微血栓形成中的作用。方法 48只SD大鼠随机平均分为假手术(SO)组,重症急性胰腺炎(SAP)组,每组24只。SAP组通过胰胆管逆行注射4%牛璜胆酸钠方法诱发。各组于术后1、4和8h分批处死大鼠(各时点8只),HE染色及Masson染色观察大鼠胰腺病理改变,随机计数微血管中血栓形成的阳性血管率;实时(real-time)荧光定量PCR法、免疫组织化学法测定fgl2凝血酶原酶在大鼠胰腺中的表达。结果与SO组相比,fgl2凝血酶原酶在SAP大鼠组胰腺微血管内皮高表达(P<0.01);SAP大鼠组胰腺微血管中可见微血栓形成;SAP大鼠组中阳性血管率显著高于SO组(P<0.01),且与胰腺fgl2蛋白表达呈正相关(r=0.878,P<0.01)。结论 fgl2凝血酶原酶可能通过介导胰腺内微血栓的形成而促进重症急性胰腺炎的发生与发展。

FGL2在急性病毒感染过程中对T细胞免疫应答的影响研究

目的探讨纤维蛋白原样2凝血酶原酶(FGL2)在急性病毒感染过程中对T细胞的增殖、分化和功能的影响。方法模型一:淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染Fgl2基因敲除小鼠(实验组)与C57BL/6J对照小鼠,感染后第8天,检测T细胞的增殖、分化和功能。模型二:过继转移能够特异性识别LCMV的TCR转基因小鼠SMARTA或P14的T细胞到Fgl2基因敲除小鼠(实验组)和C57BL/6J对照小鼠内,LCMV感染后第8天,检测小鼠体内供体SMARTA或P14细胞的增殖和分化。结果FGL2在LCMV急性感染过程中表达上调(P<0.05);实验组和对照组的滤泡辅助T细胞(T_(FH))、Th1细胞和效应CD8^+T细胞的频率和数量均无明显差异(P>0.05);GC B细胞和浆细胞的数量和频率、LCMV特异性抗体的滴度以及效应CD8^+T细胞中表达TNF-α和CD107a/b的频率均无明显差异(P>0.05)。结论 FGL2在急性病毒感染过程中不影响T细胞的免疫应答。

老年2型糖尿病患者急性缺血性脑卒中凝血功能紊乱临床研究

目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)患者急性缺血性脑卒中(ACI)凝血功能的变化情况。方法选取2018年1月至2020年12月惠州市第一人民医院收治的60例老年T2DM伴ACI患者作为A组,选择同期60例单纯T2DM患者作为B组,选择同期60例健康体检者作为C组。所有入选者均检测凝血功能指标,比较三组凝血功能指标。另外将A组患者根据Adama分型进行分组,比较不同梗死面积患者凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)和D-D二聚体(D-D)]。结果A组PT、APTT均低于B、C组,FIB、D-D均高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B组PT、APTT均低于C组,FIB、D-D均高于C组,差异有统计学意义(P<0.05);大梗死组PT、APTT均低于小梗死组、腔隙性脑梗死组,FIB、D-D均高于小梗死组、腔隙性脑梗死组,差异有统计学意义(P<0.05);小梗死组PT、APTT均低于腔隙性脑梗死组,FIB、D-D均高于腔隙性脑梗死组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年T2DM伴ACI存在明显的凝血功能紊乱,且随着梗死面积的增加凝血指标异常更加明显,可作为反映患者病情严重程度、评估预后的重要参考指标。

2型糖尿病患者血脂及凝血四项与健康人的比较

本文通过对2型糖尿患者的凝血4项[凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、血浆纤维蛋白原（FIB）]及血脂的分析,探讨其与健康人的差异。

缺血再灌注损伤大鼠肾脏凝血纤溶相关蛋白的表达

目的观察缺血再灌注（IR）大鼠肾组织凝血纤溶相关物质的蛋白表达并探讨其意义。方法雄性Wistar大鼠48只被随机分为6组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注0、2、6、12、24h组（IR0h组、IR2h组、IR6h组、IR12h组、IR24h组），每组8只。用无创动脉夹夹闭双肾动脉45min建立IR模型。HE染色观察肾组织病理改变；免疫组织化学法检测肾组织内皮素（ET-1）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤维蛋白原样蛋白2（Fgl-2）凝血酶原酶蛋白的表达。结果与Sham组相比，IR24h组大鼠血BUN及Scr升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。IR各组肾组织病理改变程度随再灌注时间延长而逐渐加重；与Sham组相比，IR各组。肾小管损伤半定量评分明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。IR各组肾ET-1蛋白表达增加，6h达高峰，与Sham组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。IR各组肾FgI-2凝血酶原酶表达增加，12h达高峰，24h基本恢复正常，与Sham组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。肾组织t—PA表达增加，12h达高峰，与Sham组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肾脏IR损伤后存在肾组织凝血纤溶相关物质的异常表达，推测后者可能参与了肾脏IR损伤。

探讨2型糖尿病患者凝血四项检测的临床意义

目的探讨2型糖尿病患者凝血四项检测的临床意义。方法选取2型糖尿病患者100例,根据是否存在微血管病变,分为对照组(n=50)与观察组(n=50),对照组未合并微血管病变,观察组合并微血管病变,全部患者均接受血糖(Glu)、糖化血红蛋白(HbA1c)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)与纤维蛋白原(FIB)检测。结果观察组GIu与HbA1c水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组PT小于对照组,FIB水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2型糖尿病患者接受凝血四项检测,可使患者是否出现微血管病变得到有效诊断。