纤维蛋白平板法测定纳豆激酶方法的改进

对利用琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活力的方法进行了改进,对测定纳豆激酶活力的标准曲线的规律进行了研究。研究发现,当尿激酶活力在200U/mL～10000U/mL时,尿激酶活力的常用对数lgU与对应的溶圈面积S呈线性相关,其表达式的斜率与孵育时间、孵育温度和平板厚度有关。通过试验确定了测定纳豆激酶活力的最佳孵育时间为15h,此时的酶活测定标准曲线为:lgU=0.0052S+b,b值的确定方法为:将2种标准尿激酶液的酶活力和对应的溶圈面积分别带入标准曲线lgU=0.0052S+b中,分别求出其对应的修正系数b1、b2,以b=b1+2b2为标准曲线lgU=0.0052S+b的修正系数,利用此法计算酶活力的相对误差为0.22%。

薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法对纤溶酶活性的体外检测

用薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法体外检测了6种市售心血管药物的纤溶酶活性,结果与所检测药物的相关药理作用相符,表明薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法能够准确、可靠地进行纤溶酶活性的体外检测.

纤维蛋白平板法测定保健食品中纳豆激酶活力

目的:采用适宜方法,测定保健食品中的纳豆激酶活力。方法:应用纤维蛋白平板法,测定保健食品中的纳豆激酶活力。结果:在20 IU/ml～100 IU/ml浓度范围内,尿激酶活力与透明圈面积呈线性关系,且精密度与准确度良好,变异系数小于10%,加标回收率为94%。结论:纤维蛋白平板法适宜测定保健食品中纳豆激酶活力,方法简便、实用。并讨论了一些改进措施及注意事项。

大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶的研究

为研究大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶,通过对 6种树脂的吸附容量,吸附平衡时间,洗脱液等条件进行考察,筛选出了D4020和D3520两种分离效果较好的树脂。

基于蛋白酶活力的地龙酒制工艺优选

目的优化地龙酒制工艺。方法采用纤维蛋白平板法检测酶活力;以炮制温度、炮制时间、加酒量和焖润时间为考察因素,以蚯蚓纤溶酶活力为考察指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验法优选地龙酒制工艺参数。结果每100kg地龙,加黄酒12.5kg拌匀,焖润30min,70℃翻炒2min时,其酶活力最高(每克31.8万单位)。结论该炮制工艺稳定、可行,可用于地龙的酒制。

人血清白蛋白修饰的尿激酶与天然尿激酶的家兔体内过程比较

家兔静注人血清白蛋白修饰的尿激酶(MUK)和天然尿激酶(NUK)40000IU后,MUK 的体内过程符合零级速率过程,NUK 则符合一级速率过程,血纤溶活性 MUK 持续100min,而 NUK 仅20~25min。在“功能性”去除肝肾的家兔,NUK 血浓度半衰期延长3~4倍,而 MUK 血浓度下降与正常家兔相似。MUK 及 NUK 在去除纤溶抑制物的优球蛋白成份中纤溶活性相似,但在血浆中 NUK 仅存24~35%的纤溶活性,MUK 则保留了64~85%的纤溶活性。提示肝肾的摄取、代谢和消除能力降低及对血浆纤溶抑制物抵抗力增强,是 MUK 血纤溶活性长时间维持高水平的主要原因。

水蛭注射液抗血栓与抗凝血作用

目的研究水蛭注射液的抗血栓和抗凝血作用。方法采用体外血栓法、纤维蛋白平板法及全血血块法,观察水蛭注射液的抗血栓作用;采用家兔血浆复钙时间法、凝血酶时间法及凝血酶原时间法,观察水蛭注射液的抗凝血作用。结果水蛭注射液高剂量(1.0 kg.L-1)、中剂量(0.5 kg.L-1)和低剂量(0.25 kg.L-1)均能明显溶解体外血栓(P<0.001)、纤维蛋白平板(P<0.001)和全血凝块(作用显著);能显著延长家兔血浆复钙时间、凝血酶时间和凝血酶原时间(P<0.001)。结论水蛭注射液具有较强的抗血栓和抗凝血作用。

豆豉中纳豆杆菌的筛选和纳豆激酶的初步分离

利用改良的培养基 纤维蛋白平板法 ,从我国传统食品豆豉中筛选出具有高纤溶活性的纳豆杆菌菌株 ;菌株液体发酵法制得粗酶液 ,采用沉淀法及柱层析等方法从发酵液中初步分离纳豆激酶 ;并应用体外溶栓实验考察分析了纳豆激酶的纤溶活性 。

纳豆激酶分离纯化与鉴定

为了提高纳豆激酶的溶栓活性 ,从纳豆粗提物中分离纯化了纳豆激酶。采用Butyl Toyopearl柱层析对纳豆粗提物进行了分离纯化 ,以试管法确定和收集了活性部位 ,用纤维蛋白平板法测定了活力 ,并用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS PAGE)对分离纯化的效果进行了检验。考察了纳豆激酶粗提物在不同温度和湿度条件下的稳定性。结果表明在SDS PAGE中观察到三条明显的蛋白谱带 ,其中相对分子质量为 192 75和 2 710 1的区带具有与文献报道类似的纳豆激酶的相对分子质量和纤溶活性 ,而相对分子质量为 14 4 0 0的蛋白区带与文献报道的纳豆激酶的相对分子质量大有差异。纯化倍数为 5 0倍 ,活性回收率为 75 .5 7%。初步稳定性实验结果表明 :其外观在 4 0℃和 6 0℃保存条件下发生变化 ,纤溶活力在 6 0℃保存条件下发生显著变化。而 4℃条件下活力和外观却很少有变化 ;纳豆粗提物在不同湿度条件下均具有较强吸湿性。纳豆粗提物对高温和高湿稳定性较差。

tPA体外纤溶活性及半定量检测方法的确立

在原有的纤维蛋白平板溶圈法 (fibrin agarose plate assay,FAPA)检测系统中引入纤溶酶原 (plasminogen) ,使该法检测组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activator,t- PA)的灵敏度提高 30倍以上 ,达到 0 .0 1ng(约0 .0 0 1IU )水平 ;并对不同反应时间、纤维蛋白含量、琼脂糖凝胶厚度下的溶圈结果进行对比研究。结果表明 ,37℃温育18～ 2 4h可以得到较满意结果 ;其他因素虽不同程度地影响溶圈出现时间及大小 ,但对其溶圈梯度及标准曲线无明显影响。从而确立了以 FAPA为基础的快速、灵敏、可靠的重组 t- PA体外纤溶活性半定量检测方法。

两种纳豆激酶活性测定方法对比及相关性分析

从线性和精密度两个方面对纤维蛋白平板法和四肽底物法测定纳豆激酶活性的两种方法进行了比较研究,并验证了两种方法测定值之间的直线相关性。结果表明:纤维蛋白平板法和四肽底物法分别在10.77IU/mL～80.73IU/mL和0.03U/mL～0.09U/mL浓度范围内呈线性,且日间和日内变异系数均小于10%。两者结果具有直线相关性,其关系为纤维蛋白平板法测定值(IU)=264.87×四肽底物法测定值(U)-19.633,(R2=0.9942)。结论:纤维蛋白平板法与四肽底物法均能用于纳豆激酶活性测定,前者测定结果直接,但四肽底物法更灵敏,还可应用于高通量筛选。

中国传统豆豉溶栓活性的初步研究

豆豉中含有一种具溶栓功能的活性物质,利用纤维蛋白平板法对14种传统豆豉产品的溶栓活性物质进行研究。结果表明,豆豉提取物的溶栓活性为0.326～161.972尿激酶单位/mL。永川毛霉型豆豉提取物表现出最大的活性,达161.972尿激酶单位/mL,曲霉豆豉与辣豆豉活性较小。

纳豆激酶活性测定方法的比较

纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌经发酵产生的一种丝氨酸蛋白酶,可用于溶栓药物的开发。本文比较了两种测定纳豆激酶活性方法:琼脂糖——纤维蛋白平板法和枯草杆菌蛋白酶活力测定方法,为快速、准确地标示纳豆激酶的效价提供技术支撑。

中国根霉12~#纤溶酶活力单位的测定

主要阐述了根霉纤溶酶活性 (效价 )的测定方法 ,采用血纤维蛋白平板法 ,在以尿激酶为参照标准的情况下 。

高产纳豆激酶突变菌株产酶条件的研究

为了获得最佳产酶条件,通过研究不同碳源(葡萄糖、木糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉),氮源(牛肉膏、蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、硫酸铵),碳氮浓度比和无机离子组成的培养基发酵,利用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶的活性。得到纳豆激酶的最佳产酶条件为:1.5%蛋白胨,1.5%麦芽糖,0.05%硫酸镁,0.2%氯化钙,0.2%磷酸二氢钠和0.1%磷酸氢二钠;碳氮浓度比为1∶1。

纳豆激酶活性测定的方法学研究

目的:确定一种测定纳豆激酶活性的方法。方法:建立琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶的活性,并对本法与纤维蛋白平板法、琼脂糖．纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性的特点进行了比较。结果:琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性,具有溶圈明显、易于测量、机械强度好、操作简便、成本低等优点,该法的测定下限为55IU·mL^(-1),精确测定范围为326．6～2 200IU·mL^(-1)。结论:琼脂粉-纤维蛋白平板法可以测定纳豆激酶的活性。

响应面法优化固载纳豆菌发酵鹰嘴豆工艺

采用响应面法确定固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的最佳工艺条件,为发酵鹰嘴豆的进一步开发利用提供技术参考。在单因素试验的基础上,以pH值、发酵时间和发酵温度为影响因素,以发酵鹰嘴豆的溶栓活力为响应值,根据中心组合试验原理设计(Central Composite Design)3因素3水平响应面试验,对固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的工艺进行优化。通过响应面分析建立发酵鹰嘴豆溶栓活力(Y)对pH值(A)、发酵时间(B)、发酵温度(C)的二次回归模型:Y=1861.47-74.56A+305.50B-28.82C+203.66AB+30.82AC-18.16BC-244.11A^2-203.68B2-70.64C^2(R^2=0.9981),模型的拟合程度良好,其中pH值、发酵时间、发酵温度对发酵鹰嘴豆的溶栓活力均有极显著的影响(P<0.01),pH值与发酵时间的交互作用对发酵鹰嘴豆的溶栓活力也有极显著的影响(P<0.01),pH值与发酵温度的交互作用对发酵鹰嘴豆的溶栓活力则表现出显著的影响(P<0.05)。固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的最佳工艺条件为:在pH 6.5、发酵时间58.5h、发酵温度37.5℃的条件下进行发酵,得到的发酵鹰嘴豆的溶栓活力达1976.24IU/g,与理论预测值1989.13IU/g接近。采用响应面法优化固载纳豆菌发酵鹰嘴豆工艺溶栓活力良好,优化后的新工艺可在实际生产中推广应用,并作为新型溶栓保健功能食品大规模在市场上推广。

基于分光光度法构建纳豆激酶纤溶活性快速测定方法

为建立一种快捷、有效的纳豆激酶纤溶活性测定方法,在研究纤维蛋白平板法的基础上,构建了以透明圈面积为中间参数的纳豆激酶纤溶活力与吸光度值之间关系模型,通过测定纳豆激酶显色反应中的吸光度值,直接获得纳豆激酶的纤溶活性。结果显示改进后的酪蛋白方法可行,其模型方程为y=1877.77x-481.08(R2=0.9924)。验证结果显示模型相关性强,准确度较高,操作简便、快速、检测成本低,是一种高效的纳豆激酶纤溶活性快速检测方法。

纳豆激酶活性测定方法

对先后建立的纤维平板法等几种测定纳豆激酶活性的方法进行概括总结介绍。